2.2. Purification of the Enzyme fro

2.2. Purification of the Enzyme from the Crude Extract. The purification of tyrosinase was performed by the method of Kamahldin et al. [16], with minor modification. Crude enzyme extract purified by salt precipitation, dialysis, gel filtration, ion exchange chromatography, and so forth has been employed in series so as to obtain the enzyme in its purest form.The pure enzyme thus produced can be used for the further analysis.
2.3. Ammonium Sulphate Precipitation and Dialysis. Ammonium sulphate precipitation was done in an ice bath using the finely grounded ammoniumsulfate.The powder wasweighed and added slowly to the extract by constant stirring to ensure complete solubility, and the solution was centrifuged at 5000 rpm for 30min at 4∘C. Different precipitation steps were carried out for tyrosinase enzyme precipitation (45– 80%) and precipitates were collected. The precipitate was dialyzedagainst 100mMpotassiumphosphatebuffer (pH7.0) for 24 h by changing the buffer thrice. The dialyzed fraction was used for tyrosinase activity and protein content.
2.4. Assay of Tyrosinase Activity. The tyrosinase activity assay was performed as reported by Sung and Cho [17] spectrophotometrically,measuring conversion of L-DOPA to red colored oxidation product dopachrome. The initial rate of reaction is proportional to concentration of the enzyme. An aliquot containing tyrosinase was incubated for 5min at 35∘C at time zero, 1mL of L-DOPA solution (4mg/mL) for measured at 475 nm. After incubation for additional 5min, the mixture was shaken again and a second reading was determined and was measured for 3 minutes.The change in absorbance was proportional to enzyme concentration. One unit of enzyme corresponded to the amount which catalyzed the transformation of 1

Kết quả (Việt) 1:

2.2. thanh lọc của Enzyme từ các chiết xuất dầu thô. Dùng làm sạch tyrosinase được thực hiện bằng phương pháp của Kamahldin et al. [16], với sửa đổi nhỏ. Thô enzym chiết xuất tinh khiết bởi muối mưa, chạy thận, gel lọc, sắc kí trao đổi ion và vv đã được dùng trong loạt để có được enzym ở dạng tinh khiết nhất của nó.Tinh khiết enzym do đó sản xuất có thể được sử dụng để phân tích thêm.2.3. amoni sulfat mưa và chạy thận. Amoni sulfat mưa đã được thực hiện trong một bồn tắm đá bằng cách sử dụng ammoniumsulfate mịn căn cứ.Wasweighed bột và thêm từ từ vào các chiết xuất bởi khuấy thường xuyên để đảm bảo độ hòa tan hoàn chỉnh, và các giải pháp được ly 5000 rpm trong 30 phút tại 4∘C. Khác nhau mưa bước đã được thực hiện cho tyrosinase enzym mưa (45-80%) và kết tủa được thu thập. Precipitate là dialyzedagainst 100mMpotassiumphosphatebuffer (pH7.0) cho 24 h bằng cách thay đổi các bộ đệm ba lần. Các phần dialyzed được sử dụng cho hoạt động tyrosinase và protein nội dung.2.4. khảo nghiệm hoạt động Tyrosinase. Tyrosinase hoạt động khảo nghiệm được thực hiện theo báo cáo của Sung và Cho [17] spectrophotometrically, đo chuyển đổi L-DOPA để quá trình oxy hóa màu đỏ sản phẩm dopachrome. Lệ phản ứng, ban đầu là tỷ lệ thuận với nồng độ của enzym. Một aliquot có tyrosinase được ủ trong 5 phút tại 35∘C tại thời điểm 0, 1mL L-DOPA giải pháp (4mg/mL) cho đo tại 475 nm. Sau khi ủ bệnh cho bổ sung 5 phút, hỗn hợp rung động một lần nữa và một đọc thứ hai đã được xác định và được đo trong 3 phút.Sự thay đổi trong hấp thu là tỷ lệ thuận với nồng độ enzym. Một đơn vị của enzyme tương ứng với số tiền mà xúc tác chuyển đổi 1