Cloning the 3' End of the GeneAliqu

Cloning the 3' End of the Gene

Aliquots of genomic Bst DNA were digested with Sst I and subjected to electrophoresis on 1% agarose gels, and Southern blotted as described above. The transfer membranes were then probed separately with six different labelled oligonucleotides and autoradiographed as described above. As shown in FIG. 5, labelled oligonucleotides 16, 20, 24 and 25 hybridized to an Sst I fragment approximately 2.1 kb in length. These oligonucleotides were designed based upon Bca DNA polymerase sequences near the 3' end of the gene. Two other oligonucleotides, 15 and 21, based upon Bca sequences toward the 5' end of the gene, did not hybridize to this Sst I fragment. These results indicated that the Sst I restriction site could be used to isolate a genomic DNA fragment containing the 31 end of the gene.

Twenty five μg of purified Bst genomic DNA was digested with Sst I and subjected to electrophoresis on a 1% agarose gel. Gel slices were excised in a region of the gel corresponding to approximately 2.1 kb. The DNA was purified from the gel slices as described above; approximately 0.45 μg were recovered.

Kết quả (Việt) 1:

Nhân bản 3' cuối của genAliquots gen Bst DNA tiêu hóa với Sst tôi và phải chịu sự điện trên gel 1% agarose, và miền Nam blotted như mô tả ở trên. Màng truyền đã được sau đó thăm dò một cách riêng biệt với sáu oligonucleotides khác nhau dán nhãn và autoradiographed như mô tả ở trên. Như minh hoạ trong hình 5, với nhãn hiệu oligonucleotides 16, 20, 24 và 25 cặp để một Sst tôi đoạn khoảng 2.1 kb dài. Các oligonucleotides được thiết kế dựa trên trình tự Bca ADN polymerase gần 3' cuối của gen. Hai oligonucleotides khác, 15 và 21, dựa trên Bca chuỗi 5' cuối của gen, đã không lai để này Sst tôi mảnh. Những kết quả này chỉ ra rằng Sst tôi hạn chế trang web có thể được sử dụng để cô lập một mảnh DNA gen có cuối gen, 31.Hai mươi lăm μg của tinh khiết Bst gen DNA tiêu hóa với Sst tôi và phải chịu sự điện trên một gel agarose 1%. Gel lát đã excised trong một khu vực của gel tương ứng với khoảng 2.1 kb. DNA tinh khiết từ các lát gel như mô tả ở trên; khoảng 0.45 μg đã được phục hồi.

Kết quả (Việt) 2:

Nhân bản '3 End của Gene phân ước của gen Bst DNA đã được tiêu hóa với SST tôi và bị điện di trên gel agarose 1%, và Nam xoá nhoà như mô tả ở trên. Các màng chuyển sau đó được thăm dò riêng rẽ với sáu oligonucleotide dán nhãn khác nhau và autoradiographed như mô tả ở trên. Như thể hiện trong hình. 5, oligonucleotide có nhãn 16, 20, 24 và 25 lai với một SST tôi mảnh khoảng 2,1 kb dài. Những oligonucleotide được thiết kế dựa trên DNA polymerase BCA chuỗi gần 3 'của gen. Hai oligonucleotide khác, 15 và 21, dựa trên trình tự BCA về phía đầu 5 'của gen, không lai này SST tôi mảnh. Những kết quả này chỉ ra rằng các trang web hạn chế SST tôi có thể được sử dụng để tách một đoạn DNA của bộ gen chứa 31 của gen. Hai mươi năm mg tinh khiết Bst DNA của bộ gen đã được tiêu hóa với SST tôi và bị điện di trên gel agarose một 1%. Gel lát được cắt trong một khu vực của gel tương ứng với khoảng 2,1 kb. Các DNA đã được tinh sạch từ gel lát như mô tả ở trên; khoảng 0,45 mg đã được thu hồi.