3.1. Screening the effect of solven

3.1. Screening the effect of solvent conditions on the pressure
temperature sensitivity of the protein system
In general, in the second step of indicator development (Grauwet
et al., 2009), the effect of solvent conditions on the pressure
temperature sensitivity of the protein system are screened in order
to select the solvent conditions in which the protein shows the
most interesting pressure temperature stability as well as
sensitivity.
As indicated above, in this work, solvent engineering, in particular
the effect of buffer type and pHi, was studied to accomplish
the three objectives. The first objective was to select a solvent condition
in which ovomucoid shows a combined pressure and temperature
sensitive inactivation.
3.1.1. Effect of buffer type
In general, a distinction can be made between temperature–stable
(e.g. phosphate, citrate) and pressure-stable (e.g. MES-NaOH,
TrisHCl) buffers, whose pKa is stable as a function of temperature
and pressure, respectively (Bates, 1962; Kitamura and Itoh, 1987;
Goldberg et al., 2002). The choice for a temperature–stable sodium
phosphate buffer resulted in a temperature sensitive, but pressure
insensitive inactivation of ovomucoid (see OM-PhB8.0) under
HPHT conditions (Grauwet et al., 2010b). Lack of pressure sensitivity
at constant process temperature was attributed to a stronger
pH drop of the phosphate buffer when a higher pressure level at
a particular temperature was applied. Grauwet et al. (2010b)
showed that the stability of ovomucoid increases when the pH of
a buffer is lowered. In the context of extrinsic, isolated indicator
development, the effect of a pH-shift, induced by a given pressure
temperature change, on the kinetics of the indicator is included in
the read-out evaluated after treatment and thus in its characterization
in terms of kinetic properties. However, in this case, this raises
no issues as the kinetics of the isolated system do not need to be
translated to real food systems with different buffering capacities
(Grauwet et al., 2010b).
The choice of a pressure-stable buffer, with little effect of temperature
was considered a logical starting point to develop an ovomucoid-
based indicator system with a pressure sensitive
inactivation. In this work, the use of a MES-NaOH buffer was opted
(DpKa
0/C = 0.011; DV0 = 3.9 cm3 mol1; Bates, 1962; Kitamura
and Itoh, 1987). In Fig. 2A, a clear effect of pressure on the residual
trypsin-inhibitor activity could be observed when ovomucoid was
treated under isobaric–isothermal conditions at 107 C in a MESNaOH
buffer of pHi 6.0. However, it needs to be verified if the presence
of a pressure effect on the inactivation is not at the expense of
a temperature effect. Indeed, in view of the applicability of the candidate
pTTI for a temperature uniformity study, temperature
should show a clear effect on the read-out of the system after treatment
under constant, increased pressure. In Fig. 2B, a clear temperature
effect on the inactivation of the ovomucoid system can be
observed. Based on Fig. 2A and B, it can be concluded that by dissolving
ovomucoid in a MES-NaOH buffer system (pHi 6.0), the
ovomucoid system is characterized by a combined pressure temperature
dependency of its inactivation, meeting the first objective.
3.1.2. Effect of pHi
The second objective of the solvent engineering study was to
shift the ovomucoid inactivation window in the HPHT processing
window relevant for commercial sterilization. The potential of
the pHi of the selected buffer system to increase or decrease the
ovomucoid stability under HPHT conditions was reported previously
(Grauwet et al., 2010b). However, for each buffer type chosen,
only a particular pHi-range can be studied in order to
preserve the buffering capacities. In case of a MES-NaOH buffer, a
pHi-range of pH 5–7 can be investigated.

Kết quả (Việt) 1:

