Table 2. The different ingredients

Table 2. The different ingredients of the meridic diet used in
rearing the red palm weevil, Rhynchophorus ferrugineus
Component Amount
Distilled water 875 ml
Agar 18.5 g
Brewer's yeast 45 g
Wheat grains 45 g
Corn flour 45 g
Sorbic acid 1.6 g
Ascorbic acid 4 g
Aminobenzoic acid 1.6 g
Pharmaton®
capsule (1.55g/capsule) 2 capsules
Tetracycline (250 mg) 2 capsules
DPRC produced yeast (Saccharomyces cerevisiae) 25 ml
Table 3. Percentage of amino and fatty acids in the DPRC yeast,
Saccharomyces cerevisiae used in the meridic diet for rearing of
Rhynchophorus ferrugineus.
Amino acid % Fatty acid %
Aspartic 0.40 Caprylic 0.010
Threonine 0.47 Capric 0.025
Serine 0.26 Lauric 0.175
Glutamic 0.79 Myristic 0.640
Glycine 0.26 Myristoleic 0.140
Alanine 0.58 Pentadecanoic 0.065
Valine 0.57 Palmitic 11.100
Methionine 0.27 Palmitoleic 35.095
Isoleucine 0.26 Margaric 0.110
Leucine 0.49 Stearic 5.560
Tyrosine 0.72 Elaidic 0.140
Phenyalanine 0.42 Oleic 43.240
Histidine 0.36 Linoleic 0.850
Lysine 1.02 Eicosanoic 0.080
Arginine 0.52 Linolenic 0.135
Tryptophan 0.09 Docosanoic 0.150
Cysteine 0.07 Tetracosanoic 0.095
Pentacosanoic 0.140
Hexacosanoic 0.745
Heptacosanoic 0.070
Octacosanoic 0.050
development of the larvae, since they are concealed
inside the palm tissues. The present study was thus
carried out to formulate a meridic diet for mass
production of RPW with the following objectives:
1. Develop a process and quality control system to
assure availability of high quality research insects
including production of different developmental stages of
the weevil of comparable physiological status for
bioassay experiments.
2. Assurance of continuous supply of experimental
insects throughout the year.
MATERIALS AND METHODS
The meridic diet
The larval diet used for mass rearing of RPW was modified from
that developed by Martin and Cabello (2006). The amino acid
mixture used was replaced in our diet with yeast (Saccharomyces
cerevisiae Meyen ex. E.C. Hansen) produced from date syrup at
DPRC. The main ingredients of our diet included agar,
commercially available baker’s yeast as well as produced from date
syrup at DPRC, wheat meal, corn flour, in addition to other basic
ingredients (Table 2). The DPRC produced yeast is rich in amino
and fatty acids and substituted for the commercially available amino
acid mixture as recommended by Martin and Cabello (2006). The
amino acids and fatty acids profiles of the DPRC produced yeast
are shown in Table 3. PharmatonTM capsules were added to diet to
provide vitamins and minerals (Table 4). PharmatonTM is
manufactured by Ginsana SA, Bioggio, Switzerland on behalf of
Boehringer Ingelheim international GmbH Germany. Tetracycline
250 mg, produced by Julphar, Gulf pharmaceutical industries, Ras
Al Khaimah, U.A.E. was also incorporated as an antimicrobial
agent.
Baker's yeasts
The Baker's yeasts used in this study were a commercial Safinstant
active dry Baker's yeast (S. I. Lesaffre 59703 Marcq,
France) and a strain from Specialized Laboratory: A
Saccharomyces cerevisiae strain NCYC 1530 (laboratories of the
National Center Britain). The strain NCYC 1530 was provided in a
freeze-dried form and was kept in its original form until use. This
yeast was produced using date syrup as described by Al-Eid et al.
(2009) and Al-jasass et al. (2010) and was used in the meridic diet.
Fats and fatty acid profile in the yeast reported here were
determined according to the A.O.A.C. (1995) official method No.
996.01, amino acid composition of the proteins according to the
method No. 994.12 and Tryptophan according to the method No.
988.15.
