Ở tuổi 9 tuần, những con chuột được làm bệnh tiểu đường bằng 5 lượng tiêm 100 mg/kg của streptozotocin hơn 5 ngày. Tại tuần lễ thứ mười, các loài động vật được chia thành 4 Nhóm: hợp chất của nhóm kiểm soát ví dụ 1, hợp chất của ví dụ 1 điều trị nhóm (130 mg/kg/ngày trong thực phẩm trong 6 tuần), tham khảo các hợp chất kiểm soát nhóm, tham khảo các hợp chất điều trị nhóm (130 mg/kg/ngày trong thực phẩm trong 6 tuần). Những con chuột được hy sinh tại 15 tuần sau khi gây mê bằng cách sử dụng isoflurane. Các aortas được gỡ bỏ, mổ xẻ và đông lạnh trong nitơ lỏng.Các aortas là mặt đất đóng băng, và tất cả RNA được chiết xuất bằng cách sử dụng bộ vi RNeasy ® (Qiagen). Phiên mã ngược sau đó được thực hiện trên 1 μg RNA tất cả bằng cách sử dụng bộ tổng hợp đầu tiên lõi cDNA SuperscriptTM III (Invitrogen). Biểu hiện của VCAM 1 định lượng bởi Đảng Cộng sản Romania thời gian thực và normalised đối với 3 tài liệu tham khảo gen: -actin, hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase (HPRT) và glyceraldehyde phosphate dehydrogenase (GAPDH). The IQTM SYBR ® xanh supermix kit (Biorad) được sử dụng, với 2 ml của cDNA và 150nM của mỗi mồi. Các mẫu được denatured trong 5 phút tại 95° C và khuếch đại cho 40 chu kỳ phù hợp với các giao thức sau đây: denaturation cho 20 giây 95 ° C và lai và kéo dài trong 1 phút 54 ° C cho VCAM-1, actin và HPRT, và 56 ° C cho GAPDH. Chu kỳ ngưỡng (được định nghĩa là chu kỳ mà huỳnh quang được coi là đáng kể cao hơn những tiếng ồn) cho VCAM-1 của các loài động vật không được điều trị là normalised đối với các tài liệu tham khảo gen (và được coi là 100%) và sau đó so sánh với các loài động vật được điều trị.
đang được dịch, vui lòng đợi..
