1. IntroductionXao tam phan (Parami

1. Introduction

Xao tam phan (Paramignya trimera (Oliv.) Guillaum) has a syn- onym of Atalantia trimera Oliv., which belongs to the Paramignya genus of Citrus family (Rutaceae) and is well known as a medic- inal plant in Thailand and Vietnam (Nguyen et al., 2013). Recent studies on the P. trimera have revealed hepatoprotective and cyto- toxic activity from a crude methanolic extract (Nguyen et al.,2013). Importantly, methanolic extract, n-hexane fraction and an individual compound isolated from P. trimera, named ostruthin (6-(3,7-dimethyl-2,6-octadienyl) 7-hydroxy-2H-1-benzopyran-2- one) demonstrated cytotoxic activity against five cancer cell lines in vitro, especially, the partitioned n-hexane fraction and ostruthin from the methanolic extract displayed activity against hepatocel- lular carcinoma (Hep-G2) and human epithelial cervical carcinoma (Hela) cell lines with IC50 values of 39.61 and 5.36 g/ml, respec- tively. Pham et al. (2013) also isolated and quantitatively analysed ostruthin to be a major compound in the P. trimera roots and stems, while Li et al. (2012) showed that ostruthin displayed potent activ- ity against pancreatic cancer cell lines. These studies indicate that P. trimera contains key biologically active phytochemicals, however it is imperative to optimize extraction conditions to maximize the yield of phytochemicals extracted for potential medicinal exploita- tion.
Solvent type and extraction method directly affects the extrac- tion efficiency and relates to production costs such as extraction time, solvent volume, energy costs as well as the effect on humans and the environment (Dai and Mumper, 2010; Azmir et al., 2013; Kalia et al., 2008). In recent years, advanced extraction techniques have been developed and applied to optimize the extraction of phenolics from plant materials. For example, ultrasound-assisted extraction (UAE), microwave-assisted extraction (MAE) and tech- niques using compressed fluids such as subcritical water extraction (SWE), supercritical fluid extraction (SFE), pressurized fluid extraction (PFE) or accelerated solvent extraction (ASE) (Tiwari et al., 2011; Doughari, 2012) have proven to significantly reduce extraction time as well as gaining improved extraction efficiency. For this reason, careful consideration for the selection of solvent type and extraction method is a crucial step in the preparation of extracts from plant materials.
Very few studies have reported the physicochemical proper- ties and biological activity of P. trimera extracts and none have focused on selection of solvent and extraction method. With this in mind, our study investigated the effects of various solvent types and extraction methods on the phytochemical yield and antioxi- dant capacity of P. trimera root extracts. Our data reveal the optimal conditions for solvent type and extraction method for the prepara- tion of crude P. trimera root extracts for potential application in the nutraceutical and/or pharmaceutical industries.

2. Materials and methods

2.1. Plant materials

P. trimera root was collected from Ninh Hoa district, Khanh Hoa province, Vietnam in January 2014 and identified by the National Institute of Medicinal Materials, Ministry of Health, Vietnam. After collection, the fresh samples were rinsed in deionized water to remove sand and soil, drained and left to dry under the sun (34.5 ± 1 ◦ C) to constant weight, and then packed in vacuum sealed polyamide (PA) bags and stored at −18 ◦ C until used. The resid- ual moisture of the dried samples was determined according to the AOAC official methods of analysis (AOAC, 1998) using a hot-air oven (Anax Pty Ltd., NSW, Australia) at 120 ◦ C for 5 h.

2.2. Analytical chemicals

All chemicals used were of analytical grade. 2,2 -azino-bis-
3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS), 1,1-diphenyl-
2-picryl-hydrazil (DPPH), Folin-Ciocalteu, trolox, neocuproine,
2,4,6-tripyridyl-s-triazine (TPTZ), iron (III) chloride and standard compounds including gallic acid, p-coumaric acid, caffeic acid,
5,7-dimethoxycoumarin, quercetin, kaempferol, rutin, syringic acid, chlorogenic acid, escin, (+)-catechin, (−)-epicatechin, (±)- naringenin, myricetin, luteolin, apigenin, (−)-epigallocatechin gallate, -sitosterol- -D-glucoside, gemcitabine, -sitosterol, and ascorbic acid were purchased from Sigma–Aldrich Pty Ltd. (NSW, Australia). Vanillin, potassium persulfate, methanol and ethanol were obtained from Merck (Darmstadt, Germany). Copper (II)
chloride was purchased from Standard Laboratories (Victoria, Australia). Sodium acetate trihydrate was obtained from Gov- ernment Stores Department (Australia). Ammonium acetate was purchased from BDH Chemicals (Victoria, Australia). Aluminium chloride (anhydrous) was obtained from Acros (New Jersey, USA). Sodium hydroxide was purchased from Ajax chemicals (NSW, Australia). Sodium carbonate anhydrous was purchased from Chem-supply (Gillman, South Australia). Sulfuric acid and hydrochloric acid were purchased from Ajax Finechemicals (NSW, Australia), and acetic acid was obtained from BDH Laboratory Sup- plies (Poole, England).

