Fig 2. CRISPR/Cas9-mediated clearan

Fig 2. CRISPR/Cas9-mediated clearance of EBV genomes from latently infected Burkitt’s lymphoma cells.
a) Anti-EBV gRNAs induce a potent loss of EBV genomes from latently infected cells. Burkitt’s lymphoma Akata-Bx1 cells latently infected with eGFP-EBV (endogenously driving eGFP expression) were transduced with anti-EBV gRNAs targeting EBNA1, OriP, or control genes and selected with puromycin for 2 days. Subsequently, the cells were monitored for the presence of EBV-eGFP by flow cytometry 21 days post transduction. The percentage of eGFP negative cells as measure for EBV-eGFP loss is indicated. b) Combinatorial anti-EBV gRNA treatment of Akata-Bx1 cells causes increased loss of EBV genomes from latently infected cells. Similar experimental set-up as in a), but with a larger set of anti-EBV gRNAs and combinations thereof introduced through sequential application of two separate CRISPR vectors. The percentage of EBV-eGFP negative cells is presented. c) Samples from b) were subjected to qPCR to quantify the relative EBV genome content in the indicated gRNA-expressing Akata-Bx1 cells. Since the amplified region in the qPCR lies outside the genomic region that is targeted by the gRNAs, the qPCR can also detect mutated, yet repaired EBV variants. For all bar diagrams, measurements for (at least) triplicate experiments + STD are presented.

Kết quả (Việt) 1:

Hình 2. CRISPR/Cas9-trung gian giải phóng mặt bằng của EBV bộ gen từ tế bào bị nhiễm latently Burkitt của ung thư hạch.a) gRNAs anti-EBV gây mất mạnh EBV bộ gen từ tế bào bị nhiễm latently. Ung thư hạch nhân Burkitt Akata-Bx1 tế bào latently bị nhiễm eGFP – EBV (endogenously lái xe biểu hiện eGFP) đã được transduced với anti-EBV gRNAs nhắm mục tiêu EBNA1, OriP, hoặc kiểm soát gen và lựa chọn với puromycin trong 2 ngày. Sau đó, các tế bào đã được giám sát đối với sự hiện diện của EBV-eGFP dòng chảy cytometry 21 ngày post dẫn truyền. Tỷ lệ phần trăm tế bào tiêu cực eGFP như các biện pháp để EBV-eGFP cân được chỉ định. b) tổ hợp chống – EBV gRNA điều trị của các tế bào Akata-Bx1 gây ra tăng cân EBV bộ gen từ tế bào bị nhiễm latently. Thiết lập thử nghiệm tương tự như trong một), nhưng với một bộ lớn hơn của anti-EBV gRNAs và kết hợp đó được giới thiệu thông qua trình tự áp dụng hai vectơ CRISPR riêng biệt. Tỷ lệ phần trăm của các tế bào tiêu cực EBV-eGFP được trình bày. c) mẫu từ b) đã được chịu các qPCR để định lượng các nội dung bộ gen EBV tương đối trong các tế bào Akata-Bx1 thể hiện gRNA được chỉ định. Kể từ khi vùng khuếch đại qPCR nằm bên ngoài vùng gen nhắm mục tiêu của các gRNAs, qPCR cũng có thể phát hiện các phiên bản EBV đột biến, chưa sửa chữa. Cho tất cả bar sơ đồ, đo lường cho các thí nghiệm (ít nhất) triplicate + STD được trình bày.

Kết quả (Việt) 2:

Hình 2. CRISPR / Cas9 qua trung gian giải phóng mặt bằng của hệ gen EBV từ các tế bào lympho Burkitt của tiềm tàng nhiễm.
A) Chống EBV gRNAs gây ra một sự mất mát mạnh của bộ gen EBV từ các tế bào tiềm tàng nhiễm. U lympho tế bào Akata-Bx1 Burkitt của tiềm tàng nhiễm EGFP-EBV (nội sinh lái xe biểu EGFP) đã được tải nạp với mục tiêu chống EBV gRNAs EBNA1, OriP, hoặc gen kiểm soát và lựa chọn với puromycin 2 ngày. Sau đó, các tế bào được theo dõi sự hiện diện của EBV-EGFP bởi dòng cytometry 21 ngày sau khi truyền. Tỷ lệ EGFP tế bào tiêu cực như là biện pháp để giảm EBV-EGFP được chỉ định. b) tổ hợp chống EBV gRNA điều trị các tế bào Akata-Bx1 nguyên nhân tăng mất của bộ gen EBV từ các tế bào tiềm tàng nhiễm. Tương tự như thí nghiệm thiết lập như trong một), nhưng với một tập hợp lớn hơn chống EBV gRNAs và kết hợp cả hai giới thiệu thông qua áp dụng tuần tự của hai vectơ CRISPR riêng biệt. Tỷ lệ phần trăm của các tế bào tiêu cực EBV-EGFP được trình bày. c) Các mẫu từ b) đã phải chịu qPCR để định lượng các nội dung bộ gen EBV tương đối trong gRNA-hiện tế bào Akata-Bx1 chỉ định. Kể từ khi khu vực khuếch đại trong qPCR nằm bên ngoài khu vực của bộ gen đó là mục tiêu của gRNAs, các qPCR cũng có thể phát hiện các đột biến, chưa sửa chữa biến EBV. Đối với tất cả các biểu đồ thanh, đo cho (ít nhất) thí nghiệm ba lần + STD được trình bày.