The 2077Hu2 VH was digested and clo

The 2077Hu2 VH was digested and cloned into a mammalian expression vector with human IgG1 constant region, pFUSEss-CHIg-hG1 (InvivoGen, CA, USA) at EcoRI/NheI (New England Biolabs, MA, USA) restriction sites. The VL was digested and cloned into mammalian
expression vector with human kappa chain constant region, pFUSE2ss-CLIg-hk (InvivoGen) at EcoRI/BsiWI (New England Biolabs) restriction sites. The VH and VL expression vectors for 2077Hu2, were then cotransfected into CHO-K1 cells using calcium-phosphate transfection method [22]. The cells were further grown for 4 weeks in the presence of Zeocin (250  μg/mL) and Blasticidin (5 μg/mL; Life Technologies) and single clones were selected. The large-scale antibody expression was carried out in CD-CHO medium upplemented with 8 mM L-glu-tamine (Life Technologies). The antibodies from culture
supernatant were purified using protein-G sepharose (GE Healthcare Biosciences AB, Uppsala, Sweden).

Kết quả (Việt) 1:

2077Hu2 VH tiêu hóa và nhân bản thành một vector động vật có vú biểu hiện với con người khu vực liên tục IgG1, pFUSEss-CHIg-hG1 (InvivoGen, CA, USA) tại EcoRI/NheI (New England Biolabs, MA, USA) hạn chế trang web. VL tiêu hóa và nhân bản thành mammalianbiểu hiện các véc tơ với con người kappa chuỗi liên tục vùng, pFUSE2ss-CLIg-hk (InvivoGen) tại EcoRI/BsiWI (New England Biolabs) hạn chế trang web. Các vectơ thể hiện VH và VL cho 2077Hu2, sau đó đã được cotransfected vào các tế bào CHO-K1 bằng cách sử dụng phương pháp transfection canxi-phosphate [22]. Các tế bào đã được phát triển hơn nữa trong 4 tuần sự hiện diện của Zeocin (250 μg/mL) và Blasticidin (5 μg/mL; Công nghệ cuộc sống) và bắt chước duy nhất đã được lựa chọn. Biểu thức quy mô lớn các kháng thể được thực hiện trong CD-CHO upplemented vừa với 8 mM L-glu-tamine (cuộc sống công nghệ). Các kháng thể từ văn hóasupernatant đã được tinh chế bằng cách sử dụng protein-G sepharose (GE y tế Biosciences AB, Uppsala, Thụy Điển).

Kết quả (Việt) 2:

Các 2077Hu2 VH đã được tiêu hóa và nhân bản vô tính thành một vector biểu hiện động vật có vú với IgG1 con người khu vực liên tục, pFUSEss-CHIg-hG1 (InvivoGen, CA, USA) tại EcoRI / NheI (New England Biolabs, MA, USA) các trang web hạn chế. Các VL được tiêu hóa và nhân bản vô tính động vật có vú vào
vector biểu hiện với chuỗi kappa con người khu vực liên tục, pFUSE2ss-CLIg-hk (InvivoGen) tại EcoRI / BsiWI (New England Biolabs) các trang web hạn chế. Các VH và VL vector biểu hiện cho 2077Hu2, sau đó được cotransfected vào các tế bào CHO-K1 sử dụng calcium phosphate transfection phương pháp [22]. Các tế bào được phát triển hơn nữa trong 4 tuần trong sự hiện diện của Zeocin (250 mg / mL) và Blasticidin (5 mg / ml; Cuộc sống Technologies) và nhân bản duy nhất đã được lựa chọn. Các biểu hiện kháng thể có quy mô lớn đã được thực hiện trong CD-CHO trung upplemented với 8 mM L-Glu-tamine (Technologies Life). Các kháng thể từ văn hóa
gạn được tinh sạch bằng cách sử dụng protein-G Sepharose (GE Healthcare Biosciences AB, Uppsala, Thụy Điển).