Cell morphology evaluationZn-CS/β-G

Cell morphology evaluation
Zn-CS/β-GP and Zn-CS/β-GP/nHAp hydrogels were UV-treated for 2 h. Approximately 2 × 105 mMSCs were
different time periods. The cells were then washed with cold phosphate-buffered saline (PBS), and whole cell lysates were prepared. Twenty micrograms of proteins was resolved using 12% sodium dodecyl sulfate–poly- acrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and trans- ferred to polyvinylidene difluoride (PVDF) membranes by electroblotting. The membranes were blocked with 5% non-fat milk powder (BioRad) and incubated over- night with a primary antibody at 4°C. The membranes were probed with secondary antibodies conjugated with horseradish peroxidase (HRP). Finally, the bands were visualized by adding Super Signal West Dura Extended Duration Substrate (Thermo Scientific) according to the manufacturer’s instructions. The images obtained were used for quantification with the ImageJ software, as described previously [52]. Mouse monoclonal Runx2 (1:1,000) antibodies, Cdk2 (1:1,000) antibodies, and sec- ondary antibodies conjugated with HRP were obtained from Santa Cruz Biotechnology. Cdk2 antibodies served as internal loading controls

Kết quả (Việt) 1:

Tế bào hình thái đánh giáZn – CS/β-GP và Zn – CS/β-GP/nHAp hydrogels là UV điều trị cho 2 h. khoảng 2 × 105 mMSCs đãthời gian thời gian khác nhau. Các tế bào đã được sau đó rửa sạch với nước muối đệm phosphat lạnh (PBS), và toàn bộ tế bào lysates đã được chuẩn bị. Hai mươi microgram protein được giải quyết bằng cách sử dụng 12% natri dodecyl sulfat-poly-acrylamide gel electrophoresis (SDS-TRANG) và trans-ferred để polyvinylidene nghiên (PVDF) màng electroblotting. Các màng bị chặn với 5% mỡ sữa bột (BioRad) và ủ qua đêm với một kháng thể chính ở 4° C. Các màng được thăm dò với kháng thể trung học chia với cải ngựa peroxidase (HRP). Cuối cùng, các ban nhạc đã được hình dung bởi thêm Super tín hiệu West màng cứng kéo dài thời gian bề mặt (nhiệt khoa học) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Những hình ảnh thu được được sử dụng để định lượng với phần mềm ImageJ, như mô tả trước đó [52]. Chuột monoclonal Runx2 (1:1, 000) kháng thể, Cdk2 (1:1, 000) kháng thể, và sec-ondary kháng thể kết với HRP được thu được từ Santa Cruz công nghệ sinh học. Cdk2 kháng thể phục vụ như là nội bộ nạp điều khiển

Kết quả (Việt) 2:

Đánh giá hình thái tế bào
Zn-CS / β-GP và Zn-CS / β-GP / nhap hydrogel được UV-điều trị cho 2 h. Khoảng 2 × 105 mMSCs là
khoảng thời gian khác nhau. Sau đó các tế bào đã được rửa sạch bằng nước muối lạnh đệm phosphat (PBS), và lysates toàn bộ tế bào đã được chuẩn bị. Hai mươi microgram protein đã được giải quyết bằng 12% sodium dodecyl sulfate-poly acrylamide gel (SDS-PAGE) và chuyển tiếp ferred để polyvinylidene difluoride (PVDF) màng bởi electroblotting. Các màng đã bị chặn với 5% mỡ sữa bột (BioRad) và ủ qua đêm với một kháng thể chính ở 4 ° C. Các màng đã được thăm dò với kháng thể thứ cấp liên hợp với cải ngựa peroxidase (HRP). Cuối cùng, ban nhạc đã được hình dung bằng cách thêm siêu Signal Tây Dura Mở rộng Thời gian Substrate (Thermo Scientific) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Các hình ảnh thu được được sử dụng để định lượng với phần mềm ImageJ, như mô tả trước đây [52]. Chuột đơn dòng Runx2 (1: 1000) kháng thể, CDK2 (1: 1000) kháng thể và kháng thể ở bậc trung giây- liên hợp với HRP được lấy từ Santa Cruz Công nghệ sinh học. Kháng thể CDK2 phục vụ như kiểm soát tải nội