Scavenging of DPPH radicalScavengin

Scavenging of DPPH radical
Scavenging effect of phenolics from the crude extracts was monitored as described by Amarowicz et al. [2002]. A 0.1 mL methanolic solution containing 0.5 to 2.5 mg of extract was mixed with 2 mL of methanol and then added to a methano- lic solution of DPPH (1 mmol/L 0.25 mL). The mixture was vortexed for 1 min, then left to stand at room temperature for 20 min and the absorbance of this solution was subsequently read at 517 nm.

Reducing power
Reducing power of the crude extracts was determined as described by Oyaizu [1986]. The suspension of the extract was mixed with 2.5 mL of 0.2 mol/L phosphate buffer (pH 6.6)

and 2.5 mL of 1% (w/v) potassium ferricyanide. The mixture was incubated at 50oC for 20 min. Following this, 2.5 mL of 10% (w/v) trichloroacetic acid was added and the mixture was then centrifuged at 1750 × g for 10 min. A 2.5 mL aliquot of the upper layer was mixed with 2.5 mL of distilled water and
0.5 mL of 0.1% (w/v) FeCl ; the absorbance of the mixture was read at 700 nm.

Separation of phenolic acids from extract
Separation of phenolic acids (free, esterified, and glyco- sided) was carried out according to Amarowicz & Weidner [2001]. The samples obtained in this way were injected onto an HPLC column.

HPLC analysis of phenolic acids
Phenolic acids were analysed using a Shimadzu HPLC system (Shimadzu Corp., Kyoto, Japan) consisting of a LC-
-10AD pump, SCL 10A system controller and SPD-M 10A photo-diode array detector. Phenolic acids separation was done by a prepacked Luna 100 RP-18 column (4 × 250 mm, 5 μm; Phenomenex). The mobile phase water-acetonitrile- acetic acid (88:10:2; v/v/v) [Amarowicz & Weidner, 2001] was delivered at a rate of 1 mL/min. The detection was monitored at 280 and 320 nm.

RESULTS AND DISCUSSION

The content of total phenolics in the extracts of grapevine leaves depended on the solvent used for extraction (Table 1). The use of 80% acetone resulted in the higher content of total phenolics (257 mg/g) than 80% methanol (232 mg/g). The same tendency was observed for results expressed in relation of leaves dry and fresh matter.
The UV spectra were similar for both extracts (Figure 1). The maxima were noted for 336 nm (acetone extract) and 340 nm (methanolic extract). The strong absorption bands at 330-340 nm can be caused by the presence of hydroxycinnamic acid deriva- tives and flavanols in the extracts [Amarowicz & Weidner, 2001; Mabry et al., 1970]. The presence of flavanols in grapevine leaves was reported before by Amarowicz et al. [2007].
The yield of condensed tannins extraction was higher for 80% acetone (167 A /g) than 80% methanol (142 A /g) (Ta-
TABLE 1. Content of total phenolics in the extracts and grapevine leaves.

Kết quả (Việt) 1:

Nhặt rác của DPPH cực đoanNhặt rác có hiệu lực của phenolics từ các chất chiết xuất dầu thô đã được giám sát như được mô tả bởi Amarowicz et al. [2002]. Một giải pháp methanolic 0.1 mL có chứa 0,5-2,5 mg chiết xuất được pha với 2 mL methanol và sau đó thêm vào dung dịch methano-lic DPPH (1 mmol/L 0,25 mL). Hỗn hợp vortexed cho 1 phút, sau đó lại đứng ở nhiệt độ phòng cho 20 phút và hấp thu của giải pháp này sau đó được đọc tại 517 nm.Giảm mạnhGiảm sức mạnh của các chất chiết xuất dầu thô đã được xác định như được mô tả bởi Oyaizu [năm 1986]. Đình chỉ giải nén được trộn với 2.5 mL cách 0.2 mol/L phosphat đệm (pH 6.6) và 2.5 mL của 1% (w/v) kali ferricyanide. Hỗn hợp được ủ ở 50oC trong 20 phút. Sau này, 2,5 mL Axit tricloaxetic 10% (w/v) đã được bổ sung và hỗn hợp được sau đó ly tại 1750 × g cho 10 phút. Một aliquot 2.5 mL của lớp trên được trộn với 2.5 mL nước cất vàcách 0.5 mL 0.1% (w/v) FeCl; sự hấp thu của hỗn hợp được đọc tại 700 nm.Tách axit phenolic từ giải nénTách axit phenolic (miễn phí, Este, và glyco mặt) được thực hiện theo Amarowicz & Weidner [2001]. Các mẫu thu được bằng cách này đã được tiêm vào một cột HPLC.Hệ HPLC phân tích axít phenolicAxit phenolic đã được phân tích bằng cách sử dụng một hệ thống Shimadzu HPLC (Shimadzu Corp, Kyoto, Nhật bản) bao gồm một LC--Máy bơm 10AD, SCL 10A hệ thống điều khiển và SPD-M 10A photo-diode mảng máy dò. Axit phenolic tách được thực hiện bởi một cột Luna 100 RP-18 prepacked (4 × 250 mm, 5 μm; Phenomenex). Điện thoại di động pha nước-acetonitrile - axit axetic (88:10:2; v/v/v) [Amarowicz & Weidner, 2001] đã được chuyển giao tại một tỷ lệ 1 mL/phút. Phát hiện được theo dõi tại 280 và 320 nm.KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬNNội dung của tất cả phenolics trong chất chiết xuất từ lá cây nho phụ thuộc vào dung môi được sử dụng cho khai thác (bảng 1). Việc sử dụng 80% axeton kết quả nội dung cao của phenolics tổng (257 mg/g) hơn 80% methanol (232 mg/g). Xu hướng tương tự đã được quan sát cho kết quả thể hiện trong mối quan hệ của lá khô và tươi các vấn đề.Quang phổ UV đều tương tự như đối với cả hai chất chiết xuất (hình 1). Maxima các đã được ghi nhận là 336 nm (acetone trích) và 340 nm (methanolic trích). Các ban nhạc hấp thụ mạnh tại 330-340 nm có thể được gây ra bởi sự hiện diện của axit hydroxycinnamic deriva-tives và flavanols trong chiết xuất [Amarowicz & Weidner, 2001; Mabry et al., 1970]. Sự hiện diện của flavanols trong lá cây nho đã được báo cáo trước khi bởi Amarowicz et al. [2007].Sản lượng khai thác tanin ngưng tụ cao cho 80% axeton (167 A /g) hơn 80% methanol (142 A /g) (Ta-BẢNG 1. Nội dung của tất cả phenolics trong chất chiết xuất từ lá cây nho.