Diet preparation
The basic diet was prepared based on the protocol of Martin and
Cabello, 2006. Thirty seven gram of agar was mixed in 875 ml
distilled water in glass beaker. The mixture was put in a microwave
oven at maximum potency for 8 min and stirred using magnetic
stirrer at 2, 4 and 6 min to dissolve the agar. The mixture was
removed from the oven to facilitate each stirring and finally removed
at 8 min. The main ingredients were mixed with agar jelly using a
kitchen blender which was previously washed with distilled water
and surface sterilized with 0.5% sodium hypochlorite. The mixture
was homogenized at high speed for 2 to 3 min and left to cool till
60°C. As the diet cooled, two multi-vitamins (PharmatonTM)
capsules and one tetracycline tablet were added while stirring the
media. The diet was then poured into surface sterilized plastic
containers while still warm and left to solidify and kept in the
refrigerator for further use. Before being used, the cups containing
diets were kept at room temperature to warm up. Small hole was
El-Shafie et al. 1927
Table 4. Vitamins complex, minerals and trace elements used in the preparation of 1000 g of diet
for rearing Rhynchophorus ferrugineus
Vitamins Amount Minerals and trace elements Amount
Vitamin A 5334 IU Copper 4.0 mg
Vitamin D3 400 IU Selenium 100.0 mg
Vitamin E 20.0 mg Manganese 5.0 mg
Vitamin B1 2.8 mg Iron 20.0 mg
Vitamin B2 3.2 mg Zinc 2.0 mg
Vitamin B6 4.0 mg Calcium 200 mg
Vitamin B12 2.0 mg lecithin 200 mg
Biotin 300 mg Magnesium 20.0 mg
Nicotinamide 36.0 mg
Vitamin C 120.0 mg
Folic acid 0.2 mg
made on the diet surface to facilitate the feeding and burrowing of
the neonate larvae. Diet cups were covered with a lid vented by
several small holes.
Test insects
Adult RPW females and males were captured using insecticide-free
pheromone (Ferrolure TM) traps deployed by Directorate of
Agriculture in Al-Ahsa, Saudi Arabia. Active weevils were carefully
selected from freshly captured collections, placed in perforated
plastic containers and brought to the entomology laboratory of the
Date Palm Research Center (DPRC). Weevils were sexed based
on the presence of a tuff of fine bristles on the dorsal end of the
rostrum in males and which were absent in females.
Collection and incubation of eggs
The collected insects were paired and kept in small plastic
containers for mating. They were provided with a piece of
sugarcane and left for at least 24 h. The males were removed
thereafter, and the females were observed for egg laying. For
production of maximum number of eggs, the females were put in an
incubator at 27°C for 3 to 4 days.
The pieces of sugarcane in each container were carefully
inspected and peeled to search for eggs which were collected and
transferred into petri dishes using a fine camel hair brush. Only
clean ivory colored and shining eggs were collected. The petri
dishes contained cotton pads soaked in 10% sugar solution to
provide nutrients for the newly hatched larvae before being
transferred to the artificial diet. A 90 mm diameter Watman paper
was then put on top of the cotton pad to retain the moisture. The
eggs were then kept for three days in an incubator at 27°C and
50% RH for hatching. The newly hatched larvae were then carefully
transferred to cups containing artificial diet. At the early stage of
larval development, only one larva was placed into each cup to
avoid cannibalism. From the 4th instar onwards, 3 to 5 larvae were
put together in one cup. Cups of three different sizes (30, 50 and
200 ml) were used for small (neonate: 1 to 3rd instar larvae),
medium (4 to 5th
instar larvae) and large (6 to 8th instar larvae)
specimens respectively.
Development of immature stages
Immediately after hatching, one neonate was carefully transferred
to each 30 ml plastic cup containing 5 g diet with a fine camel hair
brush (n=12). Diet cups with the larvae were checked daily for signs
of moult (cast skins and head capsules). As the larvae grew, they
were transferred to larger diet cups as mentioned previously. The
larval instars were determined by the number of moults. Visible
exuviae including presence of head capsules in the diet were used
as evidence of moulting. The surviving larvae were transferred daily
into new diet cups after inspection. The development of Larvae was
followed until they reached pupation. The time periods between
instars as well as the number of moults were recorded.
Increase in larval biomass
In order to follow the increase in larval biomass, the mean weight of
larvae (n=24) was recorded every three days starting from the first
day of hatching till the last instar. The absolute increase in body
biomass (weight/time) was determined using a sensitive four-digit
electric balance, AL 204 Mettler Toledo manufactured by MettlerToledo
Group.
Width of larval head capsule
A digital vernier caliper was used to measure the width of larval
head capsules. The head capsules of the first and second instars
were measured by using microscopy digital USB Camera
(OptikamTM) programmed with Optika vision pro 4.1 software as
these larval stages were too small to handle with a vernier caliper.
Permanent microscopic slides of the first and second instars head
capsules were prepared for the measurements using Canada
balsam as mounting medium. The postmoult/premoult ratios of
head capsule width in successive larval ecdyses were tested using
Dyar's rule (Klingenberg and Zimmermann, 1992).
Food-fiber pupation technique
One of the challenges in the successful rearing of RPW on a
meridic diet is to get the final instar larvae to pupate. Entomologists
have extensively used sugarcane stem for this purpose. However,
the diameter of stem is a determining factor in the success of this
process. Sugarcane stem with narrow diameter usually leads to
small size adults in addition to its low efficiency (adult emergence).
