We investigated the use of in vitro

We investigated the use of in vitro techniques for regeneration of adventitious shoots in Phyllanthus niruri, an anti-malarial plant as an initial effort towards its domestication. Fruits cultured on Murashige and Skoog (1962) basal medium (MS) supplemented with BAP had low germination (61%) due to seed coat imposed dormancy. The culture of nodal cuttings explants on BAP, kinetin or 2-isopentyl adenine (2iP) amended medium to avoid seed dormancy resulted in shoot regeneration without roots in all accessions with BAP producing the highest number of shoots (9.0). Subsequent inclusion of either 1naphthalene acetic acid (NAA) or indole-3-butyric acid (IBA) in the BAP, kinetin or 2iP amended MS medium also produced only shoots. Leaf lobe explants cultured on only 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D) amended medium led to a significant calli development with 1 mg/L 2,4-D producing 100, 88.9 and 95.8% callus, respectively from Kwabenya, Kasoa and Aburi accessions. Subsequent transfer of calli to MS medium supplemented with 0.1 mg/L BAP led to calli growth (increase in weight) and morphogenic response depending on the concentration of 2,4-D in the induction medium. Only 55 and 25% of these calli from Kwabenya and Kasoa, respectively produced shoots while roots development was significantly higher ranging from 48 to 88.9%. These shoots did not survive ex-vitro acclimatisation due to hyperhydricity while those regenerated from nodal cuttings or seeds had high percentage survival. The high morphogenetic response of Phyllanthus niruri in vitro can be used to propagate this anti malarial plant and enhance its utilization in the treatment of malaria.

Key words: Shoot regeneration, morphogenic response, Phyllanthus niruri, accessions.



INTRODUCTION

Malaria is reported to be one of the major fatal diseases endemic in tropical Africa (Asase et al., 2005) posing risk to over half a billion people in the tropics. It is transmitted by female Anopheles mosquito and its causative vector is Plasmodium falciparum. Several attempts by government agencies in most African countries to eradicate the




*Corresponding author. E-mail: [e-mail].

Abbreviations: MS, Murashige and Skoog (1962); BAP, 6benzylaminopurine; 2iP, 2-isopentyl adenine; NAA, 1naphthalene acetic acid; IBA, indole-3-butyric acid; 2,4-D, 2,4dichlorophenoxy acetic acid.
disease has proved futile due to resistance developed by the plasmodium parasite against conventional therapeutic drugs. Also, the host female Anopheles mosquito has developed resistance to insecticides as a result of high rate of mutation (Anto et al., 2009). Coupled with these problems is the high cost of the classical drugs used for the treatment of the disease, thus, making them unaffordable by the indigenous people living in endemic areas.
The search for alternative medicine from medicinal plant species has therefore been a major concern to governments all over the world. Phyllanthus niruri (amarus) an annual euphorbia widely distributed in the tropics has traditionally been identified as an important anti-plasmodial plant which can be used to treat the disease (Fasihuddin and Ghazally, 2003). Subeki et al. (2005) have shown that 1-O-galloyl-6-O-luteoyl-alpha-dglucose obtained from boiled extracts of P. niruri had anti-plasmodial activities. Besides, its anti-plasmodial activity, extracts from the plant has been used for the treatment of jaundice, diabetes, and liver disorders (Banerjee and Chattopadhyay, 2010). It also has a strong activity against hepatitis B virus (HBV) (Shim et al., 2000) and C virus (HCV) (Bhattacharyya and Bhattacharya, 2003). The hepato protective effect of the plant has been attributed to the presence of the active ingredients phyllantin (PH) and hypophyllantin (HPH) (Banerjee and Chattopadhyay, 2010).
In spite of its medicinal importance, P. niruri is still harvested in the wild with no effort to domesticate or commercially grow it for sustainable exploitation and utilization. The continuous collection of the plant from the wild without its domestication may lead to genetic extinction as a result of over exploitation. Thus, in vitro mode of propagation should be employed to produce planting materials for commercial farming of the plant.
The use of in vitro regeneration techniques for the genus Phyllanthus is well documented (Liang and Keng, 2006; Ghanti et al., 2004). The technique offers several advantages not only for clonal multiplication of the plant but also for extraction of active secondary metabolites. In vitro multiple shoots induction in Phyllanthus amarus had been achieved on Murashige and Skoog (MS) 1962 basal medium (MS) modified with sucrose and low concentrations of benzyl amino purine (0.1 mg/L BAP) and naphthalene acetic acid (0.05 mg/L NAA (Ghanti et al., 2004). Also, calli induction in several species of Phyllanthus has been reported by several authors like Catapan et al. (2001), Cimanga et al. (2004) and Luyindula et al. (2004). Linyindula et al. (2004) success- fully induced calli from apical shoots of P. niruri on a medium supplemented with 4 mg/L 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D). Induction of calli in P. niruri can play a dual role in the commercial exploitation of the plant. Firstly, it can be used for plant regeneration and secondly, for extraction of secondary metabolites for the pharmaceutical industries. Cimanga et al. (2004) have reported that ethanol extracts from calli of P. niruri showed a higher anti-plasmodial activity than the same extract from intact plants. In this paper, we report on plantlet regeneration and callus induction from nodal cuttings and leaf lobes of P. niruri.


