Principle catalase2 H2O2 ⎯⎯⎯⎯→ O2 

Principle
catalase
2 H2O2 ⎯⎯⎯⎯→ O2 2 H2O
The disappearance of hydrogen peroxide (H2O2) is measured spectrophotometrically at 240 nm.
Definition of unit One unit (U) is defined as the amount of enzyme which decomposes 1 μmol of H2O2 per min at 25°C and pH 7.0 under the conditions described below.
Reagents
A. Phosphate buffer, 50 mM; pH 7.0: mix 50 mM Na2HPO4 solution and 50 mM KH2PO4 solution to make a pH 7.0 solution.
B. Hydrogen peroxide (H2O2) solution: add about 0.75 ml of 30% H2O2 to 100 ml of phosphate buffer (Reagent A).(Prepare freshly before measurement and store at 4°C)
Measure the absorbance of the mixture (2.0 ml of phosphate buffer (Reagent A) and 1.0 ml of H2O2 solution) at 240 nm in 1 cm light path versus phosphate buffer (Reagent A) and check the absorbance of 0.85 (0.02). Otherwise add more 30% H2O2 or phosphate buffer (Reagent A) to the H2O2 solution and repeat the same check.
Sample: dissolve the lyophilized enzyme to a concentration of 5.0 mg/ml in ice-cold phosphate buffer (Reagent A) and dilute to a volume activity of 0.3–0.6 U/ml with ice-cold phosphate buffer (Reagent A) immediately before
measurement.
Procedure
1. Pipette 2.0 ml of sample into a cuvette (light path: 1 cm).
2. Equilibrate at 25°C for about 5 min.
3. Add 1.0 ml of H2O2 solution (Reagent B).
4. Record the decrease of absorbance at 240 nm in a spectrophotometer thermostated at 25°C, and calculate the ΔA per min using the linear portion of the curve (ΔAS).
The blank solution is prepared by adding phosphate buffer (Reagent A) instead of sample (ΔA0).
Activity can be calculated by using the following formula:
Weight activity (U/mg) (U/ml) 1/C
0.0436 : Millimolar extinction coefficient of hydrogen peroxide at 240 nm (cm2
/μmol)
df : Dilution factor
C : Content of catalase preparation in sample (mg/ml)

Kết quả (Việt) 1:

Nguyên tắc catalase2 H2O2 ⎯⎯⎯⎯→ O2 2 H2OSự biến mất của hydrogen peroxide (H2O2) được đo spectrophotometrically tại 240 nm.Definition của một đơn vị đơn vị (U) là defined như số tiền của các enzym mà phân hủy 1 μmol của H2O2 cho mỗi phút ở 25° C và độ pH 7.0 theo các điều kiện được mô tả dưới đây.Hoá chất A. phosphat đệm, 50 mM; pH 7.0: trộn 50 mM Na2HPO4 giải pháp và 50 mM KH2PO4 giải pháp để làm cho một giải pháp pH 7.0.Sinh giải pháp Hydrogen peroxide (H2O2): thêm khoảng 0,75 ml 30% H2O2 đến 100 ml phosphat đệm (tinh khiết A). (Chuẩn bị mới trước khi đo lường và lưu trữ ở 4° C) Đo lường hấp thu của hỗn hợp (2.0 ml phosphat đệm (tinh khiết A) và 1.0 ml của H2O2 giải pháp) tại 240 nm trong đường dẫn ánh sáng 1 cm so với phosphat đệm (tinh khiết A) và kiểm tra hấp thu 0,85 (0,02). Nếu không, thêm thêm 30% H2O2 hoặc phosphat đệm (tinh khiết A) vào các giải pháp H2O2 và lặp lại cùng một phòng.Mẫu: hòa tan enzyme sản với một nồng độ 5.0 mg/ml ở lạnh phosphat đệm (tinh khiết A) và pha loãng để hoạt động một khối lượng của 0.3-0,6 U/ml với lạnh phosphat đệm (tinh khiết A) ngay lập tức trước khiđo lường.Thủ tục1. pipette 2.0 ml mẫu vào một cuvette (đường dẫn ánh sáng: 1 cm).2. equilibrate ở 25° C trong khoảng 5 phút.3. thêm 1.0 ml của H2O2 giải pháp (tinh khiết B).4. ghi lại giảm hấp thu tại 240 nm trong một phối thermostated ở 25° C, và tính toán ΔA cho mỗi phút bằng cách sử dụng phần tuyến tính của đường cong (ΔAS). Giải pháp trống được điều chế bằng cách thêm phosphat đệm (tinh khiết A) thay vì mẫu (ΔA0).Hoạt động có thể được tính toán bằng cách sử dụng công thức sau đây:Trọng lượng hoạt động (U/mg) (U/ml) 1/C0.0436: millimolar tuyệt chủng coefficient của hydrogen peroxide tại 240 nm (cm2/ Μmol)DF: yếu tố pha loãngC: Nội dung catalase chuẩn bị trong mẫu (mg/ml)

