7th World Congress on Genetics Appl

7th World Congress on Genetics Applied to Livestock Production, August 19-23, 2002, Montpellier, France
A MEISHAN POSITIVE QTL FOR PROLIFICACY TRAITS FOUND AT THE NCOA1
LOCUS ON SSC 3.


J.S. Melville1
, A.M.V. Gibbins1
, J.A.B. Robinson1
, J.P. Gibson1,3,
A.L. Archibald2
, C.S. Haley2
and Z. Jiang1
1 CGIL, Department of Animal and Poultry Science, University of Guelph, Guelph,
Ontario, Canada N1G 2W1 2 Roslin Institute (Edinburgh), Roslin, Midlothian EH25 9PS, UK 3
International Livestock Research Institute, P.O. Box 30709, Nairobi, Kenya

INTRODUCTION
Sow productivity, specifically litter size, is of great importance to the success of the swine
industry. Sow productivity, defined as the number of live births per sow per year, involves the
animal’s age at puberty, conception rate, ovulation rate, embryo survival, number of piglets
born, number stillborn, number born alive, birth weight, and weaning to service interval. The
Chinese Meishan pig has a lower carcass value by Western standards but has a litter size
approximately 4 piglets larger than North American breeds, 0.4 fewer stillborn, matures early,
and commonly has two litters per year, all economically important traits. The incorporation of
Meishan characteristics into North American breeding lines has been only moderately
effective; common cross breeding programs have failed to incorporate these favourable traits
while avoiding the deleterious carcass quality traits inherent in the Meishan animals.

Reproductive traits are known to be controlled by many genes. A number of genes have been
investigated as possible sources of genetic improvement for prolificacy traits. The positive
association found between the estrogen receptor gene (ESR) and litter size in pigs (Rothschild
et al., 1996) is a significant finding with regard to potential increases in animal productivity.
The porcine gonadotrophin-releasing hormone receptor gene (GNRHR) has also been found to
be associated with the number of corpora lutea formed (Jiang et al., 2001). There are genes that
map to SSC 3 that have been identified as being associated with reproductive traits, such as the
follicle stimulating hormone receptor gene (FSHR) (Remy et al., 1995) and the luteinizing
hormone/choriogonadotropin receptor gene (LH-CGR) (Yerle et al., 1992). LH-CGR is
involved in signaling pathways in ovarian follicles (Rajagopalan-Gupta et al., 1998). A project
involving porcine genome scanning for quantitative trait loci (QTL) associated with
reproduction in swine, reported in Rohrer et al. (1999), identified 5 regions of which 4 showed
Large White composite QTL alleles to be superior to Meishan QTL alleles for ovulation rate.

The nuclear receptor coactivator 1 gene (NCOA1), also know as the steroid receptor coactivator
1 gene (SRC1), is a candidate gene for influence on swine reproduction traits and has been
mapped to SSC3. The human NCOA1 gene is comprised of 22 exons with a total genomic
length of 183.4 Kb, and a cDNA length of approximately 4721 bp. The nuclear receptor
coactivator-1 gene is a likely choice to be investigated as a candidate gene for influence on
swine prolificacy traits. The NCOA1 complex interacts with the DNA-bound estrogen receptor
serving to enhance its transcriptional activation function (Leo and Chen, 2000). The NCOA1
Session 08. Reproduction Communication N° 08-26 7th World Congress on Genetics Applied to Livestock Production, August 19-23, 2002, Montpellier, France
protein performs histone acetylation and interacts with another acetyltransferase, p300/CBP, in
the process of exposing the otherwise inaccessible chromatin (Spencer et al., 1997). Thus, the
NCOA 1 protein enhances activity of the ESR receptor that, in turn, stimulates the transcription
of specific estrogen-responsive genes and mediates subsequent physiological responses
(Nephew et al., 2000). Here we report on a Meishan positive locus associated with prolificacy
traits found on SSC 3 at the NCOA1 locus.