MATERIALS AND METHODS

Fruits of three accessions of P. niruri L. collected from Greater Accra Region, Eastern Region and Central Region were identified at the Department of Botany University of Ghana and labelled according to the location of collection (Figures 1A and B). Fruits were dried in Petri dishes for seven days and then nursed in trays filled with a mixture of soil-cow dung-coconut husk in a ratio of 3:1:1 to establish seedlings which were used for the various experiments in this study.


Culture media and incubation conditions

The culture media consisted of MS basal medium amended with 30 g/L sucrose, 0.1 g/L myo-inositol, 1 ml of 2 µM CuSO4 and vitamins (0.02 g/L thiamine, 0.1 g/L pyridoxine, 0.1g/L nicotinic acid and 0.04 g/L glycine) (Murashige and Skoog,1962). The media was supplemented with a range of growth regulators BAP, kinetin, 2,4-D or picloram at different concentration depending on the requirement of each experiment. The pH of the medium was adjusted to 5.8 ± 0.1 using 1 M NaOH or HCl prior to solidification with phytagel and autoclaved at 121°C for 15 min. All cultures were incubated at a temperature of 25°C under a 16 h photoperiod using white fluorescent lights (3000 lux).


Growth regulators and germination of dried fruits in vitro

Fruits or seeds of P. niruri were harvested and dried in Petri dishes at room temperature for seven days, washed under running tap water for 2 h and sterilized by immersion in 70% ethanol for 30 min and finally rinsed with three changes of sterile distilled water. Fruits were cultured on solid basal medium (MS) supplemented with 0.0, 0.3, 0.6, 0.9, or 1.2 mg/L BAP or kinetin in test tubes. All cultures were incubated under growth room conditions and the percentage germination was recorded. Also, the number of shoots or roots per seedling was also recorded four weeks after culture.


Plantlet regeneration from nodal cuttings

Eight weeks old seedlings were harvested from the nursery, trimmed of its leaves, washed with “Crystal Clear TM” detergent for 10 min and rinsed under running tap water for 1 h. They were then sterilized by immersion in 70% ethanol for 30 s and rinsed again in three changes of sterilized distilled water. To ensure effective decontamination, the shoots were again immersed in 10% commercial bleach (containing 3.5% sodium hypochlorite) with three drops of Tween-20 for 5 min and finally rinsed with sterile distilled water. The stem segments were cut into single nodal cuttings (1.5 to 3.0 cm) and cultured in test tubes containing 25 ml of MS basal medium amended with 0.0, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 or 5.0 mg/l BAP, kinetin or 2-isopentyl adenine (2iP). The cultures were incubated under growth room conditions as described earlier. The number of nodal cuttings that developed shoots, roots or shoots with roots was recorded eight weeks after culture.


Induction of roots on MS basal medium supplemented with
NAA or indole-3-butyric acid (IBA)

Nodal cuttings were sterilized as described above and cultured on a MS basal medium supplemented with 0.0, 1.0, 2.0 or 4.0 mg/L BAP and 0.0, 0.5, 1.0, 1.5 or 2.0 mg/L IBA or NAA. The cultures were incubated under growth room conditions and the number of shoots or roots that developed per explants was recorded four weeks after culture.


