Extraction of Bound Phenolic Acids.

Extraction of Bound Phenolic Acids. Bound phenolic acids were
extracted according to the method of Zhang et al.17 Fifteen milliliters
of distilled water and 5 mL of 6 M NaOH were added to test tubes
with the residue after the extraction of free phenolic compounds and
stirred for about 16 h at room temperature using a magnetic stirrer.
The solution was then adjusted to pH 2, and liberated phenolic acids
were extracted three times with 15 mL of a mixture of cold diethyl
ether (DE) and ethyl acetate (EA, 1:1 v/v). DE/EA layers were
combined and evaporated to dryness, and the residue was dissolved in
1.5 mL of methanol. Acid hydrolysis was then performed by adding 2.5
mL of concentrated 12 M HCl into the test tube and incubating in a
water bath at 85 °C for 30 min after completion of the above alkaline
hydrolysis. The sample was then cooled and adjusted to pH 2, with
DE/EA extraction performed in the same manner as for alkaline
hydrolysis.
Determination of Individual Phenolic Acids. Individual
phenolic acids in the bean extracts were analyzed by a Shimadzu
LC-20A high-performance liquid chromatograph equipped with a UV
detector and Alltima C18 column (4.6 × 250 mm, Metachem
Technologies, Inc., Torrance, CA, USA). The mobile phase of water
with 0.05% trifluoroacetic acid (solvent A) and 30% acetonitrile, 10%
methanol, 59.95% water, and 0.05% trifluoroacetic acid (solvent B)
was used at a flow rate of 1 mL/min. Total run time was 50 min, and
the gradient program was as follows: 10−12% B for 16 min, 12−38%
B for 9 min, 38−70% B for 7 min, 70−85% B for 8 min, and 85−10%
B for 10 min. The time of postrun for reconditioning was 5 min. The
injection volume was 1 μL. Detection was done at 280 nm via the UV
detector. Identification and quantification of phenolic acids in samples
were performed by comparison with chromatographic retention times
and areas of external standards. The stock solutions were stored in
darkness at −18 °C. All determinations were performed in triplicates.

Kết quả (Việt) 1:

Khai thác các axit Phenolic bị ràng buộc. Ràng buộc các axit phenolicchiết xuất theo phương pháp của trương et al.17 15 mlnước cất và 5 mL 6 M NaOH được bổ sung để kiểm tra ốngvới dư sau khi khai thác miễn phí các hợp chất phenolic vàkhuấy cho khoảng 16 h ở nhiệt độ phòng bằng cách sử dụng một stirrer từ tính.Các giải pháp sau đó điều chỉnh pH 2, và giải phóng axit phenolicđược chiết xuất ba lần với 15 mL hỗn hợp của lạnh dietylete (DE) và etyl axetat (EA, 1:1 v/v). DE/EA lớpkết hợp và bốc hơi để khô, và dư bị giải tán1.5 mL methanol. Thủy phân axit sau đó được thực hiện bằng cách thêm 2,5mL của tập trung 12 M HCl vào ống nghiệm và ấp trong mộtnước tắm ở 85 ° C trong 30 phút sau khi hoàn thành ở trên kiềmthủy phân. Mẫu sau đó được làm mát bằng nước và điều chỉnh độ pH 2, vớiDE/EA chiết xuất thực hiện theo cách thức tương tự đối với kiềmthủy phân.Xác định axit Phenolic cá nhân. Cá nhânaxit phenolic trong chiết xuất đậu được phân tích bởi một ShimadzuLC-20A cao hiệu suất sắc ký lỏng được trang bị với một tia UVMáy dò và Alltima C18 cột (4.6 × 250 mm, MetachemCông nghệ, Inc, Torrance, CA, USA). Pha nước, điện thoại di độngvới axít trifluoroacetic 0,05% (dung môi A) và 30% acetonitrile, 10%methanol, 59,95% nước và 0,05% trifluoroacetic axit (dung môi B)được sử dụng một luồng lệ 1 mL/phút tổng số thời gian chạy là 50 phút, vàchương trình gradient là như sau: 10−12% B cho 16 phút, 12−38%B cho 9 min, 38−70% B trong 7 phút, 70−85% B cho 8 phút, và 85−10%B cho 10 phút. Thời gian của postrun cho reconditioning là 5 phút cáckhối lượng tiêm là 1 μL. Phát hiện đã được thực hiện tại 280 nm qua các tia cực tímMáy dò. Xác định và định lượng axit phenolic trong mẫuđã được thực hiện nguồn chromatographic lưu giữ lầnvà các khu vực bên ngoài tiêu chuẩn. Các giải pháp cổ đã được lưu trữ trongbóng tối lúc −18 ° C. Tất cả các quyết định đã được thực hiện trong triplicates.