MATERIALS AND METHODS
Primer Design. Through GenBank, a DNA sequence database provided by the National
Centre for Biotechnology Information (NCBI), we have been able to obtain the entire genomic
and cDNA sequence of the human NCOA1 gene. Using DNA sequence comparison tools
available from NCBI we identified cattle sequences that have high homology to the human
NCOA1 sequence and designed universal oligonucleotide primers that are able to amplify
corresponding fragments of the porcine genome. Primer design was conducted using the online
oligonucleotide design tool Primer3 (Rozen and Skaletsky, 1998). The forward primer used
has the sequence 5’ AGGGGCTACCCTCCTGTAAG, and the reverse primer is 5’
CTTCTCTGCCAGTTCTCCAGTC.

Polymerase Chain Reactions. A fragment of exon 11 of the NCOA1 gene was amplified
using the specific primer sequences cited previously. The PCR conditions consisted of 10 µL
reactions each consisting of approximately 60 ng genomic DNA, 75 ng of both the forward and
reverse primers, 200 nM dNTPs, 2.5 mM MgCl2, 1.0 µL 10X PCR buffer, and 0.5 U AmpliTaq
DNA Polymerase (Applied Biosystems, Foster City, USA). After an initial denaturing step of
94o
C for 3 minutes, the elongation cycling conditions for the PCR reaction were 8 cycles of
touchdown at 94 oC for 30 s, 63 oC-56 oC for 30 s, 72 oC for 30 s, and 32 cycles of 94 oC for 30
s, 55 oC for 30 s, and 72 oC for 30 s. An elongation step of 72 oC for 5 minutes was included for
the final step.

Sequencing of Amplified DNA Fragments. The designed primers were used to amplify and
sequence DNA fragments from pooled porcine genomic DNA. The two DNA pools consisted
of either 20 Ehuralien or 20 Landrace samples. For each mix the DNA was prepared from
blood samples. Once DNA fragments had been cleanly amplified, the fragments were
sequenced using an ABI 377 automated sequencer located at the Guelph Molecular
Supercentre, University of Guelph. The sequences obtained from the Ehuralien and Landrace
pooled DNA samples were compared for any polymorphisms and intron/exon borders were
determined.

Genotyping of Animals. Within exon 11 a single nucleotide polymorphism (a T/C
substitution) was identified. The PCR-RFLP technique was determined to be the most effective
method of genotyping animals for the polymorphism. The restriction enzyme Rsa1 was
identified to be able to cleave the DNA if a cytosine base is present in place of thymine, as
shown in Figure 1. Restriction digestions were carried out at 37 oC for 3 hours.

Animal Population. The animal population was developed by the Roslin Institute, Scotland,
and consisted of a Meishan x Large White three generation crossbreeding population with 30
Session 08. Reproduction Communication N° 08-26 7th World Congress on Genetics Applied to Livestock Production, August 19-23, 2002, Montpellier, France
grandparent animals of which 16 were pure Meishan and 14 were pure Large White. The 30
grandparent pigs and 220 F2 sows were used for genotyping and the results analyzed for
association with phenotypic data regarding prolificacy traits previously recorded. Statistical
analysis was completed using the genotyping data from 178 animals from the Roslin
population for which ovulation rate data was recorded.

RESULTS AND DISCUSSION
Sequencing of PCR-amplified DNA from the Meishan and Large White pooled samples
revealed a T/C single nucleotide polymorphism (SNP) located in exon 11 of the NCOA1 gene.
The SNP was determined to be a silent mutation, and analysis was continued based on the logic
of using the mutation as a molecular marker.