Morphogenesis via callus induction

Young leaves excised from eight weeks old plantlets were

Kết quả (Việt) 1:

Chúng tôi điều tra việc sử dụng các kỹ thuật trong ống nghiệm cho tái tạo adventitious bắn ở Phyllanthus niruri, một loại cây chống bệnh sốt rét là một nỗ lực ban đầu hướng tới thuần hóa của nó. Trái cây nuôi cấy trên Murashige và Skoog (1962) cơ sở trung (MS) bổ sung với bắp có thấp nảy mầm (61%) do hạt giống áo áp đặt ngu. Các nền văn hóa của nút cắt explants vào bắp, kinetin hoặc 2-isopentyl adenine (2iP) sửa đổi phương tiện để tránh hạt giống ngu kết quả trong việc bắn tái sinh mà không có nguồn gốc ở tất cả accessions với bắp sản xuất số cành (9.0), cao nhất. Tiếp theo bao gồm của axit axetic 1naphthalene (NAA) hoặc indol-3-butyric acid (IBA) trong bắp, kinetin hoặc 2iP sửa đổi MS trung bình cũng được sản xuất chỉ bắn. Lá thùy explants văn hóa trên chỉ 2,4-dichlorophenoxy axit axetic (2,4-D) sửa đổi phương tiện đã dẫn đến một sự phát triển đáng kể calli với 1 mg/L 2,4-D sản xuất 100, 88.9 và 95.8% callus, tương ứng từ Kwabenya, Kasoa và Aburi accessions. Chuyển tiếp theo của calli MS vừa bổ sung với 0.1 mg/L bắp đã dẫn đến tăng trưởng calli (tăng trọng lượng) và morphogenic phản ứng phụ thuộc vào nồng độ của 2,4-D trong môi trường cảm ứng. Chỉ 55 và 25% của calli từ Kwabenya và Kasoa, tương ứng sản xuất cành trong khi nguồn gốc phát triển là cao hơn đáng kể khác nhau, từ 48 88.9%. Những cành đã không tồn tại cũ ống nghiệm acclimatisation do hyperhydricity trong khi những người tái tạo từ nút cắt hoặc hạt giống có tỷ lệ phần trăm cao tồn tại. Các phản ứng túy cao của Phyllanthus niruri trong ống nghiệm có thể được sử dụng để tuyên truyền này thực vật chống bệnh sốt rét và nâng cao việc sử dụng của nó trong điều trị bệnh sốt rét. Từ khóa: bắn tái sinh, morphogenic phản ứng, Phyllanthus niruri, accessions. GIỚI THIỆU Bệnh sốt rét được báo cáo là một trong những bệnh gây tử vong lớn đặc hữu ở châu Phi nhiệt đới (Asase và ctv., 2005) đặt ra rủi ro cho hơn nửa tỷ người ở vùng nhiệt đới. Nó được truyền đi bởi nữ Anopheles muỗi và của vectơ gây bệnh là Plasmodium falciparum. Nhiều nỗ lực của các cơ quan chính phủ các quốc gia châu Phi đặt để tiêu diệt các * Tác giả tương ứng. E-mail: [e-mail]. Chữ viết tắt: MS, Murashige và Skoog (1962); BẮP, 6benzylaminopurine; 2iP, 2-isopentyl adenine; NAA, axit axetic 1naphthalene; IBA, indol-3-butyric acid; 2,4-D, 2, 4dichlorophenoxy axit axetic. bệnh đã chứng minh vô ích do kháng phát triển bởi ký sinh trùng plasmodium chống lại thuốc điều trị thông thường. Ngoài ra, máy chủ lưu trữ nữ Anopheles muỗi đã phát triển đề kháng với thuốc trừ sâu là kết quả của các tỷ lệ cao của đột biến (Anto et al., 2009). Cùng với những vấn đề này là chi phí cao của các loại thuốc cổ điển được sử dụng để điều trị bệnh, do đó, làm cho chúng khả năng chi trả của người dân bản địa sống ở loài đặc hữu của khu vực. Việc tìm kiếm các loại thuốc thay thế từ dược liệu thực vật do đó đã có một mối quan tâm lớn cho các chính phủ trên khắp thế giới. Phyllanthus niruri (amarus) một euphorbia