The food-fiber pupation technique as the name implies, consisted of
two layers of date palm fiber and a layer of sugarcane pieces (15
cm long), split longitudinally and stacked side by side to make a

Kết quả (Việt) 1:

Bảng 2. Các thành phần khác nhau của chế độ ăn uống meridic được sử dụng trongnuôi red palm weevil, Rhynchophorus ferrugineusSố lượng thành phầnChưng cất nước 875 mlAgar 18.5 gMen bia 45 gLúa mì ngũ cốc 45 gBột ngô 45 gAxit sorbic 1.6 gAscorbic acid 4 gAminobenzoic acid 1.6 gPharmaton ®viên nang (1,55 g/viên nang) 2 viên nangTetracycline (250 mg) 2 viên nangDPRC sản xuất nấm men (Saccharomyces cerevisiae) 25 mlBảng 3. Tỷ lệ phần trăm của axit amin và béo trong nấm men DPRC,Saccharomyces cerevisiae được sử dụng trong chế độ ăn uống meridic cho nuôi dạyRhynchophorus ferrugineus.Axit amin % axit béo %Aspartic 0,40 Caprylic 0.010Threonine 0.47 Capric 0.025Serine 0,26 Lauric 0.175Glutamic 0,79 Myristic 0.640Glycine 0,26 Myristoleic 0.140Alanine 0,58 Pentadecanoic 0,065Valine 0,57 Palmitic 11.100Methionin 0,27 Palmitoleic 35.095Isoleucine 0,26 Margaric 0.110Leucine 0.49 Stearic 5.560Tyrosine 0,72 Elaidic 0.140Phenyalanine 0,42 Oleic 43.240Histidine 0,36 Linoleic 0.850Lysine 1.02 Eicosanoic 0.080Arginine 0,52 Linolenic 0.135Tryptophan 0,09 Docosanoic 0.150Cysteine 0,07 Tetracosanoic 0.095Pentacosanoic 0.140Hexacosanoic 0.745Heptacosanoic 0.070Octacosanoic 0,050phát triển của ấu trùng, kể từ khi họ được che dấubên trong các mô palm. Nghiên cứu hiện nay là do đóthực hiện để xây dựng một chế độ ăn uống meridic cho khối lượngsản xuất của RPW với các mục tiêu sau đây:1. phát triển một hệ thống quá trình và kiểm soát chất lượng đểđảm bảo tính khả dụng của cao chất lượng nghiên cứu côn trùngbao gồm cả sản xuất khác nhau các giai đoạn phát triển củamọt tình trạng sinh lý so sánhthí nghiệm bioassay.2. đảm bảo cung cấp liên tục thử nghiệmcôn trùng trong suốt năm.VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁPChế độ ăn uống meridicChế độ ăn uống ấu trùng được sử dụng cho hàng loạt nuôi dạy RPW sửa đổi từmà phát triển bởi Martin và Cabello (2006). Axít aminhỗn hợp được sử dụng được thay thế trong chế độ ăn uống của chúng tôi với nấm men (Saccharomycescerevisiae Mey ví dụ: EC Hansen) sản xuất từ ngày xi-rô tạiDPRC. Các thành phần chính của chế độ ăn uống của chúng tôi bao gồm agar,thương mại có sẵn nấm men baker's cũng như sản xuất từ ngàyxi-rô tại DPRC, Bữa ăn lúa mì, bột ngô, ngoài cơ bản khácthành phần (bảng 2). DPRC sản xuất men là giàu aminvà axit béo và thay thế cho thương mại có sẵn aminhỗn hợp axit như được đề nghị bởi Martin và Cabello (2006). Cácaxit amin và axit béo hồ sơ của DPRC sản xuất menĐang hiển thị trong bảng 3. PharmatonTM viên nang đã được thêm vào chế độ ăn uống đểcung cấp vitamin và khoáng chất (4 bàn). PharmatonTM làsản xuất bởi Ginsana SA, Bioggio, Thuỵ Sỹ đại diện choBoehringer Ingelheim quốc tế GmbH Đức. Tetracycline250 mg, sản xuất bởi Julphar, ngành công nghiệp dược phẩm Vịnh, RasAl Khaimah, U.A.E. cũng được kết hợp như là một kháng khuẩnĐại lý.Baker của nấm menNấm men 's Baker được sử dụng trong nghiên cứu này đã là một Safinstant thương mạihoạt động Baker's Men khô (S. I. Lesaffre 59703 Marcq,Pháp) và một căng thẳng từ phòng thí nghiệm chuyên ngành: ASaccharomyces cerevisiae căng thẳng NCYC 1530 (phòng thí nghiệm của cácTrung tâm quốc gia Anh). Sự căng thẳng NCYC 1530 được cung cấp trong mộtđông khô hình thức và đã được giữ ở dạng bản gốc của nó cho đến khi sử dụng. Điều nàynấm men được sản xuất bằng cách sử dụng xi-rô ngày như được mô tả bởi Al-Eid et al.