Statistical analysis was done on the NCOA1 genotyping records of 178 animals from the Roslin
Meishan x Large White population. Analysis was done using Statistical Analysis Software
(SAS), with a model fitting the effects of weight at laparoscopy and year with the NCOA1
genotype on ovulation rate. The A1A1 genotype (T/T) was found to account for an increase of
2.17 corpora lutea (CP), significantly different from the A2A2 genotype (C/C) value of 16.45
CP (p=0.0087), while the A1A2 genotype (T/C) showed an average increase of 0.90, CP
although this increase was not found to be significant. Analysis of the population genotypes
and the recorded number born (NB) showed a similar trend, but the results were not found to
be significant. The A1A1 genotype showed an increase of 1.82 NB, approaching significance
(p=0.1045) as compared to the A2A2 genotype value of 12.38 NB. The A1A2 genotype had
an increase of 0.90 NB.

1 2 3 4 5 6 7 8 9











Figure 1. An agarose gel showing the NCOA1 exon 11 Rsa1 polymorphism in eight
grandparent animals. Lane 1 contains a 100 bp standard marker, lanes 2, 5, and 9 refer
to Meishan (M) animals with the genotype A1A1, lane 6 refers to a M animal with the
A1A2 genotype, and lanes 3, 4, 7, and 8 refer to Large White animals with the genotype
A2A2

A nuclear receptor coactivator enhances transcriptional activation by interacting with nuclear
receptors bound to DNA. The nuclear receptors that are affected, such as the estrogen receptor,
androgen receptor, and thyroid receptor, play important roles in a wide variety of biological
Session 08. Reproduction Communication N° 08-26 7th World Congress on Genetics Applied to Livestock Production, August 19-23, 2002, Montpellier, France
processes including development, homeostasis, and reproduction (Leo and Chen, 2000). The
negatively charged DNA has a strong interaction with the positive charge of the histone N
termini, and the tight nucleosome structure represses the transcription of the DNA by inhibiting
the binding of general transcription factors to the gene (Jenster et al., 1997). Coactivators are
proteins that enhance the transcriptional activation function of the nuclear receptors due to
histone acetyltransferase activity and by providing bindings sites for other cofactors to form a

Kết quả (Việt) 1:

7 đại hội thế giới về di truyền học áp dụng cho chăn nuôi, 19-23 tháng 8 năm 2002, Montpellier, Pháp MỘT ĐẶC ĐIỂM CHO PROLIFICACY TÍCH CỰC QTL MEISHAN TÌM THẤY TẠI NCOA1 LOCUS TRÊN SSC 3. J.S. Melville1, Gibbins1 A.M.V., J.A.B. Robinson1, JP Gibson1, 3, Al Archibald2, CS Haley2 và Z. Jiang1 1 CGIL, vùng động vật và gia cầm khoa học, đại học Guelph, Guelph, Ontario, Canada N1G 2W1 2 Roslin viện (Edinburgh), Roslin, Midlothian EH25 9PS, Vương Quốc Anh 3 Viện nghiên cứu chăn nuôi quốc tế, P.O. Box 30709, Nairobi, Kenya GIỚI THIỆU Năng suất lợn nái, đặc biệt kích thước xả rác, là rất quan trọng cho sự thành công của các lợn ngành công nghiệp. Năng suất lợn nái, định nghĩa là số lượng các ca sinh một lợn nái mỗi năm, bao gồm các tuổi của động vật ở tuổi dậy thì, quan niệm tỷ lệ, tỷ lệ rụng trứng, phôi sự sống còn, số lượng heo con sinh, số một, số sinh sống, trọng lượng sinh, và cai sữa vào khoảng thời gian dịch vụ. Các Trung Quốc Meishan lợn có giá trị thấp bằng thịt theo tiêu chuẩn phương Tây nhưng có kích thước rác khoảng 4 heo con lớn hơn giống Bắc Mỹ, cách 0.4 ít đời, chín sớm, và thường có hai lít mỗi năm, tất cả những đặc điểm quan trọng về kinh tế. Việc kết hợp Meishan đặc điểm vào Bắc Mỹ giống dòng đã chỉ vừa phải hiệu quả; phổ biến chéo chăn nuôi chương trình đã thất bại để kết hợp các đặc điểm thuận lợi trong khi tránh các chất lượng bại hoại phong tục carcass đặc điểm cố hữu trong các loài động vật Meishan. Đặc điểm sinh sản được biết là được điều khiển bởi nhiều gen. Một số gen đã điều tra như là nguồn có thể cải thiện di truyền cho đặc điểm prolificacy. Tích cực Hiệp hội tìm thấy giữa các gen thụ thể estrogen (ESR) và kích thước xả rác ở lợn (Rothschild CTV., 1996) là một phát hiện đáng kể đối với tiềm năng tăng trong sản xuất động vật. Porcine gonadotrophin-phát hành nội tiết tố thụ thể gen (GNRHR) cũng đã được tìm thấy để được liên kết với số lượng corpora lutea thành lập (Giang và ctv., 2001). Có những gen đó bản đồ SSC 3 đã được xác định là đang được liên kết với đặc điểm sinh sản, chẳng hạn như các nang kích thích hormone thụ thể gen (FSHR) (Remy và ctv., 1995) và các luteinizing nội tiết tố/choriogonadotropin thụ thể gen (LH-CGR) (Yerle et al., 1992). LH-CGR là tham gia vào tín hiệu con đường trong buồng trứng nang (Rajagopalan-Gupta và ctv., 1998). Một dự án liên quan đến bộ gen porcine quét cho các đặc điểm định lượng loci (QTL) liên quan đến sinh sản ở lợn, báo cáo trong Rohrer et al. (1999), xác định 5 khu vực trong đó 4 cho thấy Lớn màu trắng composite QTL alen để được cấp trên để Meishan QTL alen cho tỷ lệ rụng trứng. Hạt nhân thụ thể coactivator 1 gen (NCOA1), cũng biết như là thụ thể steroid coactivator 1 gen (SRC1), là một gen ứng cử viên cho ảnh hưởng trên lợn đặc điểm sinh sản và đã ánh xạ tới SSC3. NCOA1 gen của con người bao gồm 22 exon với tổng cộng gen chiều dài của 183.4 Kb, và chiều dài cDNA khoảng 4721 bp. Các thụ thể hạt nhân coactivator-1 gen là một sự lựa chọn có khả năng được điều tra như là một ứng cử viên gen ảnh hưởng trên Các đặc điểm prolificacy lợn. NCOA1 phức tạp tương tác với các thụ thể estrogen DNA-ràng buộc phục vụ để tăng cường chức năng của nó transcriptional kích hoạt (Leo và Chen, 2000). NCOA1 