hàng năm phân bố rộng trong khu vực nhiệt đới theo truyền thống đã được xác định là một thực vật plasmodial chống quan trọng mà có thể được sử dụng để điều trị bệnh (Fasihuddin và Ghazally, 2003). Subeki et al. (2005) đã chỉ ra rằng 1-O-galloyl-6-O-luteoyl-alpha-dglucose thu được từ các chất chiết xuất từ luộc của P. niruri có plasmodial chống các hoạt động. Bên cạnh đó, hoạt động plasmodial chống của nó, chất chiết xuất từ các nhà máy đã được sử dụng để điều trị vàng da, bệnh tiểu đường, và các rối loạn gan (Banerjee và Chattopadhyay, 2010). Nó cũng có một hoạt động mạnh mẽ chống lại virus viêm gan B (HBV) (Shim và ctv., 2000) và vi C (HCV) (Bhattacharyya và Bhattacharya, 2003). Tác dụng bảo vệ mục của nhà máy đã được quy cho sự hiện diện của các thành phần hoạt động phyllantin (PH) và hypophyllantin (HPH) (Banerjee và Chattopadhyay, 2010). Mặc dù của nó tầm quan trọng của y học, P. niruri vẫn được thu hoạch trong tự nhiên với không có nỗ lực để domesticate hoặc thương mại phát triển khai thác bền vững và sử dụng. Bộ sưu tập liên tục của thực vật từ tự nhiên mà không thuần hóa của nó có thể dẫn đến các tuyệt chủng di truyền như là kết quả của hơn khai thác. Vì vậy, trong ống nghiệm chế độ của tuyên truyền nên được sử dụng để sản xuất các vật liệu trồng cây cho thương mại nông nghiệp của nhà máy. Việc sử dụng các kỹ thuật tái sinh trong ống nghiệm chi Phyllanthus là tài liệu (lương và Keng, 2006; Ghanti et al, 2004). Các kỹ thuật cung cấp một số lợi thế không chỉ cho phép nhân vô tính của các nhà máy mà còn để tách chất chuyển hóa thứ cấp đang hoạt động. Trong ống nghiệm nhiều cành cảm ứng ở Phyllanthus amarus đã đạt được trên Murashige và Skoog (MS) năm 1962 cơ sở trung (MS) cải tiến trang bị Sucroza và nồng độ thấp của benzyl amin purine (cách 0.1 mg/L bắp) và axit axetic Naphtalen (0,05 mg/L NAA (Ghanti và ctv., 2004). Ngoài ra, calli cảm ứng ở một số loài Phyllanthus đã được báo cáo bởi nhiều tác gia như Catapan et al. (2001), Cimanga et al. (năm 2004) và Luyindula et al. (năm 2004). Linyindula et al. (2004) thành công - hoàn toàn gây ra calli từ đỉnh cành của P. niruri trên một phương tiện bổ sung với 4 mg/L 2,4-dichlorophenoxy axit axetic (2,4-D). Cảm ứng của calli trong P. niruri có thể đóng một vai trò kép trong việc khai thác thương mại của nhà máy. Thứ nhất, nó có thể được sử dụng cho tái tạo thực vật và thứ hai, để tách chất chuyển hóa thứ cấp cho các ngành công nghiệp dược phẩm. Cimanga et al. (2004) đã thông báo rằng ethanol chất chiết xuất từ calli của P. niruri cho thấy một hoạt động plasmodial chống cao hơn cùng một chiết xuất từ thực vật còn nguyên vẹn. Trong bài này, chúng tôi báo cáo về plantlet tái sinh và callus cảm ứng từ nút cắt và lá thùy của P. niruri. