Determination of inorganic phosphat

Determination of inorganic phosphate pool. The extraction method used was adapted from Lipman and Tuttle (33). This method avoids the measurement of labile phosphate compounds (such as acetylphosphate and butyrylphosphate) as inorganic phosphate. Samples (1.5 ml) were taken from steady-state chemostat cultures, immediately transferred into a cooled (to 220°C) Eppendorf tube, and centrifuged at 4°C for 1 min at 14,000 3 g. The pellet was washed with ice-cold MilliQ water (1.5 ml) and centrifuged again at 4°C for 1 min at 14,000 3 g. Ice-cold 5% trichloroacetic acid (0.5 ml) was added to the pellet, and the suspension was vortexed and centrifuged at 4°C for 1 min at 14,000 3 g. The acidic extract was then transferred to a chilled test tube containing a drop of thymol blue, and ice-cold neutralization solution (1 ml of concentrated ammonia, 0.4 ml of glacial acetic acid, 7.6 ml of water, and 1 ml of 0.4 M Na2CO3) was added quickly until a pH of 8 was reached. Alcoholic calcium chloride solution (2.5 ml; 3.3% CaCl2 in 33% ethanol) was added dropwise to the neutralized extract, and the calcium precipitate was recovered by centrifugation for 2 min at 14,000 3 g. The precipitate was washed with 2 ml of alcoholic calcium chloride solution and dissolved in 0.5 ml of 0.5 N HCl. The phosphate content of the extract was then determined by the method of Ames and Dubin (1).

Kết quả (Việt) 2:

Xác định hồ phosphate vô cơ. Các phương pháp khai thác sử dụng được chuyển thể từ Lipman và Tuttle (33). Phương pháp này tránh được sự đo lường của các hợp chất phosphate không ổn định (như acetylphosphate và butyrylphosphate) như phosphate vô cơ. Mẫu (1,5 ml) được lấy từ các nền văn hóa chemostat trạng thái ổn định, ngay lập tức chuyển thành một nguội (đến 220 ° C) tuýp Eppendorf, và ly tâm ở 4 ° C trong 1 phút ở 14.000 3 g. Các viên đã được rửa sạch bằng nước MilliQ băng lạnh (1,5 ml) và ly tâm một lần nữa ở 4 ° C trong 1 phút ở 14.000 3 g. Ice-lạnh 5% axit tricloaxetic (0,5 ml) đã được bổ sung vào thức ăn viên, và hệ thống treo được vortexed và ly tâm ở 4 ° C trong 1 phút ở 14.000 3 g. Các chiết xuất có tính axit sau đó đã được chuyển giao cho một ống nghiệm ướp lạnh có chứa một giọt thymol blue, và giải pháp trung hòa nước đá lạnh (1 ml amoniac đậm đặc, 0,4 ml dung dịch acid acetic băng, 7,6 ml nước và 1 ml dung dịch 0,4 M Na2CO3 ) đã được bổ sung một cách nhanh chóng cho đến khi pH của 8 đã đạt được. Giải pháp calcium chloride có cồn (2,5 ml; 3,3% CaCl2 trong 33% ethanol) đã được thêm từng giọt với chiết xuất được trung hòa, và các kết tủa canxi đã được phục hồi bằng cách ly tâm cho 2 phút ở 14.000 3 g. Kết tủa được rửa sạch với 2 ml cồn giải pháp calcium chloride và hòa tan trong 0,5 ml 0,5 N HCl. Các nội dung phosphate của các chiết xuất sau đó được xác định theo phương pháp của Ames và Dubin (1).