(2009) và Al-jasass et al. (2010) và được sử dụng trong chế độ ăn uống meridic.Chất béo và acid béo hồ sơ trong men báo cáo ở đâyxác định theo phương pháp chính thức của A.O.A.C. (1995) không996.01, acid amin thành phần của các protein theo cácphương pháp số 994.12 và Tryptophan theo phương pháp số988.15.Chuẩn bị chế độ ăn uốngChế độ ăn uống cơ bản đã được chuẩn bị dựa trên giao thức của Martin vàCabello, 2006. Ba mươi bảy gam agar được trộn lẫn trong 875 mlnước cất trong ly cốc. Hỗn hợp đã được đặt trong một lò vi sóngLò nướng lúc tối đa tiềm năng cho 8 phút và khuấy bằng cách sử dụng từkhuấy mật lúc 2, 4 và 6 phút để hòa tan agar. Hỗn hợploại bỏ từ lò nướng để tạo thuận lợi cho mỗi khuấy và cuối cùng loại bỏlúc 8 phút. Các thành phần chính được trộn với agar thạch bằng cách sử dụng mộtMáy xay sinh tố nhà bếp mà trước đó được rửa sạch với nước cấtvà bề mặt tiệt trùng với 0,5% natri hypoclorit. Hỗn hợphomogenized ở tốc độ cao nhất 2-3 phút và trái để mát mẻ đến60° C. Như chế độ ăn uống làm mát bằng nước, hai đa vitamin (PharmatonTM)viên nang và tetracycline một viên thuốc đã được thêm vào trong khi khuấy cácphương tiện truyền thông. Chế độ ăn uống sau đó đổ vào bề mặt nhựa tiệt trùngđồ đựng trong khi vẫn còn ấm áp và trái để củng cố và giữ trong cácTủ lạnh cho tiếp tục sử dụng. Trước khi được sử dụng, ly có chứachế độ ăn được giữ ở nhiệt độ phòng ấm lên. Lỗ nhỏEl-Shafie et al. 1927Bảng 4. Vitamin phức tạp, khoáng chất và nguyên tố được sử dụng trong việc chuẩn bị của 1000 g của chế độ ăn uốngcho nuôi Rhynchophorus ferrugineusVitamin số lượng khoáng chất và nguyên tố số tiềnVitamin A 5334 IU đồng 4.0 mgVitamin D3 400 IU selen là 100.0 mgVitamin E 20,0 mg mangan 5.0 mgVitamin B1 2,8 mg sắt 20,0 mgVitamin B2 3,2 mg kẽm 2.0 mgVitamin B6 4.0 mg canxi 200 mgVitamin B12 2.0 mg lecithin 200 mgBiotin 300 mg magiê 20,0 mgNicotinamide 36.0 mgVitamin C 120.0 mgCách 0.2 mg axit folicthực hiện trên bề mặt chế độ ăn uống để tạo điều kiện cho ăn và burrowing củaẤu trùng ăn neonate. Chế độ ăn uống ly được che phủ bằng một nắp hơi bởimột số lỗ nhỏ.Kiểm tra côn trùngDành cho người lớn RPW nữ và nam giới đã chiếm được sử dụng miễn phí thuốc trừ sâupheromone (Ferrolure TM) bẫy được triển khai bởi CụcNông nghiệp ở Al-Ahsa, ả Rập Saudi. Những con mọt hoạt động đã cẩn thậnchọn từ bộ sưu tập mới bị bắt, đặt trong đục lỗthùng nhựa cứng và mang đến cho phòng thí nghiệm côn trùng học của cácNgày trung tâm nghiên cứu Palm (DPRC). Những con mọt đã sexed dựatrên sự hiện diện của một tuff tốt lông trên phía lưng của cácmõm ở nam giới và đó đã vắng mặt ở phụ nữ.Bộ sưu tập và trứngCác loài côn trùng được thu thập được kết nối và giữ trong nhựa nhỏhộp đựng giao phối. Họ được cung cấp với một mảnhmía và còn lại để ít nhất là 24 h. Đàn ông đã được gỡ bỏsau đó, và những phụ nữ đã được quan sát để đẻ trứng. Chosản xuất của các số lượng tối đa của trứng, những phụ nữ đã được đặt trong mộtvườn ươm ở 27° C cho 3 đến 4 ngày.Các mảnh mía trong thùng chứa mỗi đã cẩn thậnkiểm tra và bóc vỏ để tìm kiếm trứng được thu thập vàchuyển vào món ăn petri bằng cách sử dụng một bàn chải tốt đẹp lạc đà tóc. Chỉsạch ngà voi màu và sáng trứng được thu thập. Petrimón ăn chứa bông miếng ngâm trong 10% giải pháp đường đểcung cấp chất dinh dưỡng cho ấu trùng mới nở trước khi cóchuyển sang chế độ ăn uống nhân tạo. 90 mm đường kính Watman giấysau đó được đặt trên đầu trang của pad bông để giữ lại độ ẩm. Cáctrứng sau đó được giữ trong ba ngày trong một vườn ươm ở 27° C và50% RH cho nở. Ấu