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Trái cây của ba accessions P. niruri L. thu thập từ Greater Accra vùng, khu vực phía đông và miền trung đã được xác định tại các vùng của thực vật học đại học của Ghana và dán nhãn theo vị trí của bộ sưu tập (con số 1A và B). Trái cây khô trong món ăn Petri trong bảy ngày và sau đó nursed trong khay đầy với một hỗn hợp của con bò đất dũng-dừa nhớ ở một tỷ lệ 3:1:1 để thiết lập giống được sử dụng cho các thí nghiệm khác nhau trong nghiên cứu này. Phương tiện truyền thông văn hóa và điều kiện ấp trứng Phương tiện truyền thông văn hóa bao gồm MS trung bình cơ sở sửa đổi với 30 g/L Sucroza, 0.1 g/L myo-inositol, 1 ml 2 μm CuSO4 và vitamin (0,02 g/L Thiamin, 0.1 g/L Pyridoxin, 0.1 g/L nicotinic acid và glycine 0,04 g/L) (Murashige và Skoog, 1962). Phương tiện truyền thông được bổ sung với một loạt các điều chỉnh tăng trưởng bắp, kinetin, 2,4-D hoặc picloram tại các nồng độ khác nhau tùy thuộc vào các yêu cầu của mỗi thử nghiệm. Độ pH của môi trường được điều chỉnh để 5.8 ± 0,1 sử dụng trước khi 1 M NaOH hoặc HCl solidification với phytagel và autoclaved tại 121° C trong 15 phút. Tất cả các nền văn hóa đã được ủ ở nhiệt độ 25° C trong một photoperiod 16 h bằng cách sử dụng đèn huỳnh quang trắng (3000 lux). Cơ quan quản lý sự tăng trưởng và nảy mầm của trái cây sấy khô trong ống nghiệm Trái cây hoặc hạt giống của P. niruri đã được thu hoạch và khô trong Petri món ăn ở nhiệt độ phòng trong bảy ngày, rửa dưới vòi nước cho 2 h và khử trùng bằng cách ngâm trong 70% ethanol trong 30 phút và cuối cùng rửa với ba thay đổi vô trùng nước cất. Trái cây được nuôi cấy trên cơ sở vững chắc vừa (MS) bổ sung với 0,0, 0.3, 0.6, 0.9, hoặc cách 1.2 mg/L bắp hoặc kinetin trong ống nghiệm. Tất cả các nền văn hóa đã được ủ trong tăng trưởng phòng điều kiện và nảy mầm tỷ lệ phần trăm được ghi lại. Ngoài ra, số lượng các cành hoặc rễ cho mỗi cây giống được còn được ghi nhận bốn tuần sau khi nền văn hóa. Plantlet tái tạo từ nút cắt Tám tuần cây giống cũ đã được thu hoạch từ các vườn ươm, tỉa lá của nó, rửa sạch với "Crystal Clear TM" chất tẩy rửa cho 10 phút và rửa dưới vòi nước cho 1 h. Họ sau đó được khử trùng bằng cách ngâm trong 70% ethanol cho 30 s và traùng một lần nữa trong ba thay đổi tiệt trùng nước cất. Để đảm bảo hiệu quả khử trùng, các cành đã một lần nữa được đắm mình trong 10% thương mại bleach (có 3,5% natri hypoclorit) với ba giọt Tween-20 trong 5 phút và cuối cùng rửa với nước cất vô trùng. Các phân đoạn thân cây đã được cắt thành duy nhất nút cắt (1,5 đến 3,0 cm) và văn hóa trong ống nghiệm chứa 25 ml MS trung bình cơ sở sửa đổi với 0,0, 1.0, 2.0, 3,0, 4.0 hoặc 5.0 mg/l bắp, kinetin hoặc 2-isopentyl adenine (2iP). Các nền văn hóa đã được ủ trong tăng trưởng phòng điều kiện như mô tả trước đó. Số lượng các nút cắt phát triển cành, rễ hoặc với rễ đã được ghi lại tám tuần sau khi nền văn hóa. Cảm ứng của rễ trên MS phương tiện cơ sở bổ sung North American hay indol-3-butyric acid (IBA) Nút cắt được khử trùng như mô tả ở trên và văn hóa trên một phương tiện cơ sở MS bổ sung với 0,0, 1.0, 2.0 hoặc 4.0 mg/L bắp và 0.0, 0.5, 1.0, 1.5 hoặc 2,0 mg/L IBA hoặc NAA. Các nền văn hóa đã được ủ trong tăng trưởng phòng điều kiện và số lượng các cành hoặc nguồn gốc phát triển một explants đã được ghi lại bốn tuần sau khi nền văn hóa. Morphogenesis via callus cảm ứng Trẻ lá excised từ tám tuần cũ plantlets đã