3.1. kiểm tra hiệu quả của điều kiện dung môi trên áp lựcnhiệt độ nhạy cảm của hệ thống proteinNói chung, ở bước thứ hai chỉ số phát triển (Grauwetet al., 2009), tác dụng của dung môi điều kiện về áp lựcnhiệt độ nhạy cảm của hệ protein được kiểm tra trong đơn đặt hàngđể chọn các điều kiện dung môi trong đó các protein cho thấy cácthú vị nhất áp nhiệt độ ổn định cũng nhưđộ nhạy cảm.Như được chỉ ra ở trên, trong kỹ thuật làm việc, dung môi, đặc biệttác dụng của loại đệm và pHi, được nghiên cứu để thực hiệnba tiêu. Mục tiêu đầu tiên là chọn một điều kiện dung môitrong ovomucoid đó cho thấy một kết hợp áp suất và nhiệt độngừng hoạt động nhạy cảm.3.1.1. tác dụng của loại đệmNói chung, một sự phân biệt có thể được thực hiện giữa nhiệt độ – ổn định(ví dụ: phốt phát, citrate) và áp-ổn định (ví dụ: MES-NaOH,Bộ đệm TrisHCl), có pKa là ổn định như là một hàm của nhiệt độvà áp lực, tương ứng (Bates, 1962; Kitamura và Itoh, năm 1987;Goldberg et al., 2002). Sự lựa chọn cho natri nhiệt độ – ổn địnhbộ đệm phosphate kết quả trong một nhiệt độ nhạy cảm, nhưng áp lựcngừng hoạt động không nhạy cảm của ovomucoid (xem OM-PhB8.0) dướiĐiều kiện HPHT (Grauwet và ctv., 2010b). Thiếu áp lực nhạy cảmquá trình liên tục nhiệt độ là do một mạnh mẽ hơnVn thả của bộ đệm phosphate khi mức độ áp lực cao hơn tạimột nhiệt đặc biệt được áp dụng. Grauwet et al. (2010b)cho thấy rằng sự ổn định của ovomucoid làm tăng khi độ pH củamột bộ đệm được hạ xuống. Trong bối cảnh bên ngoài, cô lập các chỉ sốphát triển, hiệu quả của một thay đổi độ pH, gây ra bởi một áp lực nhất địnhsự thay đổi nhiệt độ, về động học của các chỉ số được bao gồm trongread-out đánh giá sau khi điều trị và do đó trong đặc tính của nótrong điều khoản của các thuộc tính động lực. Tuy nhiên, trong trường hợp này, điều này làm tăngkhông có vấn đề như động học của hệ thống bị cô lập không cần phảiDịch sang real thực phẩm Hệ thống với khả năng đệm khác nhau(Grauwet et al., 2010b).Sự lựa chọn của một bộ đệm áp-ổn định, với ít ảnh hưởng của nhiệt độđược coi là một điểm khởi đầu hợp lý để phát triển một ovomucoid-Dựa trên chỉ số hệ thống với một áp lực nhạy cảmngừng hoạt động. Trong tác phẩm này, việc sử dụng một bộ đệm MES-NaOH được chọn tham gia(DpKa0 / C = 0.011; DV0 = 3.9 cm3 mol 1; Bates, 1962; Kitamuravà Itoh, năm 1987). Trong hình 2A, một hiệu ứng rõ ràng áp lực trên dưchất ức chế trypsin hoạt động có thể được quan sát thấy khi ovomucoidđiều trị các điều kiện isobaric – isothermal tại 107 C trong một MESNaOHbộ đệm của pHi 6.0. Tuy nhiên, nó cần phải được xác nhận nếu sự hiện diệnáp lực tác dụng trên ngừng hoạt động không phải là lúc hiß╗çp củamột hiệu ứng nhiệt độ. Thật vậy, theo quan điểm của các ứng dụng của các ứng cử viênpTTI cho một nghiên cứu tính đồng nhất nhiệt độ, nhiệt độnên hiển thị một ảnh hưởng rõ ràng read-out của hệ thống sau khi điều trịdưới áp lực liên tục gia tăng. Trong hình 2B, nhiệt độ rõ rànghiệu lực từ ngày ngừng hoạt động của hệ thống ovomucoid mới có thểquan sát. Dựa trên hình 2A và B, nó có thể được kết luận rằng bằng cách hòa tanovomucoid trong một hệ thống đệm MES-NaOH (pHi 6.0), cácHệ thống ovomucoid được đặc trưng bởi một nhiệt độ áp lực kết hợpsự phụ thuộc của nó ngừng hoạt động, đáp ứng mục tiêu đầu tiên.3.1.2. ảnh hưởng của pHiMục tiêu thứ hai của nghiên cứu kỹ thuật dung môi làthay đổi ovomucoid ngừng hoạt động trong cửa sổ xử lý HPHTcửa sổ có liên quan cho thương mại khử trùng. Tiềm năng củapHi của hệ thống đã chọn đệm để tăng hoặc giảm cácovomucoid ổn định điều kiện HPHT đã được báo cáo trước đó(Grauwet et al., 2010b). Tuy nhiên, đối với từng loại đệm được lựa chọn,chỉ một cụ thể pHi phạm vi có thể được nghiên cứu đểbảo tồn khả năng đệm. Trong trường hợp một bộ đệm MES-NaOH, mộtpHi phạm vi độ pH 5-7 có thể được điều tra.