2.3. Preparation of extracts

To select the best solvent for further study, five various solvents were evaluated including water (WT), acetonitrile (AT), methanol (MT), ethyl acetate (EA) and hexane (HX). Then, three different extraction methods were applied with selected solvent, i.e. con- ventional extraction (CE), ultrasound-assisted extraction (UAE) and microwave-assisted extraction (MAE). The extracts of P. trimera root were prepared according to the method described by Nguyen

et al. (2011) with some modifications. The extraction procedures were as follows:
For effect of solvents: 0.2 g of dried sample was extracted with
20 mL of various solvents applying UAE using an ultrasonic cleaner Soniclean 1000HD (Soniclean Pty Ltd., South Australia) at a power of 150 W and 45 ◦ C for 60 min.
For effect of extraction methods: 0.2 g of dried sample was extracted with 20 mL of selected solvent, the extraction process included two stages: the first stage was set at room temperature (20 ± 1 ◦ C) for 20 min, and the second stage was extracted using the various methods for 60 min. CE was carried out using a waterbath (Buchi, Flawil, Switzerland) at 45 ◦ C, UAE was performed using an ultrasonic cleaner Soniclean 1000HD at a power of 150 W and 45 ◦ C, and MAE was carried out using a microwave oven (Sharp Carousel, Sharp Corporation, Thailand) at a power of 360 W, with the ini- tial irradiation time of 15 s, then 5 s for each further 5 min (total irradiation time was applied to be 70 s).
After extraction, the extracts were rapidly cooled to room tem- perature by ice water and then filtered through qualitative no. 1 filter papers (Bacto Laboratories Pty Ltd., NSW, Australia) to obtain extracts for further analysis. To determine the extraction yield, 2 mL of extract was dried in a hot-air oven (Anax Pty Ltd., NSW, Australia) at 100 ◦ C for 4 h to a constant weight (extraction yield = g of dried extract/100 g of dried sample).


2.4. Determination of phytochemical compounds

2.4.1. Total phenolic content (TPC)
TPC of P. trimera extracts was determined using the Folin–Ciocalteu method as previously described by Nguyen et al. (2011) and Vuong et al. (2013) with some modifications. Briefly,
0.5 mL of the extracts were diluted 2 times and mixed with 2.5 mL of 10% (v/v) Folin–Ciocalteu reagent in distilled water. The mixture was left to settle for 6 min, then 2 mL of 7.5% (w/v) Na2 CO3 solution was added and incubated in the dark at room temperature for 1 h. The absorbance of mixture was measured at 765 nm using a UV–vis spectrophotometer (Cary 50 Bio Varian, Australia). Methanol and gallic acid were used as a control and standard. TPC was expressed
in mg gallic acid equivalents (GAE)/g dried sample.


2.4.2. Total flavonoid content (TFC)
TFC of P. trimera extracts was performed according to the method described by Vuong et al. (2013) with some modifica- tions. 0.5 mL of extract was mixed with 2 mL of distilled water and
0.15 mL of 5% (w/v) Na2 CO3 solution and incubated in the dark at room temperature for 6 min. 0.15 mL of 10% (w/v) AlCl3 solution was then added and incubated for a further 6 min. Finally, 2 mL of
4% (w/v) NaOH solution and 0.7 mL of distilled water were added and incubated for 15 min. The absorbance of mixture was mea- sured at 510 nm using a UV–vis spectrophotometer. Methanol and rutin were used as a control and standard, respectively. TFC was expressed as mg of rutin equivalents (RE)/g dried sample.


2.4.3. Proanthocyanidin content
Proanthocyanidin content of P. trimera extracts was determined using the method described by Vuong et al. (2013) with some mod- ifications. Briefly, 0.5 mL of extract was mixed with 3 mL of 4% (w/v) vanillin solution, then 1.5 mL of concentrated HCl was added and the mixture was incubated in the dark at room temperature for
15 min. The absorbance of mixture was measured at 500 nm using a UV–vis spectrophotometer. Methanol and catechin were used as a control and standard, respectively. Proanthocyanidin content was expressed as mg of catechin equivalents (CE)/g dried sample.