Kết quả (Việt) 2:

Chúng tôi điều tra việc sử dụng các kỹ thuật in vitro cho tái sinh chồi ngẫu trong Phyllanthus niruri, một nhà máy thuốc chống sốt rét như là một nỗ lực ban đầu theo hướng thuần của nó. Trái cây nuôi cấy trên Murashige và Skoog (1962) vừa cơ bản (MS) có bổ sung BAP đã nảy mầm thấp (61%) do vỏ hạt áp ngủ. Văn hóa của cành giâm nút cấy vào BAP, kinetin hoặc adenine 2-isopentyl (2iP) vừa được sửa đổi để tránh ngủ hạt giống dẫn đến chồi không có rễ trong tất cả đan có với BAP sản xuất số lượng cao nhất của chồi (9.0). Đưa tiếp theo của một trong hai 1naphthalene axit axetic (NAA) hoặc indole-3-butyric acid (IBA) trong BAP, kinetin hoặc 2iP sửa đổi MS trung bình cũng chỉ sản xuất măng. Leaf cấy thùy nuôi trên acid acetic chỉ 2,4-dichlorophenoxy (2,4-D) sửa đổi vừa dẫn đến một sự phát triển đáng kể mô sẹo với 1 mg / L 2,4-D sản xuất 100, 88,9 và 95,8% mô sẹo, tương ứng từ Kwabenya , Kasoa và Aburi nhập đạt. Chuyển nhượng tiếp mô sẹo để môi trường MS có bổ sung 0,1 mg / L BAP dẫn đến sự tăng trưởng mô sẹo (tăng cân) và phản ứng morphogenic tùy thuộc vào nồng độ của 2,4-D trong môi trường cảm ứng. Chỉ có 55 và 25% của các mô sẹo từ Kwabenya và Kasoa, tương ứng sản xuất măng khi phát triển rễ đã cao hơn đáng kể khác nhau, 48-88,9%. Những chồi không tồn ex-vitro quen với khí hậu do hyperhydricity trong khi những người được tái tạo từ hom nút hoặc hạt giống đã tồn tại tỷ lệ cao. Các phản ứng cao hình thái của Phyllanthus niruri trong ống nghiệm có thể được sử dụng để tuyên truyền chống sốt rét cây này và tăng cường sử dụng của nó trong việc điều trị bệnh sốt rét. Từ khóa:. Bắn tái sinh, đáp ứng morphogenic, Phyllanthus niruri, nhập đạt GIỚI THIỆU sốt rét được báo cáo là một trong những các bệnh gây tử vong lớn đặc hữu ở vùng nhiệt đới châu Phi (Asase et al., 2005) đặt ra rủi ro cho hơn nửa tỷ người ở các vùng nhiệt đới. Nó được truyền bởi muỗi Anopheles nữ và vector gây bệnh của nó là Plasmodium falciparum. Một số nỗ lực của các cơ quan chính phủ ở hầu hết các nước châu Phi để tiêu diệt các tác giả * tương ứng. . E-mail: [e-mail] Chữ viết tắt: MS, Murashige và Skoog (1962); BAP, 6benzylaminopurine; 2iP, adenine 2-isopentyl; NAA, acid acetic 1naphthalene; IBA, axit indole-3-butyric; 2,4-D, acid acetic 2,4dichlorophenoxy. Căn bệnh này đã được chứng minh vô ích do kháng được phát triển bởi các ký sinh trùng plasmodium chống lại thuốc điều trị thông thường. Ngoài ra, các vật nữ Anopheles muỗi đã phát triển khả năng kháng thuốc diệt côn trùng như là kết quả của tốc độ cao đột biến (Anto et al., 2009). Cùng với những vấn đề này là chi phí cao của các loại thuốc cổ điển được sử dụng để điều trị căn bệnh này, do đó, làm cho họ khả năng chi trả của người dân bản địa sống trong vùng lưu hành. Việc tìm kiếm các loại thuốc thay thế từ các loài cây thuốc do đó đã là một mối quan tâm lớn đến các chính phủ trên khắp thế giới. Phyllanthus niruri (amarus) một Euphorbia hàng năm phân bố rộng rãi ở các vùng nhiệt đới có truyền thống được xác định là một nhà máy