superoxide generation in human neut

superoxide generation in human neutrophils. The results of our previous study
suggested that protein tyrosine kinase participates in the mechanism for priming
of HPPMNs by cystathionine ketimine [18–20]. Therefore, to determine if
protein kinase C and protein tyrosine kinase participate in the mechanism for
priming of HPPMNs by timosaponins E1 and E2, the effect of protein kinase
inhibitors on PMA-induced superoxide generation was examined. PMA-induced
superoxide generation by timosaponins E1 and E2 was inhibited by stauros-
porine, an inhibitor of protein kinase C, in a concentration-dependent manner.
On the other hand, the effect of genistein, an inhibitor of protein tyrosine kinase,
on superoxide generation was negligible (Fig. 3). These results suggest that
timosaponins E1 and E2 enhance superoxide generation in neutrophils via
activation of protein kinase C.
We have previously reported that the phosphorylation process of tyrosine
residues of HPPMN proteins was inhibited by genistein and herbimycine A,
inhibitors of tyrosine protein kinase [20,25]. Therefore, the effect of
timosaponins E1 and E2 on the phosphorylation of tyrosine residues of HPPMN
protein in fMLP-induced neutrophils was examined. When the fMLP-induced
neutrophils were incubated with timosaponin E1, the phosphorylation of tyrosine
residues of the 58 kDa protein markedly decreased, in parallel with a decrease in
superoxide generation (Fig. 4). Timosaponin E2 also inhibited the phosphoryla-
tion of tyrosine residues of the 58 kDa protein in fMLP-induced neutrophils
(data not shown). These results indicate that timosaponins E1 and E2 decrease
superoxide generation in neutrophils via inhibition of tyrosine protein kinase. We
previously reported detecting several priming factors for the phosphorylation of
tyrosine residues in a 45 kDa protein of human neutrophils, and that the
phosphorylation was inhibited by the tyrosine kinase inhibitors, genistein and
herbimycin A, but not by the protein kinase C inhibitors, staurosporine and H-7.
The priming factors enhanced superoxide generation induced by PMA and AA.
The function of timosaponins E1 and E2 in agonist-mediated superoxide
generation in human neutrophils was different from that of other priming factors
investigated in previous papers. At present, the mechanism for inhibition of
fMLP-induced superoxide generation, for inhibition of protein tyrosine kinase
and for activation of PMA-induced superoxide generation by timosaponins E1
and E2 is unknown. Whether timosaponins E1 and E2 alter the properties of
fMLP- and PMA-receptors by direct binding or indirectly by changing the
membrane environment is also unknown. It has been reported that a 47 kDa
protein, one of the cytosolic proteins for activation of NADPH oxidase in human
neutrophils, was phosphorylated in human neutrophils after stimulation with
fMLP or PMA, based on an analysis using SDS–PAGE [26]. In the present
study, we therefore also examined the effect of timosaponins E1 and E2 on this
47 kDa protein in neutrophils by using human monoclonal antibody to human

Kết quả (Việt) 1:

superoxide các thế hệ trong bạch cầu trung tính của con người. Kết quả nghiên cứu trước đây của chúng tôiđề nghị rằng protein tyrosine kinase tham gia các cơ chế cho lớp sơn lótcủa HPPMNs do cystathionine ketimine [18-20]. Do đó, để xác định xemprotein kinase C và protein tyrosine kinase tham gia vào cơ chếmồi của HPPMNs bởi timosaponins E1 và E2, tác dụng của protein kinaseức chế về thế hệ PMA induced superoxide được kiểm tra. PMA-induced.superoxide thế hệ bởi timosaponins E1 và E2 ức chế bởi stauros-porine, một chất ức chế protein kinase C, một cách phụ thuộc vào nồng độ.Mặt khác, tác dụng của genistein, một chất ức chế protein tyrosine kinase,trên superoxide thế hệ là không đáng kể (hình 3). Những kết quả này cho thấy rằngtăng cường timosaponins E1 và E2 superoxide thế hệ trong bạch cầu trung tính thông quakích hoạt của protein kinase C.Chúng tôi trước đó đã thông báo rằng quá trình phosphorylation tyrosinedư lượng HPPMN protein ức chế bởi genistein, herbimycine A,ức chế tyrosine protein kinase [20,25]. Vì vậy, tác dụng củatimosaponins E1 và E2 trên phosphorylation tyrosine dư lượng của HPPMNprotein trong fMLP gây ra bạch cầu trung tính được kiểm tra. Khi các fMLP gây rabạch cầu trung tính được ủ với timosaponin E1, phosphorylation tyrosineCác dư lượng của protein 58 kDa rõ rệt giảm, song song với sự sụt giảmsuperoxide các thế hệ (hình 4). Timosaponin E2 cũng ức chế phosphoryla-tion của tyrosine dư lượng của protein 58 kDa trong bạch cầu trung tính gây ra fMLP(không hiển thị dữ liệu). Những kết quả này chỉ ra rằng timosaponins E1 và E2 giảmsuperoxide các thế hệ trong bạch cầu trung tính thông qua sự ức chế tyrosine protein kinase. Chúng tôitrước đó đã thông báo phát hiện một số yếu tố mồi cho phosphorylation củatyrosine dư lượng đạm 45 kDa của bạch cầu trung tính của con người, và rằng cácphosphorylation ức chế bởi tyrosine kinase inhibitors, genistein vàherbimycin A, nhưng không phải bởi các chất ức chế protein kinase C, staurosporine và H-7.Priming các yếu tố nâng cao thế hệ superoxide gây ra bởi PMA và AA.Các chức năng của timosaponins E1 và E2 tại trung gian agonist superoxidecác thế hệ trong bạch cầu trung tính của con người được tách biệt nó khỏi các yếu tố khác của lớp sơn lótnghiên cứu khoa học trước đó. Hiện nay, cơ chế ức chếthế hệ superoxide fMLP gây ra, cho sự ức chế của protein tyrosine kinasevà để kích hoạt các thế hệ PMA induced superoxide bởi timosaponins E1và E2 là không rõ. Cho dù timosaponins E1 và E2 làm thay đổi các thuộc tính củafMLP-PMA-thụ thể và ràng buộc trực tiếp hoặc gián tiếp bằng cách thay đổi cácmàng môi trường cũng là không rõ. Nó đã được báo cáo rằng một kDa 47chất đạm, protein cytosolic để kích hoạt NADPH oxidase trong con ngườibạch cầu trung tính, phosphorylated trong bạch cầu trung tính của con người sau khi kích thích vớifMLP hoặc PMA, dựa trên phân tích bằng cách sử dụng SDS-trang [26]. Trong hiện tạinghiên cứu, chúng tôi do đó cũng kiểm tra tác dụng của timosaponins E1 và E2 này47 kDa protein trong bạch cầu trung tính bằng cách sử dụng con người monoclonal kháng để con người