2.4.4. Saponin content
Saponin content of P. trimera extracts was determined according to the method described by Vuong et al. (2013) with the modified procedure to reduce analytical time. Briefly, 0.5 mL of the extract was mixed with 0.5 mL of 8% (w/v) vanillin solution, then 5 mL of 72% (v/v) H2 SO4 solution was added. The mixture was then incubated at 70 ◦ C for 10 min and rapidly cooled by ice water to room temperature. The absorbance of mixture was measured at
560 nm using a UV–vis spectrophotometer. Methanol and escin were used as a control and standard, respectively.

Kết quả (Việt) 1:

1. giới thiệuXao tam phan (Paramignya trimera (Oliv.) Guillaum) có một syn-onym của Atalantia trimera Oliv., mà thuộc về chi Paramignya cam chanh (Rutaceae) và cũng được biết đến như một loại cây anh cứu thương ở Thái Lan và Việt Nam (Nguyễn và ctv., 2013). Các nghiên cứu gần đây trên P. trimera đã tiết lộ hepatoprotective và cyto độc hại hoạt động từ một thô methanolic giải nén (Nguyễn và ctv., 2013). Quan trọng, methanolic trích, n-hexane phần nhỏ và một hợp chất cá nhân bị cô lập từ P. trimera, được đặt tên ostruthin (6-(3,7-dimethyl-2,6-octadienyl) 7-hydroxy-2H-1-benzopyran-2-một) đã chứng minh độc tế bào hoạt động chống lại five ung thư tế bào dòng trong ống nghiệm, đặc biệt là, partitioned n-hexane phần nhỏ và ostruthin từ các methanolic giải nén Hiển thị hoạt động chống lại ung thư biểu mô hepatocel-lular (Hep-G2) và dòng tế bào con người biểu mô ung thư cổ tử cung (Hela) với IC50 giá trị của 39.61 và 5.36 g/ml, respec-cách. Phạm et al. (2013) cũng bị cô lập nhất và theo phân tích ostruthin là một hợp chất chính trong P. trimera rễ và thân cây, trong khi Li et al. (2012) cho thấy rằng ostruthin Hiển thị activ-anh mạnh chống lại ung thư tuyến tụy di động dây chuyền. Các nghiên cứu chỉ ra rằng trimera P. chứa chất phytochemical hoạt tính sinh học quan trọng, Tuy nhiên nó là bắt buộc để tối ưu hóa khai thác điều kiện để tối đa hóa sản lượng của chất phytochemical chiết xuất cho tiềm năng y học exploita-tion.Dung môi loại và khai thác các phương pháp trực tiếp ảnh hưởng đến efficiency extrac-tion và liên quan đến chi phí sản xuất như thời gian khai thác, khối lượng dung môi, chi phí năng lượng cũng như hiệu quả về con người và môi trường (Dai và Mumper, 2010; Azmir et al., 2013; Kalia et al., 2008). Những năm gần đây, kỹ thuật tiên tiến khai thác đã được phát triển và áp dụng để tối ưu hóa việc khai thác của phenolics từ vật liệu thực vật. Ví dụ, khai thác hỗ trợ siêu âm (UAE), khai thác hỗ trợ lò vi sóng (MAE) và công nghệ-niques bằng cách sử dụng nén fluids chẳng hạn như khai thác nước subcritical (SWE), siêu tới hạn fluid khai thác (SFE), áp lực fluid khai thác (PFE) hoặc tăng tốc chiết dung môi (ASE) (Tiwari et al., năm 2011; Doughari, 2012) đã chứng minh để significantly giảm thời gian khai thác cũng như được khai thác cải tiến efficiency. Vì lý do này, cẩn thận xem xét cho việc lựa chọn loại dung môi và phương pháp khai thác là một bước rất quan trọng trong việc chuẩn bị của các chiết xuất từ thực vật liệu.Rất ít nghiên cứu đã báo cáo hóa lý đúng-quan hệ và các hoạt động sinh học của chất chiết xuất từ P. trimera và không có tập trung vào sự lựa chọn của phương pháp dung môi và khai thác. Với điều này trong tâm trí, chúng tôi nghiên cứu điều tra hiệu ứng của các dung môi loại khác nhau và các phương pháp khai thác trên sản lượng phytochemical và antioxi-dant công suất của chất chiết xuất từ gốc P. trimera. Dữ liệu