Kết quả (Việt) 2:

3.1. Sàng lọc các tác động của điều kiện môi vào áp suất
nhạy cảm nhiệt độ của hệ thống protein
Nói chung, trong bước thứ hai của sự phát triển chỉ số (Grauwet
et al., 2009), ảnh hưởng của điều kiện môi vào áp suất
nhạy cảm nhiệt độ của hệ thống protein được sàng lọc để
lựa chọn các điều kiện dung môi trong đó các protein cho thấy
sự ổn định nhiệt độ áp lực thú vị nhất cũng như
độ nhạy cảm.
như đã nêu ở trên, trong công việc này, kỹ thuật dung môi, đặc biệt là
tác động của loại đệm và Phi, đã được nghiên cứu để thực hiện
ba mục tiêu. Mục tiêu đầu tiên là chọn một điều kiện dung môi
trong đó ovomucoid cho thấy một áp lực kết hợp và nhiệt độ
bất hoạt nhạy cảm.
3.1.1. Ảnh hưởng của loại đệm
Nói chung, một sự phân biệt có thể được thực hiện giữa nhiệt độ ổn định
(ví dụ như phosphate, citrate) và áp suất ổn định (ví dụ như MES-NaOH,
TrisHCl) đệm, có pKa là ổn định như một hàm của nhiệt độ
và áp suất, tương ứng ( Bates, 1962; Kitamura và Itoh, 1987;
. Goldberg et al, 2002). Sự lựa chọn cho một natri nhiệt độ ổn định
đệm phosphate dẫn đến một nhiệt độ nhạy cảm, nhưng áp lực
nhạy cảm bất hoạt của ovomucoid (xem OM-PhB8.0) dưới
điều kiện HPHT (Grauwet et al., 2010b). Thiếu nhạy áp suất
ở nhiệt độ quá trình liên tục được cho là do một mạnh
thả pH của đệm phosphate khi một mức áp suất cao hơn ở
một nhiệt độ cụ thể được áp dụng. Grauwet et al. (2010b)
cho thấy sự ổn định của tăng ovomucoid khi độ pH của
một bộ đệm được hạ xuống. Trong bối cảnh bên ngoài, chỉ bị cô lập
phát triển, ảnh hưởng của độ pH ca, gây ra bởi một áp lực cho
sự thay đổi nhiệt độ, trên động học của các chỉ số được bao gồm trong
các read-ra đánh giá sau khi điều trị và do đó đặc tính của nó
về đặc tính động học. Tuy nhiên, trong trường hợp này, điều này làm tăng
không có vấn đề như động học của hệ thống cô lập không cần phải được
phiên dịch sang các hệ thống thực phẩm thực sự với khả năng đệm khác nhau
(Grauwet et al., 2010b).
Sự lựa chọn của một bộ đệm áp suất ổn định, ít ảnh hưởng của nhiệt độ
được coi là một điểm khởi đầu hợp lý để phát triển một ovomucoid-
hệ thống chỉ tiêu dựa trên với một áp lực nhạy cảm
bất hoạt. Trong tác phẩm này, việc sử dụng một bộ đệm MES-NaOH đã được chọn
(DpKa
0 / C = 0,011;? DV0 = 3,9 cm3 mol 1;? Bates, 1962; Kitamura
và Itoh, 1987). Trong hình. 2A, một hiệu quả rõ ràng áp lực dư
hoạt động trypsin-chất ức chế có thể được quan sát thấy khi ovomucoid được
điều trị trong điều kiện đẳng áp đẳng nhiệt-107? C trong một MESNaOH
đệm của Phi 6.0. Tuy nhiên, nó cần phải được xác nhận nếu sự hiện diện
của một hiệu ứng áp lực về sự bất hoạt không phải là tại các chi phí của
một hiệu ứng nhiệt. Thật vậy, theo quan điểm của các ứng dụng của các ứng cử viên
pTTI cho một nghiên cứu nhiệt độ đồng đều, nhiệt độ
sẽ hiển thị một hiệu ứng rõ ràng về đọc ra khỏi hệ thống sau khi điều trị
dưới liên tục áp lực, tăng lên. Trong hình. 2B, nhiệt độ rõ ràng
ảnh hưởng đến sự bất hoạt của hệ thống ovomucoid có thể được
quan sát thấy. Dựa trên hình. 2A và B, có thể kết luận rằng bằng cách hòa tan
ovomucoid trong một hệ thống đệm MES-NaOH (Phi 6,0), các
hệ thống ovomucoid được đặc trưng bởi nhiệt độ áp lực kết hợp
phụ thuộc của sự bất hoạt của nó, đáp ứng mục tiêu đầu tiên.
3.1.2. Ảnh hưởng của phì
Mục tiêu thứ hai của nghiên cứu kỹ thuật dung môi là để
chuyển đổi các cửa sổ bất hoạt ovomucoid trong việc xử lý HPHT
cửa sổ có liên quan để tiệt trùng thương mại. Tiềm năng của
PHI của hệ thống đệm lựa chọn để tăng hoặc giảm
độ ổn định trong điều kiện ovomucoid HPHT đã được báo cáo trước đây
(Grauwet et al., 2010b). Tuy nhiên, đối với từng loại đệm được chọn,
chỉ có một phi-phạm vi cụ thể được nghiên cứu để
bảo tồn năng lực đệm. Trong trường hợp của một bộ đệm MES-NaOH, một
phi tầm pH 5-7 có thể được điều tra.