Plants with properly developed leav

Plants with properly developed leaves and stems were derived from bright green calluses with dark green meristematic structures inside callus tissue. No shoots were regenerated from white and yellow calluses without meristematic zones. In total, only sixteen calluses of genotypes BC-1, BC-6 and BN-OP-01 regenerated shoots; several previously mentioned calli produced more than one shoot. All regenerated plants were characterized by certain level of hyperhydricity; such type of plants was described also by Jourdan and Earle (1989) in the protoplast culture of four Brassica species, Hu et al., 1999 in Brassica napus and B. juncea. This undesirable physiological state was eliminated by repeated subcultivation on MS medium without growth regulators.
It is evident, that only the proper combination of PEG 6000 concentrations and time durations can provide satisfactory fusion frequency. From results can be concluded that all the 30 % PEG solutions provided good results (about 8% of fusants) together with 25% PEG solution with the period of 20 minutes. The efficiency of these combinations is comparable with the results, obtained by Gurel et al. (2002). Even higher frequency of fusants was observed by Beranek et al. (2006) on protoplast fusions between B. carinata and B. rapa, where the 30% PEG 6000 MW treatment for 10 minutes achieved about 25% of fusants. Both 20% PEG concentrations and shorter period of 25% concentration showed rather low efficiency. However, both combinations with 30% PEG solution increased the number of multifusants, unfavourable for practical applications. Analogous to the production of calli, significant differences between biological replicates in fusion frequency were detected as well. These circumstances might be explained by the heterogeneity of fused material during experiments even if all measurable environmental conditions were maintained. Protoplasts of fused cultures regenerated cell walls and first divisions were observed after 4th day of the culture. Small calli, approx. 1-2 mm in diameter turned brown-yellow and did not develop desired callus structures. Similar results were defined by Beranek et al. (2007) in Brassica carinata and Brassica rapa genotypes.

Kết quả (Việt) 2:

Cây có lá phát triển đúng và thân cây đã được bắt nguồn từ những cục chai màu xanh lá cây tươi sáng với các cấu trúc mô phân sinh màu xanh đậm bên trong mô sẹo. Không có chồi được tái sinh từ vết chai màu trắng và màu vàng mà không có vùng mô phân sinh. Trong tổng số, chỉ có mười sáu vết chai của các kiểu gen BC-1, BC-6 và BN-OP-01 chồi tái sinh; nhiều mô sẹo đã đề cập trước đây sản xuất nhiều hơn một buổi chụp hình. Tất cả các cây tái sinh này được đặc trưng bởi mức độ nhất định của hyperhydricity; loại như vậy của nhà máy đã được mô tả cũng bởi Jourdan và Earle (1989) trong nền văn hóa kiểu mẫu đầu tiên của bốn loài Brassica, Hu et al., 1999 tại Brassica napus và B. juncea. Trạng thái sinh lý không mong muốn này đã bị loại bởi subcultivation lặp đi lặp lại trên môi trường MS không có điều hòa sinh trưởng.
Đó là điều hiển nhiên, rằng chỉ có sự kết hợp đúng đắn của PEG 6000 nồng độ và thời gian thời gian có thể cung cấp kết hợp tần số thỏa đáng. Từ các kết quả có thể kết luận rằng tất cả các giải pháp PEG 30% cung cấp kết quả tốt (khoảng 8% fusants) cùng với 25% dung dịch PEG với thời gian 20 phút. Hiệu quả của những kết hợp này có thể so sánh với các kết quả thu được bằng Gürel et al. (2002). Tần số cao hơn của fusants đã được quan sát bởi Beranek et al. (2006) về sự hợp nhất giữa nguyên hình B. carinata và B. rapa, nơi 30% PEG 6000 trị MW trong 10 phút đạt được khoảng 25% của fusants. Cả hai nồng độ PEG 20% và thời gian ngắn hơn nồng độ 25% cho thấy hiệu quả khá thấp. Tuy nhiên, cả hai kết hợp với giải pháp PEG tăng 30% số lượng multifusants, không thuận lợi cho các ứng dụng thực tế. Tương tự như việc sản xuất các mô sẹo, sự khác biệt đáng kể giữa các lần lặp lại trong sinh học kết hợp tần số đã được phát hiện như là tốt. Những trường hợp có thể được giải thích bởi tính không đồng nhất của vật liệu hợp nhất trong các thí nghiệm ngay cả khi tất cả các điều kiện môi trường đo lường được duy trì. Bào trần của các nền văn hóa hợp nhất tái sinh tế bào và các bộ phận đầu tiên được quan sát thấy sau ngày thứ 4 của nền văn hóa. Mô sẹo nhỏ, xấp xỉ. 1-2 mm đường kính biến màu nâu vàng và không phát triển cấu trúc mô sẹo mong muốn. Kết quả tương tự cũng được xác định bởi Beranek et al. (2007) trong Brassica carinata và kiểu gen rapa Brassica.