của chúng tôi tiết lộ các điều kiện tối ưu cho loại dung môi và khai thác phương pháp cho prepara-tion của thô P. trimera gốc chất chiết xuất từ cho các ứng dụng tiềm năng trong nutraceutical và/hoặc ngành công nghiệp dược phẩm.2. tài liệu và phương pháp2.1. nhà máy vật liệuP. trimera gốc được thu thập từ huyện Ninh Hòa, tỉnh Khánh Hòa, Việt Nam vào tháng 1 năm 2014 và identified bởi quốc gia viện của dược liệu, bộ y tế, Việt Nam. Sau khi bộ sưu tập, mẫu tươi đã được rửa trong nước deionized để loại bỏ cát và đất, để ráo nước và trái để khô dưới ánh mặt trời (34,5 ± 1 ◦ C) để trọng lượng liên tục, và sau đó đóng gói trong túi niêm phong chân không polyamide (PA) và được lưu trữ tại −18 ◦ C cho đến khi được sử dụng. Độ ẩm resid-ual của các mẫu khô đã được xác định theo phương pháp phân tích (AOAC, 1998) AOAC lần sử dụng một lò khí (Anax Pty Ltd, NSW, Australia) ở 120 ◦ C cho 5 h.2.2. phân tích hóa chấtTất cả các hóa chất sử dụng là phân tích lớp. 2,2 - azino-bis -3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic axit (ABTS), 1,1-diphenyl -2-picryl-hydrazil (DPPH), Folin-Ciocalteu, trolox, neocuproine,2,4,6-tripyridyl-s-triazine (TPTZ), sắt (III) clorua và tiêu chuẩn hợp chất trong đó gallic acid, p-coumaric axit, axit caffeic,5,7-dimethoxycoumarin, quercetin, kaempferol, rutin, syringic axit, chlorogenic axit, escin, (+)-catechin, (−) - epicatechin, (±) - naringin, myricetin, luteolin, apigenin, (−) - epigallocatechin gallate, -D-- sitosterol - glucoside, gemcitabine, - sitosterol, và axít ascorbic đã được mua từ Sigma-Aldrich Pty Ltd (NSW, Úc). Vanillin, kali persulfate, methanol và ethanol đã thu được từ Merck (Darmstadt, Đức). Đồng (II)clorua đã được mua từ tiêu chuẩn phòng thí nghiệm (Victoria, Úc). Natri axetat trihydrat thu được từ bộ phận cửa hàng chính phủ Việt Nam-ernment (Úc). Amoni axetat được mua từ BDH hóa chất (Victoria, Úc). Nhôm clorua (Khan) nhận được từ Acros (New Jersey, Hoa Kỳ). Natri hydroxit được mua từ Ajax hóa chất (NSW, Úc). Natri cacbonat Khan đã được mua từ Chem cung cấp (Gillman, Nam Úc). Axít sulfuric và axít clohiđric đã được mua từ Ajax Finechemicals (NSW, Úc), và axit axetic nhận được từ BDH phòng thí nghiệm Sup-ply (Poole, Vương Quốc Anh).2.3. chuẩn bị các chất chiết xuất từĐể chọn tốt nhất các dung môi để tiếp tục nghiên cứu, five các dung môi được đánh giá bao gồm nước (WT), acetonitrile (AT), methanol (MT), etyl axetat (EA) và hexan (HX). Sau đó, ba phương pháp khai thác khác nhau được áp dụng với dung môi đã chọn, tức là con - ventional khai thác (CE), khai thác hỗ trợ siêu âm (UAE) và khai thác hỗ trợ lò vi sóng (MAE). Các chất chiết xuất của P. trimera gốc đã được chuẩn bị theo phương pháp mô tả bởi Nguyen et al. (2011) với một số modifications. Các thủ tục khai thác như sau:Cho tác dụng của dung môi: cách 0.2 g khô mẫu được chiết xuất với20 mL dung môi khác nhau áp dụng UAE bằng cách sử dụng một sạch siêu âm Soniclean 1000HD (Soniclean Pty Ltd, Nam Úc) tại một sức mạnh của 150 W và 45 ◦ C trong 60 phút.Cho tác dụng của phương pháp khai thác: cách 0.2 g khô mẫu được chiết xuất với 20 mL dung môi đã chọn, quá trình khai thác bao gồm hai giai đoạn: giai đoạn chính đã được thiết lập ở nhiệt độ phòng (20 ◦ ± 1 C) cho 20 phút, và giai đoạn thứ hai được chiết xuất bằng cách sử dụng các phương pháp khác nhau cho 60 min. CE được tiến hành bằng cách sử dụng một waterbath (Buchi, FlawilThụy sĩ) tại 45 ◦ C, UAE đã được thực hiện bằng cách sử dụng một sạch siêu âm Soniclean 1000HD