trùng nở mới đã sau đó cẩn thậnchuyển đến ly có chế độ ăn uống nhân tạo. Ở giai đoạn đầu củaẤu trùng phát triển, chỉ có một ấu trùng được đưa vào mỗi cốc đểtránh ăn thịt đồng loại. Từ 4 instar trở đi, 3-5 ấu trùngĐặt lại với nhau trong một cốc. Ly của ba kích cỡ khác nhau (30, 50 và200 ml) đã được sử dụng cho nhỏ (neonate: 1 đến 3 instar ấu trùng),Trung bình (4 đến 5Instar ấu trùng) và lớn (6 đến 8 instar ấu trùng)mẫu vật tương ứng.Phát triển của giai đoạn nonNgay sau khi nở, một neonate đã được chuyển giao một cách cẩn thậnđể mỗi ly nhựa 30 ml có chế độ ăn uống 5 g với một mái tóc tốt đẹp lạc đàBàn chải (n = 12). Chế độ ăn uống ly với ấu trùng đã được kiểm tra hàng ngày cho các dấu hiệucủa sự thay lông (diễn viên da và viên nang đầu). Khi ấu trùng lớn, họđược chuyển đến chế độ ăn uống ly lớn hơn như đã đề cập trước đó. CácẤu trùng instars đã được xác định bởi số lượng moults. Có thể nhìn thấyexuviae bao gồm sự hiện diện của viên nang đầu trong chế độ ăn uống đã được sử dụnglàm bằng chứng của nhưng. Ấu trùng ăn còn sống sót được chuyển hàng ngàythành mới chế độ ăn uống ly sau khi kiểm tra. Việc phát triển của ấu trùngtheo sau cho đến khi họ đạt pupation. Khoảng thời gian giữainstars cũng như số lượng moults được ghi nhận.Tăng Ấu sinh khốiĐể thực hiện theo sự gia tăng trong Ấu sinh khối, trọng lượng trung bình củaẤu trùng ăn (n = 24) đã được ghi lại mỗi ba ngày bắt đầu từ đầu tiênngày của nở đến cuối instar. Sự gia tăng tuyệt đối trong cơ thểnhiên liệu sinh học (trọng lượng/giờ) đã được xác định bằng cách sử dụng một bốn chữ nhạy cảmsự cân bằng điện, AL 204 Mettler Toledo được sản xuất bởi MettlerToledoNhóm.Chiều rộng của viên nang đầu ấu trùngMột thước cặp cơ kỹ thuật số được sử dụng để đo chiều rộng của ấu trùngviên nang đầu. Các viên nang đầu của instars đầu tiên và thứ haiđược đo bằng cách sử dụng kính hiển vi kỹ thuật số USB máy ảnhLập trình (OptikamTM) với Optika tầm nhìn chuyên nghiệp 4.1 phần mềm nhưnhững giai đoạn ấu trùng đã được quá nhỏ để xử lý với một thước cặp cơ.Permanent microscopic slides of the first and second instars headcapsules were prepared for the measurements using Canadabalsam as mounting medium. The postmoult/premoult ratios ofhead capsule width in successive larval ecdyses were tested usingDyar's rule (Klingenberg and Zimmermann, 1992).Food-fiber pupation techniqueOne of the challenges in the successful rearing of RPW on ameridic diet is to get the final instar larvae to pupate. Entomologistshave extensively used sugarcane stem for this purpose. However,the diameter of stem is a determining factor in the success of thisprocess. Sugarcane stem with narrow diameter usually leads tosmall size adults in addition to its low efficiency (adult emergence).The food-fiber pupation technique as the name implies, consisted oftwo layers of date palm fiber and a layer of sugarcane pieces (15cm long), split longitudinally and stacked side by side to make a

Kết quả (Việt) 2:

Bảng 2. Các thành phần khác nhau của chế độ ăn uống meridic sử dụng trong
nuôi trồng các loài mọt cọ đỏ, Rhynchophorus ferrugineus
Component Số tiền
nước 875 ml cất
Agar 18,5 g
nấm men 45 g Brewer của
hạt lúa mì 45 g
bột ngô 45 g
axit Sorbic 1,6 g
axit Ascorbic 4 g
aminobenzoic axit 1,6 g
Pharmaton®
viên nang (1.55g / viên) 2 viên
Tetracycline (250 mg) 2 viên
DPRC sản xuất nấm men (Saccharomyces cerevisiae) 25 ml
Bảng 3. Tỷ lệ amin và các axit béo trong men DPRC,
Saccharomyces cerevisiae được sử dụng trong các meridic chế độ ăn uống để nuôi dưỡng
Rhynchophorus ferrugineus.