Kết quả (Việt) 2:

thế hệ superoxide trong bạch cầu trung tính của con người. Các kết quả nghiên cứu trước đây của chúng tôi
cho thấy rằng protein tyrosine kinase tham gia vào cơ chế mồi
của HPPMNs bởi cystathionine ketimine [18-20]. Vì vậy, để xác định xem
protein kinase C và protein tyrosine kinase tham gia vào các cơ chế
mồi của HPPMNs bởi timosaponins E1 và E2, tác dụng của protein kinase
ức chế trên hệ superoxide PMA-gây ra đã được kiểm tra. PMA-do
hệ superoxide bởi timosaponins E1 và E2 bị ức chế bởi stauros-
porine, một chất ức chế protein kinase C, một cách phụ thuộc nồng độ.
Mặt khác, hiệu quả của genistein, một chất ức chế protein tyrosine kinase,
trên superoxide thế là không đáng kể (Hình. 3). Những kết quả này gợi ý rằng
E1 và E2 timosaponins tăng cường hệ superoxide trong bạch cầu trung tính thông qua
hoạt hóa protein kinase C.
Chúng tôi trước đây đã thông báo rằng quá trình phosphoryl hóa tyrosine
dư lượng protein HPPMN bị ức chế bởi genistein và herbimycine A,
chất ức chế protein tyrosine kinase [20, 25]. Do đó, ảnh hưởng của
timosaponins E1 và E2 trên phosphoryl dư lượng tyrosine của HPPMN
protein trong bạch cầu trung tính fMLP gây ra đã được kiểm tra. Khi fMLP gây ra
bạch cầu trung tính được ủ với timosaponin E1, sự phosphoryl hóa tyrosine
dư lượng protein kDa 58 giảm đi rõ rệt, song song với việc giảm
hệ superoxide (Hình. 4). Timosaponin E2 cũng ức chế sự phosphoryla-
sự dư lượng tyrosine của kDa protein 58 trong bạch cầu trung tính fMLP gây ra
(dữ liệu không hiển thị). Những kết quả này chỉ ra rằng timosaponins E1 và E2 giảm
hệ superoxide trong bạch cầu trung tính bằng cách ức chế kinase protein tyrosine. Chúng tôi
báo cáo trước đây phát hiện một số yếu tố mồi cho phosphoryl
dư lượng tyrosine trong một kDa protein 45 của bạch cầu trung tính của con người, và rằng
sự phosphoryl hóa bị ức chế bởi các thuốc ức chế tyrosine kinase, genistein và
herbimycin A, nhưng không phải bởi các protein kinase C ức chế, staurosporine và H-7.
các yếu tố mồi tăng cường hệ superoxide gây ra bởi PMA và AA.
chức năng của timosaponins E1 và E2 trong superoxide agonist qua trung gian
thế hệ trong bạch cầu trung tính con người là khác nhau từ các yếu tố mồi khác
điều tra trong các giấy tờ trước. Hiện nay, cơ chế ức chế của
hệ superoxide fMLP gây ra, để ức chế protein tyrosine kinase
và để kích hoạt của hệ superoxide PMA-gây ra bởi timosaponins E1
và E2 là không rõ. Cho dù timosaponins E1 và E2 thay đổi các thuộc tính của
fMLP- và PMA-thụ bởi trực tiếp ràng buộc hoặc gián tiếp bằng cách thay đổi
môi trường màng cũng không biết. Nó đã được báo cáo rằng một kDa 47
protein, một trong những protein cytosolic để kích hoạt NADPH oxidase trong nhân
bạch cầu trung tính, đã được phosphoryl hóa trong bạch cầu trung tính của con người sau khi kích thích với
fMLP hoặc PMA, dựa trên một phân tích sử dụng SDS-PAGE [26]. Trong hiện
nghiên cứu, do đó chúng tôi cũng kiểm tra ảnh hưởng của timosaponins E1 và E2 vào này
47 kDa protein trong bạch cầu trung tính bằng cách sử dụng kháng thể đơn dòng người sang người