tại một sức mạnh của 150 W và 45 ◦ C, và MAE được tiến hành bằng cách sử dụng một lò nướng lò vi sóng (Sharp Carousel, Sharp Corporation, Thái Lan) tại một sức mạnh của 360 W, với ini - chướng chiếu xạ thời gian 15 s, sau đó 5 s cho mỗi thêm 5 phút (chiếu xạ tất cả thời gian được áp dụng cho là 70 s).Sau khi khai thác, các chất chiết xuất đã được nhanh chóng làm mát để phòng tem-perature bằng nước đá và sau đó filtered thông qua chất lượng số 1 filter giấy tờ (Bacto phòng thí nghiệm Pty Ltd, NSW, Úc) để có được chất chiết xuất từ để thêm phân tích. Để xác định sản lượng khai thác, 2 mL chiết xuất được khô trong một lò khí (Anax Pty Ltd, NSW, Australia) ở 100 ◦ C cho 4 h đến một trọng lượng liên tục (sản lượng khai thác = g khô chiết xuất/100 g của mẫu khô).2.4. xác định hợp chất phytochemical2.4.1. tất cả nội dung phenolic (TPC)Chất chiết xuất từ TPC P. trimera đã được xác định bằng cách sử dụng phương pháp Folin-Ciocalteu như mô tả trước đó bởi Nguyễn et al. (2011) và Vương et al. (2013) với một số modifications. Briefly,cách 0.5 mL của các chất chiết xuất đã là pha loãng 2 lần và hỗn hợp với 2.5 mL của 10% (v/v) Folin-Ciocalteu tinh khiết trong nước cất. Hỗn hợp còn lại để giải quyết trong 6 phút, sau đó 2 mL 7,5% (w/v) giải pháp Na2 CO3 được thêm vào và ủ trong bóng tối ở nhiệt độ phòng cho 1 h. Hấp thu của hỗn hợp được đo tại 765 nm bằng cách sử dụng một phối UV-vis (Cary 50 sinh học Varian, Úc). Methanol và gallic acid được sử dụng như một tiêu chuẩn và kiểm soát. TPC được bày tỏở mg gallic acid tương đương (GAE) /g khô mẫu.2.4.2. tất cả flavonoid nội dung (TFC)TFC P. trimera chiết xuất được thực hiện theo phương pháp mô tả bởi Vương et al. (2013) với một số modifica-tions. cách 0.5 mL chiết xuất được trộn với 2 mL nước cất và0.15 mL 5% (w/v) giải pháp Na2 CO3 và ủ trong bóng tối ở nhiệt độ phòng cho 6 phút 0,15 mL của 10% (w/v) giải pháp AlCl3 sau đó được thêm vào và ủ trong một thêm 6 phút. Cuối cùng, 2 mLgiải pháp NaOH 4% (w/v) và cách 0.7 mL nước cất đã được thêm vào và ủ trong 15 phút. Hấp thu của hỗn hợp là mea-sured tại 510 nm bằng cách sử dụng một phối UV-vis. Methanol và rutin được sử dụng như một điều khiển và tiêu chuẩn, tương ứng. TFC được biểu thị dưới dạng mg của rutin tương đương (lại) /g khô mẫu.2.4.3. Proanthocyanidin nội dungProanthocyanidin nội dung của chất chiết xuất từ P. trimera đã được xác định bằng cách sử dụng phương pháp mô tả bởi Vương et al. (2013) với một số mod-ifications. Briefly, cách 0.5 mL chiết xuất được trộn với 3 mL của các giải pháp vanillin 4% (w/v), sau đó 1.5 mL của HCl tập trung đã được bổ sung và hỗn hợp được ủ trong bóng tối ở nhiệt độ phòng cho15 phút. Hấp thu của hỗn hợp được đo tại 500 nm bằng cách sử dụng một phối UV-vis. Methanol và catechin được sử dụng như một điều khiển và tiêu chuẩn, tương ứng. Proanthocyanidin nội dung được biểu thị dưới dạng mg catechin tương đương (CE) /g khô mẫu.2.4.4. saponin nội dungSaponin nội dung của chất chiết xuất từ P. trimera đã được xác định theo phương pháp mô tả bởi Vương et al. (2013) với các thủ tục modified để giảm thời gian phân tích. Briefly, cách 0.5 mL chiết xuất được trộn với cách 0.5 mL 8% (w/v) vanillin giải pháp, sau đó 5 mL 72% (v/v) H2 SO4 giải pháp đã được bổ sung. Hỗn hợp sau đó ủ tại 70 ◦ C cho 10 phút và nhanh chóng làm mát bằng nước đá để nhiệt độ phòng. Hấp thu của hỗn hợp được đo tại560 nm bằng cách sử dụng một phối UV-vis. Methanol và escin được sử dụng như một điều khiển và tiêu chuẩn, tương ứng.