anti-plasmodial quan trọng mà có thể được sử dụng để điều trị các bệnh (Fasihuddin và Ghazally, 2003). Subeki et al. (2005) đã chỉ ra rằng 1-O-alloyl-6-O-luteoyl-alpha-dglucose thu được từ chiết xuất luộc của P. niruri có những hoạt động chống plasmodial. Bên cạnh đó, hoạt động chống plasmodial của nó, chiết xuất từ thực vật đã được sử dụng để điều trị vàng da, bệnh tiểu đường, và các rối loạn gan (Banerjee và Chattopadhyay, 2010). Nó cũng có một hoạt động mạnh mẽ chống lại virus viêm gan B (HBV) (Shim et al., 2000) và siêu vi C (HCV) (Bhattacharyya và Bhattacharya, 2003). Các tác dụng bảo vệ gan của nhà máy đã được quy cho sự hiện diện của các thành phần hoạt động phyllantin (PH) và hypophyllantin (HPH) (Banerjee và Chattopadhyay, 2010). Mặc dù tầm quan trọng dược liệu của nó, P. niruri vẫn thu hoạch trong tự nhiên không có nỗ lực để thuần hóa hay thương mại phát triển nó cho khai thác và sử dụng bền vững. Bộ sưu tập liên tục của nhà máy từ tự nhiên mà không cần thuần của nó có thể dẫn đến sự tuyệt chủng di truyền như là một kết quả của việc khai thác quá mức. Do đó, chế độ in vitro của tuyên truyền nên được sử dụng để sản xuất các vật liệu trồng cho nông nghiệp thương mại của nhà máy. Việc sử dụng kỹ thuật in vitro tái sinh cho các chi Phyllanthus cũng là tài liệu (Liang và Keng, 2006; Ghanti et al., 2004). Kỹ thuật này cung cấp một số lợi thế không chỉ cho phép nhân giống vô tính của cây mà còn để khai thác các chất chuyển hóa thứ cấp hoạt động. Trong ống nghiệm nhiều bắn cảm ứng trong Phyllanthus amarus đã đạt được trên Murashige và Skoog (MS) 1962 vừa cơ bản (MS) sửa đổi với sucrose và nồng độ thấp của benzyl amin purine (0,1 mg / L BAP) và naphthalene acetic acid (0,05 mg / L NAA (Ghanti et al., 2004). Ngoài ra, cảm ứng mô sẹo trong một số loài Phyllanthus đã được báo cáo của một số tác giả như Catapan et al. (2001), Cimanga et al. (2004) và Luyindula et al. (2004). Linyindula et al (2004). success- mô sẹo gây ra hoàn toàn từ chồi đỉnh của P. niruri trên một phương tiện bổ sung 4 mg / L 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D). Cảm ứng của mô sẹo trong P. niruri có thể đóng một vai trò kép trong việc khai thác thương mại của nhà máy. Thứ nhất, nó có thể được sử dụng để tái sinh cây và thứ hai, để khai thác các chất chuyển hóa thứ cấp cho các ngành công nghiệp dược phẩm. Cimanga et al. (2004) đã báo cáo rằng chiết xuất ethanol từ mô sẹo của P. niruri cho thấy một hoạt động chống plasmodial cao hơn so với các chiết xuất từ thực vật cùng nguyên vẹn. Trong bài báo này, chúng tôi báo cáo về cây non tái sinh mô sẹo và cảm ứng từ hom nút và thùy lá của P. niruri. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Quả ba gia nhập đạt của P. niruri L. thu thập từ Greater Accra Region, Đông và khu vực miền Trung đã được xác định tại Ban Thực vật học Đại học Ghana và ghi nhãn theo địa điểm của bộ sưu tập (hình 1A và B). Trái cây đã được sấy khô trong đĩa Petri trong bảy ngày và sau đó ươm trong khay đầy với một hỗn hợp của đất bò trấu dung-dừa theo tỉ lệ 3: 1:. 