Amino axit% axit béo%
Aspartic 0,40 Caprylic 0,010
Threonine 0.47 Capric 0,025
Serine 0,26 lauric 0,175
Glutamic 0,79 myristic 0,640
Glycine 0.26 Myristoleic 0,140
Alanine 0,58 Pentadecanoic 0,065
Valine 0,57 Palmitic 11,100
Methionine 0.27 palmitoleic 35,095
isoleucine 0,26 Margaric 0,110
Leucine 0,49 Stearic 5,560
Tyrosine 0.72 Elaidic 0,140
Phenyalanine 0,42 Oleic 43,240
histidine 0,36 Linoleic 0,850
Lysine 1.02 Eicosanoic 0.080
Arginine 0,52 Linolenic 0,135
Tryptophan 0.09 Docosanoic 0,150
Cysteine ​​0.07 Tetracosanoic 0,095
Pentacosanoic 0,140
Hexacosanoic 0,745
Heptacosanoic 0.070
Octacosanoic 0,050
phát triển của ấu trùng, kể từ khi họ được giấu
bên trong mô cọ. Do đó nghiên cứu này đã được
thực hiện để xây dựng một chế độ ăn uống meridic cho khối lượng
sản xuất của RPW với các mục tiêu sau đây:
1. Xây dựng quy trình và hệ thống kiểm soát chất lượng để
đảm bảo tính sẵn sàng của các loài côn trùng nghiên cứu chất lượng cao
bao gồm cả sản xuất của các giai đoạn phát triển khác nhau của
các loài mọt ngũ cốc của tình trạng sinh lý có thể so sánh với
thí nghiệm xét nghiệm sinh học.
2. Bảo đảm cung cấp liên tục thử nghiệm
các loài côn trùng trong suốt cả năm.
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Các chế độ ăn uống meridic
Chế độ ăn của ấu trùng được sử dụng để nuôi khối lượng của RPW đã được sửa đổi từ
đó phát triển bởi Martin và Cabello (2006). Các axit amin
được sử dụng hỗn hợp đã được thay thế trong chế độ ăn uống của chúng tôi với nấm men (Saccharomyces
cerevisiae Meyen ex. EC Hansen) được sản xuất từ ngày syrup tại
DPRC. Các thành phần chính của chế độ ăn uống của chúng tôi bao gồm thạch,
thương mại có sẵn men bánh mì cũng như sản xuất từ ngày
syrup tại DPRC, bột mì, bột ngô, ngoài cơ bản khác
thành phần (Bảng 2). Các DPRC sản xuất nấm men rất giàu amino
và các axit béo và thay thế cho các amino thương mại
hỗn hợp axit theo khuyến cáo của Martin và Cabello (2006). Các
axit amin và axit béo cấu hình của DPRC sản xuất nấm men
được thể hiện trong Bảng 3. PharmatonTM viên nang đã được bổ sung vào chế độ ăn uống để
cung cấp vitamin và khoáng chất (Bảng 4). PharmatonTM được
sản xuất bởi Ginsana SA, Bioggio, Thụy Sĩ thay mặt
Boehringer Ingelheim quốc tế GmbH Đức. Tetracycline
250 mg, được sản xuất bởi Julphar, ngành công nghiệp dược phẩm Vịnh, Ras
Al Khaimah, UAE cũng được thành lập như một kháng sinh
agent.
nấm men Baker của
nấm men của Baker được sử dụng trong nghiên cứu này là một Safinstant thương mại
hoạt động khô nấm men Baker (SI Lesaffre 59.703 Marcq,
Pháp) và căng thẳng từ phòng thí nghiệm chuyên ngành: Một
chủng Saccharomyces cerevisiae NCYC 1530 (phòng thí nghiệm của các
quốc gia Trung tâm Anh). Sự căng thẳng NCYC 1530 được cung cấp trong một
dạng đông khô và đã được giữ ở dạng ban đầu của nó cho đến khi sử dụng. Đây
men được sản xuất sử dụng ngày syrup như mô tả của Al-Eid et al.