Kết quả (Việt) 2:

1. Giới thiệu Xao tam phan (Paramignya trimera (Oliv.) Guillaum) có một hội chứng của onym Atalantia trimera Oliv., thuộc chi Citrus Paramignya của gia đình (Rutaceae) và cũng được biết đến như một nhà máy inal medic- ở Thái Lan và Việt Nam (Nguyen et al., 2013). Các nghiên cứu gần đây trên P. trimera đã tiết lộ hepatoprotective và hoạt động độc cyto- từ dịch chiết methanol thô (Nguyen et al., 2013). Quan trọng hơn, methanol, phần n-hexane và hợp chất phân lập từ cá nhân P. trimera, ostruthin tên (6- (3,7-dimethyl-2,6-octadienyl) 7-hydroxy-2H-1-benzopyran-2- một ) đã chứng minh hoạt động gây độc tế bào chống lại fi ve dòng tế bào ung thư trong ống nghiệm, đặc biệt là, các phân vùng n-hexane và ostruthin từ chiết xuất hoạt động hiển thị methanol chống hepatocel- carcinoma lular (Hep-G2) và biểu mô ung thư cổ tử cung (Hela) dòng tế bào người với IC50 giá trị của 39,61 và 5,36 g / ml, tương ứng. Pham et al. (2013) cũng được phân lập và định lượng phân tích ostruthin là một hợp chất chính trong rễ trimera P. và thân cây, trong khi Li et al. (2012) cho thấy rằng ostruthin hiển thị ity activ- mạnh chống lại các dòng tế bào ung thư tuyến tụy. Những nghiên cứu này chỉ ra rằng P. trimera chứa phytochemicals hoạt tính sinh học quan trọng, tuy nhiên nó là bắt buộc để tối ưu hóa các điều kiện khai thác tối đa hóa năng suất của chất phytochemical trích cho tiềm năng sự exploita- thuốc. loại dung môi và phương pháp chiết xuất trực tiếp ảnh hưởng đến khai thác nước ef fi ciency và liên quan đến chi phí sản xuất như thời gian khai thác, khối lượng dung môi, chi phí năng lượng cũng như các tác động đối với con người và môi trường (Đại và Mumper, 2010; Azmir et al 2013,;. Kalia et al, 2008.). Trong những năm gần đây, kỹ thuật chiết xuất tiên tiến đã được phát triển và áp dụng để tối ưu hóa việc khai thác các phenolics từ nguyên liệu thực vật. Ví dụ, khai thác siêu âm hỗ trợ (UAE), khai thác lò vi sóng hỗ trợ (MAE) và nghệ kỹ bằng cách sử dụng nén fl uids như: khai thác dưới tới hạn nước (SWE), siêu fl uid khai thác (SFE), áp lực khai thác fl uid (PFE) hoặc tăng tốc dung môi khai thác (ASE) (Tiwari et al, 2011;. Doughari, 2012) đã chứng minh là đáng trong yếu giảm thời gian khai thác cũng như có được cải thiện chiết ef fi ciency. Vì lý do này, xem xét cẩn thận để lựa chọn các loại dung môi và phương pháp khai thác là một bước quan trọng trong việc chuẩn bị của các chất chiết xuất từ nguyên liệu thực vật. Rất ít nghiên cứu đã báo cáo các mối quan hệ proper- hóa lý và hoạt động sinh học của P. chiết xuất trimera và không tập trung lựa chọn các phương pháp dung môi và khai thác. Với điều này trong tâm trí, nghiên cứu của chúng tôi đã nghiên cứu ảnh hưởng của các loại dung môi khác nhau và các phương pháp khai thác trên năng suất và chất chống oxy hoá phytochemical suất dant của P. chiết xuất rễ trimera. Dữ liệu của chúng tôi cho thấy các điều kiện tối ưu cho loại dung môi và phương pháp khai thác cho việc chuẩn bị của các chất chiết xuất từ rễ thô P. trimera cho ứng dụng tiềm năng trong dinh dưỡng và / hoặc các ngành công nghiệp dược phẩm. 2. Vật liệu và phương pháp 2.1. Nguyên liệu thực vật P. trimera gốc được thu thập từ các huyện Ninh Hòa, tỉnh Khánh Hòa, Việt Nam vào tháng Giêng năm 2014 và identi fi ed bởi Viện Dược liệu, Bộ Y tế, Việt Nam. Sau