Kết quả (Việt) 2:

Nhặt phế liệu của DPPH triệt để
hiệu quả nhặt rác của phenolics từ các chất chiết xuất dầu thô được theo dõi như mô tả của Amarowicz et al. [2002]. Một giải pháp methanol 0,1 ml chứa 0,5-2,5 mg chiết xuất được trộn với 2 ml methanol và sau đó thêm vào một giải pháp LIC methano- của DPPH (1 mmol / L 0,25 mL). Hỗn hợp được vortexed trong 1 phút, sau đó còn lại để yên ở nhiệt độ phòng trong 20 phút và độ hấp thụ của dung dịch này sau đó đã được đọc ở 517 nm.

Giảm năng lượng
Giảm sức mạnh của các chất chiết xuất dầu thô được xác định như mô tả của Oyaizu [1986]. Việc tạm đình chỉ chiết xuất được trộn với 2,5 ml dung dịch 0,2 mol / L đệm phosphate (pH 6.6)

và 2,5 ml dung dịch 1% (w / v) potassium ferricyanide. Hỗn hợp được ủ ở 50oC trong 20 phút. Sau này, 2,5 ml dung dịch 10% (w / v) trichloroacetic acid được thêm vào và hỗn hợp này sau đó được ly tâm ở 1750 × g trong 10 phút. Một 2,5 mL lớp trên được trộn với 2,5 ml nước cất và
0,5 ml dung dịch 0,1% (w / v) FeCl; độ hấp thụ của hỗn hợp đã được đọc ở 700 nm.

Tách axit phenolic từ dịch chiết
tách axit phenolic (miễn phí, este hóa, và glyco- mặt) được thực hiện theo Amarowicz & Weidner [2001]. Các mẫu thu được theo cách này được tiêm vào một cột HPLC.

HPLC phân tích của các axit phenolic
Phenolic axit được phân tích bằng cách sử dụng hệ thống Shimadzu HPLC (Shimadzu, Kyoto, Nhật Bản) bao gồm một LC-
bơm -10AD, điều khiển hệ thống SCL 10A và SPD-M 10A photo-diode array detector. Axit phenolic tách được thực hiện bởi một đóng gói sẵn Luna 100 RP-18 cột (4 × 250 mm, 5 mm; Phenomenex). Pha động axit nước acetonitrile- axetic (88: 10: 2; v / v / v) [Amarowicz & Weidner, 2001] đã được giao tại một tỷ lệ 1 ml / phút. Các phát hiện được theo dõi tại 280 và 320 nm.

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Nội dung của tổng phenol trong các chất chiết xuất lá nho phụ thuộc vào dung môi dùng để chiết xuất (Bảng 1). Việc sử dụng 80% acetone dẫn nội dung cao hơn tổng số phenolics (257 mg / g) so với 80% methanol (232 mg / g). Xu hướng tương tự cũng được quan sát cho kết quả thể hiện trong mối quan hệ của lá chất khô và tươi.
Các quang phổ tia cực tím cũng tương tự cho cả hai chiết xuất (Hình 1). Cực đại đã được ghi nhận cho 336 nm (acetone trích) và 340 nm (methanol). Các dải hấp thụ mạnh tại 330-340 nm có thể được gây ra bởi sự hiện diện của những mục axit deriva- hydroxycinnamic và flavanol trong chiết xuất [Amarowicz & Weidner, 2001; Mabry et al., 1970]. Sự hiện diện của flavanol trong lá nho đã được báo cáo trước bởi Amarowicz et al. [2007].
Sản lượng khai thác tannin ngưng tụ cao hơn 80% acetone (167 A / g) so với 80% methanol (142 A / g) (Ta-
BẢNG 1. Nội dung tổng phenol trong chiết xuất và lá nho.