Kỳ họp thứ 08. Sao chép thông tin liên lạc N ° 08-26 7 đại hội thế giới về di truyền học áp dụng cho chăn nuôi sản xuất, 19-23 tháng 8 năm 2002, Montpellier, Pháp protein thực hiện histone acetylation và tương tác với một acetyltransferase, p300/CBP, trongquá trình của lộ nếu không không thể tiếp cận bị (Spencer và ctv., 1997). Vì vậy, các NCOA 1 protein tăng cường hoạt động của các thụ thể ESR mà, lần lượt, kích thích sự phiên mã cụ thể estrogen đáp ứng gen và hàm phản ứng sinh lý tiếp theo (Cháu trai et al., 2000). Ở đây chúng tôi báo cáo về một locus tích cực Meishan, kết hợp với prolificacy đặc điểm tìm thấy trên SSC 3 tại NCOA1 locus. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Thiết kế mồi. Thông qua GenBank, một DNA chuỗi cơ sở dữ liệu cung cấp bởi quốc gia Trung tâm cho công nghệ sinh học thông tin (NCBI), chúng tôi đã có thể để có được toàn bộ gen và cDNA chuỗi NCOA1 gen của con người. Sử dụng công cụ so sánh trình tự ADN có sẵn từ NCBI chúng tôi xác định trình tự gia súc có tính tương đồng cao để con người NCOA1 trình tự và lớp lót được thiết kế oligonucleotide phổ quát mà có thể khuyếch đại mảnh vỡ tương ứng của bộ gen porcine. Chất mồi đệm thiết kế được thực hiện bằng cách sử dụng trực tuyến oligonucleotide thiết kế công cụ Primer3 (Rozen và Skaletsky, 1998). Chất mồi đệm phía trước được sử dụng có dãy 5' AGGGGCTACCCTCCTGTAAG, và đảo ngược mồi là 5' CTTCTCTGCCAGTTCTCCAGTC. Các phản ứng chuỗi polymerase. Một đoạn exon 11 của gen NCOA1 được khuếch đại sử dụng trình tự mồi cụ thể trích dẫn trước đó. Các điều kiện PCR bao gồm 10 ml phản ứng mỗi bao gồm khoảng 60 ng gen DNA, 75 ng của cả hai về phía trước và đảo ngược chất nền, mồi, 200 nM dNTPs, 2.5 mM MgCl2, 1.0 ml 10 X PCR đệm và cách 0.5 U AmpliTaq DNA Polymerase (Biosystems ứng dụng, Foster City, Hoa Kỳ). Sau khi một bước khởi đầu denaturing của 94oC trong 3 phút, điều kiện đi xe đạp kéo dài cho phản ứng của Đảng Cộng sản Romania đã là các chu kỳ 8 của touchdown lúc 94 oC cho 30 s, 63 oC-56 oC cho 30 s, 72 oC cho 30 s, và 32 chu kỳ của 94 oC cho 30 s, 55 oC cho 30 s, và 72 oC cho 30 s. Một bước kéo dài của 72 oC 5 phút được bao gồm cho bước cuối cùng. Xác định trình tự DNA khuếch đại mảnh. Chất nền, mồi được thiết kế được sử dụng để khuyếch đại và trình tự DNA mảnh vỡ từ những DNA porcine gen. Hai hồ bơi DNA bao gồm 20 Ehuralien hoặc 20 Landrace mẫu. Cho mỗi kết hợp DNA đã được chuẩn bị từ mẫu máu. Khi DNA mảnh vỡ đã được khuếch đại sạch, các mảnh vỡ đã trình tự bằng cách sử dụng một sequencer ABI 377 tự động nằm ở phân tử Guelph Supercentre, đại học Guelph. Trình tự thu được từ Ehuralien và Landrace những mẫu DNA đã được so sánh cho bất kỳ polymorphisms và intron/exon biên giới đã xác định. Gen của động vật. Trong exon 11 một đa hình nucleotide duy nhất (một T/C thay thế) đã được xác định. Kỹ thuật PCR RFLP được xác định là hiệu quả nhất phương pháp của gen động vật cho đa hình. Enzyme giới hạn Rsa1 là xác định để có thể tách các DNA nếu một cơ sở cytosine có mặt tại chỗ của thymine, như Hiển thị trong hình 1. Hạn chế digestions đã được thực hiện tại 37 oC cho 3 giờ. Dân số động vật. Dân số động vật đã được phát triển bởi viện Roslin, Scotland, và bao gồm một Meishan x trắng lớn ba thế hệ lai dân với 30 Kỳ họp thứ 08. Sao chép thông tin liên lạc N ° 08-26 7 đại hội thế giới về di truyền học áp dụng cho chăn nuôi sản xuất, 19-23 tháng 8 năm 2002, Montpellier, Pháp ông bà động vật trong đó 16 chiếc tinh khiết Meishan và 14 đã lớn màu trắng tinh khiết. 