khi thu thập, các mẫu tươi được rửa lại bằng nước khử ion để loại bỏ cát và đất, để ráo nước và để khô dưới ánh mặt trời (34,5 ± 1 ◦ C) đến khối lượng không đổi, và sau đó đóng gói trong chân không niêm phong polyamide (PA) Túi và bảo quản ở -18 ◦ C cho đến khi sử dụng. Các ual ẩm resid- của mẫu khô được xác định theo phương pháp AOAC của fi tài phân tích (AOAC, 1998) sử dụng một lò nóng không khí (Anax Pty Ltd., NSW, Australia) tại 120 ◦ C trong 5 giờ. 2.2. Hóa chất phân tích tất cả các hóa chất được sử dụng là loại phân tích. 2,2 -azino-bis- acid 3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic (ABTS), 1,1-diphenyl- 2-picryl-hydrazil (DPPH), Folin-Ciocalteu, trolox, neocuproine, 2,4,6-tripyridyl -s-triazin (TPTZ), sắt (III) clorua và các hợp chất tiêu chuẩn bao gồm axit galic, axit p-coumaric, axit caffeic, 5,7-dimethoxycoumarin, quercetin, kaempferol, rutin, axit syringic, acid chlorogenic, escin, (+ ) -catechin, (-) - epicatechin, (±) - naringenin, myricetin, luteolin, apigenin, (-) - epigallocatechin gallate, -sitosterol- -D-glucoside, gemcitabine, -sitosterol, và acid ascorbic được mua từ Sigma- Aldrich Pty Ltd (NSW, Australia). Vanillin, potassium persulfate, methanol và ethanol được lấy từ Merck (Darmstadt, Đức). Đồng (II) clorua đã được mua từ Standard Laboratories (Victoria, Australia). Sodium acetate trihydrat được thu thập từ Bách phủ phủ (Australia). Ammonium acetate được mua từ BDH Hóa chất (Victoria, Australia). Nhôm clorua (khan) thu được từ Acros (New Jersey, Mỹ). Sodium hydroxide được mua từ các hóa chất Ajax (NSW, Australia). Sodium carbonate khan đã được mua từ Chem-cung (Gillman, South Australia). Axit sulfuric và acid hydrochloric được mua từ Ajax Finechemicals (NSW, Australia), và acid acetic được thu thập từ BDH Phòng thí nghiệm trợ giúp trong Plies (Poole, Anh). 2.3. Chuẩn bị chiết xuất Để chọn các dung môi tốt nhất để nghiên cứu thêm, fi ve dung môi khác nhau được đánh giá bao gồm cả nước (WT), acetonitrile (AT), methanol (MT), ethyl acetate (EA) và hexane (HX). Sau đó, ba phương pháp chiết xuất khác nhau đã được áp dụng với dung môi được lựa chọn, tức là dựng quy ước khai thác (CE), chiết xuất siêu âm hỗ trợ (UAE) và khai thác lò vi sóng hỗ trợ (MAE). Các chất chiết xuất của P. trimera gốc đã được chuẩn bị theo phương pháp mô tả bởi Nguyen et al. (2011) với một số cation Modi fi. Các thủ tục khai thác như sau: Đối với ảnh hưởng của dung môi: 0,2 g mẫu khô được chiết xuất với 20 ml dung môi khác nhau áp dụng UAE sử dụng một trình dọn dẹp siêu âm Soniclean 1000HD (Soniclean Pty Ltd., South Australia) với mức công suất 150 W và 45 ◦ C trong 60 phút. Để có hiệu lực của phương pháp chiết: 0,2 g mẫu khô được chiết xuất với 20 ml dung môi được lựa chọn, quá trình khai thác bao gồm hai giai đoạn: giai đoạn đầu tiên kinh được đặt ở nhiệt độ phòng (20 ± 1 ◦ C) trong 20 min, và giai đoạn thứ hai được trích xuất bằng phương pháp khác nhau trong 60 phút. CE đã được thực hiện bằng cách sử dụng một waterbath (Buchi, Flawil, Thụy Sĩ) ở 45 ◦ C, UAE đã được thực hiện bằng cách sử dụng một trình dọn dẹp siêu âm Soniclean 1000HD với mức công suất 150 W và 45 ◦ C, và MAE được thực hiện bằng cách sử dụng lò vi sóng (Sharp Carousel, Sharp Corporation, Thái Lan) với mức công suất 360 W, với thời gian chiếu xạ tiềm ini- 15 s, sau