Kết quả (Việt) 2:

Nguyên tắc
catalase
2 H2O2 ⎯⎯⎯⎯ → O2 2 H2O?
Sự biến mất của hydrogen peroxide (H2O2) được đo spectrophotometrically ở 240 nm.
De fi định nghĩa của đơn vị Một đơn vị (U) là định nghĩa là lượng enzyme phân hủy 1 mmol H2O2 mỗi phút ở 25 ° C và pH 7.0 theo các điều kiện được mô tả dưới đây.
thuốc thử
A. Đệm Phosphate, 50 mM; pH 7.0: hỗn hợp dung dịch 50 mM Na2HPO4 và 50 giải pháp mM KH2PO4 để thực hiện một giải pháp pH 7,0.
B. Hydrogen peroxide (H2O2) giải pháp: tăng thêm khoảng 0,75 ml 30% H2O2 đến 100 ml đệm phosphate (thuốc thử A) (Chuẩn bị tươi trước khi đo và bảo quản ở nhiệt độ 4 ° C).
Đo độ hấp thụ của hỗn hợp (2.0 ml đệm phosphate (thuốc thử A) và 1,0 ml dung dịch H2O2) tại 240 nm trong con đường của ánh sáng 1 cm so với đệm phosphate (thuốc thử A) và kiểm tra độ hấp thụ của 0,85 (? 0,02). Nếu không bổ sung thêm 30% H2O2 hoặc đệm phosphate (thuốc thử A) vào dung dịch H2O2 và lặp lại việc kiểm tra tương tự.
Mẫu: hòa tan men đông khô với nồng độ 5,0 mg / ml trong nước đá lạnh đệm phosphate (thuốc thử A) và pha loãng một hoạt động khối lượng 0,3-0,6 U / ml với nước đá lạnh đệm phosphate (thuốc thử A) ngay lập tức trước khi
đo.
Thủ tục
1. Pipette 2.0 ml mẫu vào một cuvette (con đường ánh sáng: 1 cm).
2. Cân bằng ở 25 ° C trong khoảng 5 phút.
3. Thêm 1,0 ml dung dịch H2O2 (thuốc thử B).
4. Ghi giảm độ hấp thụ ở 240 nm trong một quang phổ thermostated ở 25 ° C, và tính toán ΔA mỗi phút bằng cách sử dụng phần tuyến tính của đường cong (ΔAS).
Các dung dịch trắng được chuẩn bị bằng cách thêm đệm phosphate (thuốc thử A) thay vì mẫu . (ΔA0)
Hoạt động có thể được tính toán bằng cách sử dụng công thức sau:
hoạt động Trọng lượng (U / mg) (U / ml) 1 / C?
0,0436: Millimolar tuyệt chủng coef fi cient của hydrogen peroxide ở 240 nm (cm2
/ mmol)
df: pha loãng yếu tố
C: Nội dung của catalase chuẩn bị trong mẫu (mg / ml)