(2009) và Al-jasass et al. (2010) và được sử dụng trong chế độ ăn uống meridic.
Chất béo và axit béo trong nấm men đã được báo cáo ở đây
xác định theo AOAC (1995) phương pháp chính thức số
996,01, thành phần acid amin của protein theo
phương pháp số và 994,12 Tryptophan theo phương pháp số
988,15.
Chế độ ăn uống chuẩn bị
Chế độ ăn cơ bản đã được chuẩn bị dựa trên giao thức của Martin và
Cabello, 2006. Ba mươi bảy gram agar được trộn lẫn trong 875 ml
nước cất trong cốc thủy tinh. Hỗn hợp này được đặt trong một lò vi sóng
lò nướng ở hiệu lực tối đa trong 8 phút và khuấy sử dụng từ
máy khuấy vào lúc 2, 4 và 6 phút để hòa tan thạch. Hỗn hợp này được
lấy ra khỏi lò để tạo điều kiện từng khuấy và cuối cùng loại bỏ
lúc 8 phút. Các thành phần chính đã được pha trộn với thạch thạch bằng cách sử dụng một
máy xay sinh tố bếp mà trước đó đã được rửa sạch bằng nước cất
và khử trùng bề mặt với 0,5% sodium hypochlorite. Hỗn hợp này
được đồng nhất với tốc độ cao cho 2-3 phút và còn lại để nguội đến
60 ° C. Khi chế độ ăn nguội, hai đa vitamin (PharmatonTM)
viên nang và một tetracycline máy tính bảng đã được thêm vào trong khi khuấy các
phương tiện truyền thông. Các chế độ ăn uống sau đó đổ vào khử trùng bề mặt nhựa
container trong khi vẫn còn ấm và còn lại để củng cố và giữ trong
tủ lạnh để sử dụng tiếp. Trước khi được sử dụng, cốc có chứa
thức ăn được giữ ở nhiệt độ phòng ấm lên. Lỗ nhỏ là
El-Shafie et al. 1927
Bảng 4. Vitamin phức tạp, khoáng chất và các nguyên tố vi lượng được sử dụng trong việc chuẩn bị 1000 g của chế độ ăn uống
để nuôi Rhynchophorus ferrugineus
Vitamin Số tiền khoáng và nguyên tố Số tiền
Vitamin A 5334 IU Copper 4,0 mg
Vitamin D3 400 IU Selenium 100,0 mg
Vitamin E 20,0 mg Mangan 5,0 mg
Vitamin B1 2,8 mg sắt 20,0 mg
Vitamin B2 3,2 mg Kẽm 2,0 mg
Vitamin B6 4,0 mg Calcium 200 mg
Vitamin B12 2,0 mg lecithin 200 mg
Biotin 300 mg Magnesium 20.0 mg
Nicotinamide 36,0 mg
Vitamin C 120,0 mg
axit folic 0.2 mg
thực hiện trên bề mặt chế độ ăn uống để thuận lợi cho việc nuôi dưỡng và đào hang của
ấu trùng sơ sinh. Ly Diet được bao phủ bằng một nắp thông hơi bằng
nhiều lỗ nhỏ.
côn trùng thử nghiệm
dành cho người lớn nữ RPW và nam giới bị bắt cách sử dụng thuốc trừ sâu-free
pheromone (Ferrolure TM) bẫy được triển khai bởi Cục
Nông nghiệp trong Al-Ahsa, Ả Rập Saudi. Mọt hoạt động đã cẩn thận
lựa chọn từ bộ sưu tập mới bắt, bị đục
hộp nhựa và đưa đến các phòng thí nghiệm côn trùng học của
Trung tâm Nghiên cứu gia Palm (DPRC). Mọt đã được xác định giới tính dựa
vào sự hiện diện của một tuff của lông tốt trên vây lưng cuối cùng của
lễ đài ở nam giới và đó đã vắng mặt ở phụ nữ.
Bộ sưu tập và ấp trứng
Những con côn trùng thu được ghép với nhau và giữ trong nhựa nhỏ
đựng cho giao phối. Họ được cung cấp với một mảnh của
mía và để lại ít nhất là 24 h. Những con đực đã được gỡ bỏ
sau đó, và cái được quan sát cho đẻ trứng. Đối với
sản xuất số lượng tối đa của trứng, cái được đặt trong một
lồng ấp ở 27 ° C trong 3-4 ngày.