30 ông bà con lợn và 220 F2 lợn nái đã được sử dụng cho gen và các kết quả phân tích cho Hiệp hội với các dữ liệu kiểu hình về những đặc điểm prolificacy trước đó được ghi lại. Thống kê phân tích đã được hoàn thành bằng cách sử dụng dữ liệu gen từ 178 động vật từ Roslin dân số cho rụng trứng mà tỷ lệ dữ liệu đã được ghi lại. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Các trình tự ADN khuếch đại Đảng Cộng sản Romania từ Meishan và trắng lớn gộp lại mẫu tiết lộ một T/C đơn nucleotide đa hình (SNP) trong exon 11 của gen NCOA1. Các SNP được xác định là một đột biến im lặng, và phân tích tiếp tục dựa trên logic sử dụng các đột biến như một điểm đánh dấu phân tử. Thống kê phân tích được thực hiện trên các hồ sơ gen NCOA1 178 vật từ Roslin Meishan x trắng lớn dân số. Phân tích đã được thực hiện bằng cách sử dụng phần mềm phân tích thống kê (SAS), với một mô hình phù hợp tác dụng của trọng lượng phương và năm với NCOA1 kiểu gen về tỷ giá sự rụng trứng. Kiểu gen A1A1 (T/T) đã được tìm thấy vào tài khoản cho tăng trưởng dân số 2,17 corpora lutea (CP), đáng kể khác với giá trị kiểu gen (C/C) A2A2 của 16,45 CP (p = 0.0087), trong khi kiểu gen A1A2 (T/C) cho thấy sự gia tăng trung bình của 0,90, CP mặc dù sự gia tăng này không được tìm thấy là đáng kể. Phân tích của kiểu gen dân và ghi lại số sinh (NB) cho thấy một xu hướng tương tự, nhưng kết quả không đã được tìm thấy là đáng kể. Kiểu gen A1A1 đã cho thấy sự gia tăng của 1.82 NB, tiếp cận ý nghĩa (p = 0.1045) so với giá trị kiểu gen A2A2 của 12.38 NB. Kiểu gen A1A2 có tăng trưởng dân số 0,90 NB. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Hình 1. Một gel agarose Hiển thị đa hình Rsa1 exon 11 NCOA1 trong tám động vật ông bà. Lane 1 chứa một điểm đánh dấu tiêu chuẩn bp 100, làn đường 2, 5 và 9 tham khảo để Meishan (M) các động vật với kiểu gen A1A1, lane 6 đề cập đến một vật M với các A1A2 kiểu gen, và làn đường 3, 4, 7 và 8 là trắng lớn động vật với kiểu gen A2A2 Coactivator hạt nhân thụ thể tăng cường transcriptional kích hoạt bằng cách tương tác với hạt nhân thụ thể bị ràng buộc để DNA. Các thụ thể hạt nhân bị ảnh hưởng, chẳng hạn như các thụ thể estrogen, thụ thể androgen, và thụ thể tuyến giáp, đóng vai trò quan trọng trong nhiều loại sinh học Kỳ họp thứ 08. Sao chép thông tin liên lạc N ° 08-26 7 đại hội thế giới về di truyền học áp dụng cho chăn nuôi sản xuất, 19-23 tháng 8 năm 2002, Montpellier, Pháp quy trình phát triển, homeostasis và sinh sản (Leo và Chen, 2000). Các tiêu cực trả DNA có một tương tác mạnh với phí histone N, tích cực Termini, và cơ cấu chặt chẽ nucleosome đàn áp phiên âm của DNA bằng cách ức chế các ràng buộc của yếu tố phiên mã chung để gen (Jenster và ctv., 1997). Coactivators protein mà tăng cường các chức năng transcriptional kích hoạt của các thụ thể hạt nhân do histone acetyltransferase hoạt động và bằng cách cung cấp các trang web bindings cho khác cofactors để hình thành một