1 để lập cây giống đã được sử dụng cho các thí nghiệm khác nhau trong nghiên cứu này Văn hóa phương tiện truyền thông và điều kiện ấp trứng Các phương tiện truyền thông văn hóa bao gồm môi trường MS cơ bản sửa đổi với 30 g / L sucrose, 0,1 g / L myo-inositol, 1 ml của 2 mM CuSO4 và vitamin (0.02 g / L thiamine, 0,1 g / L pyridoxine, 0.1 g / L axit nicotinic và 0,04 g / L glycine) (Murashige và Skoog, 1962). Các phương tiện truyền thông được bổ sung thêm một loạt các điều hòa sinh trưởng BAP, kinetin, 2,4-D hoặc picloram ở nồng độ khác nhau tùy thuộc vào yêu cầu của mỗi thí nghiệm. Độ pH của môi trường đã được điều chỉnh lên 5,8 ± 0,1 sử dụng 1 M NaOH hoặc HCl trước khi đóng rắn với phytagel và hấp ở 121 ° C trong 15 phút. Tất cả các nền văn hóa được ủ ở nhiệt độ 25 ° C trong một gian chiếu sáng 16 giờ sử dụng đèn huỳnh quang trắng (3000 lux). điều chỉnh tăng trưởng và nảy mầm của các loại trái cây sấy khô trong ống nghiệm trái cây hoặc hạt giống của P. niruri được thu hoạch và sấy khô trong đĩa Petri tại phòng nhiệt độ trong bảy ngày, rửa sạch dưới vòi nước chảy trong 2 giờ và tiệt trùng bằng cách ngâm trong 70% ethanol trong 30 phút và cuối cùng rửa sạch với ba thay đổi của nước cất vô trùng. Trái cây được nuôi cấy trên môi trường rắn cơ bản (MS) có bổ sung 0.0, 0.3, 0.6, 0.9, hoặc 1.2 mg / L BAP hoặc kinetin trong ống nghiệm. Tất cả các nền văn hóa được ủ trong điều kiện phòng tăng trưởng và tỷ lệ nảy mầm đã được ghi lại. Ngoài ra, số lượng chồi hay rễ cây giống mỗi cũng được ghi nhận bốn tuần sau khi nuôi cấy. cây non tái sinh từ hom nút Tám tuần cây giống cũ được thu hoạch từ vườn ươm, tỉa lá của nó, rửa sạch với "Crystal Clear TM" chất tẩy rửa trong 10 phút và rửa sạch dưới vòi nước chảy trong 1 giờ. Sau đó, họ đã được khử trùng bằng cách ngâm trong 70% ethanol trong 30 s và rửa lại một lần nữa trong ba thay đổi của nước cất vô trùng. Để đảm bảo hiệu quả khử nhiễm, các chồi được lại đắm mình trong 10% thuốc tẩy thương mại (chứa 3,5% sodium hypochlorite) với ba giọt Tween-20 trong 5 phút và cuối cùng rửa sạch bằng nước cất vô trùng. Các đoạn thân được cắt thành cắt mối duy nhất (1,5-3,0 cm) và nuôi cấy trong ống nghiệm chứa 25 ml môi trường MS cơ bản sửa đổi với 0.0, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 hoặc 5.0 mg / l BAP, kinetin hoặc 2-isopentyl adenine (2iP). Các nền văn hóa được ủ trong điều kiện phòng tăng trưởng như đã mô tả trước đó. Số lượng cắt nút đó phát triển chồi, rễ hoặc quay với các rễ đã ghi tám tuần sau khi nuôi cấy. Cảm ứng của rễ trên môi trường MS cơ bản có bổ sung NAA hoặc indole-3-butyric acid (IBA) cắt Nodal được khử trùng như mô tả ở trên và có văn hóa trên môi trường MS cơ bản có bổ sung 0.0, 1.0, 2.0 hoặc 4.0 mg / L BAP và 0.0, 0.5, 1.0, 1.5 hoặc 2.0 mg / L IBA hoặc NAA. Các nền văn hóa được ủ trong điều kiện phòng tăng trưởng và số chồi hay rễ cây phát triển trong mỗi cấy được ghi nhận bốn tuần sau khi nuôi cấy. hình thái qua mô sẹo cảm ứng Lá non cắt ra từ tám tuần tuổi là cây con