Các mẩu mía trong từng container đã cẩn thận
kiểm tra và bóc vỏ để tìm kiếm trứng được thu thập và
chuyển vào đĩa petri sử dụng một bàn chải lông lạc đà tốt. Chỉ
ngà sạch màu và trứng sáng đã được thu thập. Các petri
món ăn chứa miếng bông ngâm trong dung dịch đường 10% để
cung cấp chất dinh dưỡng cho ấu trùng mới nở trước khi được
chuyển giao cho các chế độ ăn nhân tạo. A 90 mm ​​đường kính giấy Watman
sau đó được đặt trên đầu trang của các miếng bông để giữ lại độ ẩm. Các
trứng này sau đó giữ cho ba ngày trong một lồng ấp ở 27 ° C và
50% RH để ấp. Ấu trùng mới nở được sau đó cẩn thận
chuyển sang chế độ ăn uống cốc có chứa nhân tạo. Vào giai đoạn đầu của
sự phát triển của ấu trùng, chỉ có một ấu trùng đã được đặt vào mỗi cốc để
tránh ăn thịt người. Từ instar thứ 4 trở đi, 3-5 ấu trùng đã được
đặt lại với nhau trong một cốc. Tách ba kích cỡ khác nhau (30, 50 và
200 ml) đã được sử dụng cho nhỏ (trẻ sơ sinh: 1 đến ấu trùng tuổi thứ 3),
trung bình (từ 4 đến 5
ấu trùng tuổi) và lớn (từ 6 đến ấu trùng tuổi thứ 8)
mẫu vật tương ứng.
Phát triển chưa trưởng thành giai đoạn
ngay sau khi nở, một trẻ sơ sinh đã được chuyển giao một cách cẩn thận
cho mỗi cốc nhựa 30 ml chứa 5 g chế độ ăn uống với một mỹ lạc đà tóc
chải (n = 12). Chế độ ăn uống ly với ấu trùng đã được kiểm tra hàng ngày các dấu hiệu
của sự thay lông (da dàn diễn viên và viên nang đầu). Khi ấu trùng lớn lên, họ
đã chuyển sang chế độ ăn uống ly lớn hơn như đã đề cập trước đó. Các
instars ấu trùng được xác định bởi số lượng moults. Visible
exuviae bao gồm sự hiện diện của viên nang đầu trong chế độ ăn uống đã được sử dụng
như bằng chứng về lột xác. Các ấu trùng còn sống sót đã được chuyển giao hàng ngày
vào cốc chế độ ăn uống mới sau khi kiểm tra. Sự phát triển của ấu trùng được
theo sau cho đến khi họ đạt đến hóa nhộng. Các khoảng thời gian giữa
instars cũng như số lượng moults đã được ghi lại.
Tăng sinh khối ấu trùng
Để thực hiện theo sự gia tăng sinh khối của ấu trùng, trọng lượng trung bình của
ấu trùng (n = 24) được ghi nhận mỗi ba ngày bắt đầu từ đầu
ngày nở cho đến khi instar cuối cùng. Sự gia tăng tuyệt đối trong cơ thể
sinh khối (trọng lượng / thời gian) được xác định bằng cách sử dụng một bốn chữ nhạy cảm
cân bằng điện, AL 204 Mettler Toledo sản xuất bởi MettlerToledo
Group.
Chiều rộng của ấu trùng nang đầu
A vernier caliper kỹ thuật số được sử dụng để đo chiều rộng của ấu trùng
nang đầu . Các viên nang đầu của instars đầu tiên và thứ hai
được đo bằng cách sử dụng kính hiển vi kỹ thuật số USB Camera
(OptikamTM) lập trình với tầm nhìn Optika pro 4.1 phần mềm như
các giai đoạn ấu trùng này quá nhỏ để xử lý với một caliper vernier.
slide hiển vi thường trực của instars đầu tiên và thứ hai đầu
viên nang đã được chuẩn bị cho các phép đo sử dụng Canada
balsam như lắp vừa. Tỷ lệ postmoult / premoult của
chiều rộng đầu viên nang trong ecdyses ấu trùng tiếp đã được thử nghiệm bằng cách sử dụng
quy tắc Dyar của (Klingenberg và Zimmermann, 1992).
Kỹ thuật hóa nhộng Thực phẩm-xơ
Một trong những thách thức trong việc nuôi thành công của RPW trên một
chế độ ăn uống meridic là để có được thức ấu trùng tuổi để thành nhộng. Côn trùng học
đã sử dụng rộng rãi gốc mía cho mục đích này. Tuy nhiên,
đường kính của thân cây là một nhân tố quyết định sự thành công của việc này
quá trình. Mía gốc có đường kính hẹp thường dẫn đến
người lớn kích thước nhỏ, ngoài việc có hiệu quả thấp (người lớn xuất hiện) của nó.
Các kỹ thuật hóa nhộng thực phẩm nhiều chất xơ như tên của nó, bao gồm
hai lớp sợi cọ ngày và một lớp mảnh mía (15
cm dài), chia theo chiều dọc và xếp chồng lên nhau sát cánh để thực hiện một