đó 5 s cho mỗi thêm 5 phút (tổng thời gian chiếu xạ đã được áp dụng là 70 s). Sau khi khai thác, các chất chiết xuất đã nhanh chóng làm lạnh đến phòng tem- perature bằng nước đá và sau đó FI ltered qua không tính. 1 fi lter giấy tờ (Bacto Laboratories Pty Ltd., NSW, Australia) để có được chiết xuất để phân tích thêm. Để xác định sản lượng khai thác, 2 ml chiết xuất đã được sấy khô trong lò nóng không khí (Anax Pty Ltd., NSW, Australia) tại 100 ◦ C trong 4 giờ để một khối lượng không đổi (sản lượng khai thác = g chiết xuất khô / 100 g mẫu khô). 2.4. Xác định các hợp chất phytochemical 2.4.1. Tổng số nội dung phenolic (TPC) TPC của P. chiết xuất trimera được xác định bằng cách sử dụng phương pháp Folin-Ciocalteu như mô tả trước đây bởi Nguyen et al. (2011) và Vương et al. (2013) với một số cation Modi fi. Brie fl y, 0,5 mL của các chất chiết xuất được pha loãng 2 lần và trộn với 2,5 ml dung dịch 10% (v / v) Folin-Ciocalteu thuốc thử trong nước cất. Hỗn hợp được để lại để giải quyết cho 6 phút, sau đó 2 mL 7,5% (w / v) giải pháp NA2 CO3 được thêm vào và ủ trong bóng tối ở nhiệt độ phòng trong 1 h. Độ hấp thụ của hỗn hợp được đo ở 765 nm sử dụng một máy quang phổ UV-vis (Cary 50 Bio Varian, Australia). Methanol và axit gallic đã được sử dụng như một điều khiển và tiêu chuẩn. TPC đã được thể hiện trong mg tương đương axit gallic (GAE) mẫu / g khô. 2.4.2. Tổng số nội dung avonoid fl (TFC) TFC của P. chiết xuất trimera được thực hiện theo phương pháp mô tả bởi Vuong et al. (2013) với một số Modi fi ca- tions. 0,5 ml chiết xuất được trộn với 2 ml nước cất và 0,15 mL 5% (w / v) giải pháp NA2 CO3 và ủ trong bóng tối ở nhiệt độ phòng trong 6 phút. 0,15 ml 10% (w / v) giải pháp AlCl3 sau đó đã được thêm vào và ủ thêm 6 phút. Cuối cùng, 2 mL 4% (w / v) dung dịch NaOH và 0,7 ml nước cất đã được thêm vào và ủ trong 15 phút. Độ hấp thụ của hỗn hợp đã được đo lường mức độ sured tại 510 nm sử dụng một máy quang phổ UV-vis. Methanol và rutin được sử dụng như một điều khiển và tiêu chuẩn tương ứng. TFC được thể hiện như mg tương đương rutin (RE) / g mẫu khô. 2.4.3. Nội dung Proanthocyanidin Proanthocyanidin nội dung của P. chiết xuất trimera được xác định bằng cách sử dụng phương pháp mô tả bởi Vuong et al. (2013) với một số mô hình hóa i fi cation. Brie fl y, 0,5 ml dung dịch chiết xuất được trộn với 3 ml 4% (w / v) giải pháp vanillin, sau đó 1,5 ml dung dịch HCl đậm đặc được thêm vào và hỗn hợp được ủ trong bóng tối ở nhiệt độ phòng trong 15 phút. Độ hấp thụ của hỗn hợp được đo ở 500 nm sử dụng một máy quang phổ UV-vis. Methanol và catechin đã được sử dụng như một điều khiển và tiêu chuẩn tương ứng. Nội dung Proanthocyanidin được thể hiện như mg tương đương catechin (CE) mẫu / g khô. 2.4.4. Nội dung Saponin Saponin nội dung của P. chiết xuất trimera được xác định theo phương pháp mô tả bởi Vuong et al. (2013) với các thủ tục fi ed Modi để giảm thời gian phân tích. Brie fl y, 0,5 ml dung dịch chiết xuất được trộn với 0,5 ml 8% (w / v) giải pháp vanillin, sau đó 5 ml 72% (v / v) giải pháp H2 SO4 đã được bổ sung. Hỗn hợp này sau đó được ủ ở 70 ◦ C trong 10 phút và nhanh chóng làm mát bằng nước đá để nhiệt độ phòng. Độ hấp thụ của hỗn hợp được đo ở 560 nm sử dụng một máy quang phổ UV-vis. Methanol và escin đã được sử dụng như một điều khiển và tiêu chuẩn tương ứng.