Kết quả (Việt) 2:

7 Đại hội Thế giới về Di truyền học ứng dụng để sản xuất chăn nuôi, ngày 19-ngày 23 tháng 8, 2002, Montpellier, Pháp
A Mi Sơn TÍCH CỰC QTL đối với tính trạng sự sản xuất nhiều FOUND AT THE NCOA1
locus trên SSC 3. JS Melville1 , AMV Gibbins1 , JAB Robinson1 , JP Gibson1,3, AL Archibald2 , CS Haley2 và Z. Jiang1 1 CGIL, Cục Thú nuôi gia cầm và Khoa học, Đại học Guelph, Guelph, Ontario, Canada N1G 2W1 2 Viện Roslin (Edinburgh), Roslin, Midlothian EH25 9PS, Anh 3 Viện nghiên cứu chăn nuôi quốc tế, PO Box 30709, Nairobi, Kenya GIỚI THIỆU suất Sow, đặc biệt là lứa đẻ, là rất quan trọng cho sự thành công của lợn công nghiệp. Gieo suất, định nghĩa là số người sinh sống mỗi lợn nái mỗi năm, liên quan đến tuổi tác của con vật ở tuổi dậy thì, tỷ lệ thụ thai, tỷ lệ rụng trứng, sự sống của phôi, số lợn con sinh ra, số chết non, số sinh sống, cân nặng khi sinh và cai sữa đến dịch vụ khoảng thời gian. Việc Trung Quốc Meishan lợn có một giá trị xác thấp hơn so với tiêu chuẩn phương Tây, nhưng có một lứa đẻ khoảng 4 heo con lớn hơn giống Bắc Mỹ, 0,4 ít chết non, chín sớm, và thường có hai lít mỗi năm, tất cả những đặc điểm quan trọng về mặt kinh tế. Sự kết hợp của Mi Sơn đặc vào dòng giống Bắc Mỹ đã được chỉ vừa có hiệu lực; chương trình nhân giống chéo thông thường đã thất bại trong việc kết hợp những đặc tính có lợi trong khi tránh các đặc tính chất lượng thịt hại vốn có trong các loài động vật Mi Sơn. đặc điểm sinh sản được biết đến phải được kiểm soát bởi nhiều gen. Một số gen đã được nghiên cứu như là các nguồn có thể cải thiện di truyền của các tính trạng sự sản xuất nhiều. Việc tích cực hiệp hội tìm thấy giữa các gen thụ thể estrogen (ESR) và kích thước lứa lợn (Rothschild et al., 1996) là một phát hiện quan trọng liên quan đến sự gia tăng tiềm năng năng suất vật nuôi với. Các lợn gonadotrophin releasing hormone gen thụ thể (GNRHR) có cũng được phát hiện có liên quan đến số lượng lutea corpora hình thành (Jiang et al., 2001). Có gen bản đồ để SSC 3 đã được xác định như gắn liền với đặc điểm sinh sản, chẳng hạn như kích thích nang gen thụ thể hormone (FSHR) (Remy et al., 1995) và luteinizing hormone receptor gene / choriogonadotropin (LH-CGR ) (Yerle et al., 1992). LH-CGR được tham gia vào con đường tín hiệu trong nang buồng trứng (Rajagopalan-Gupta et al., 1998). Một dự án liên quan đến lợn quét bộ gen của locus tính trạng số lượng (QTL) liên kết với sinh sản ở lợn, báo cáo trong Rohrer et al. (1999), xác định 5 khu vực trong đó có 4 cho thấy lớn alen trắng hỗn QTL để được cấp trên để Meishan QTL alen cho tỷ lệ rụng trứng. Các thụ hạt nhân coactivator 1 gen (NCOA1), cũng được biết như là các steroid thụ coactivator 1 gen (SRC1), là một ứng cử viên cho gen ảnh hưởng đến các tính trạng sinh sản lợn và đã được ánh xạ tới SSC3. Gen NCOA1 con người bao gồm 22 exon với tổng gen chiều dài 183,4 Kb, và chiều dài cDNA của khoảng 4721 bp. Các thụ thể hạt nhân coactivator-1 gen là một sự lựa chọn có khả năng được điều tra như một gen ứng cử viên cho ảnh hưởng đến sự sản xuất nhiều đặc điểm lợn. Các phức tạp NCOA1 tương tác với các thụ thể estrogen DNA-ràng buộc phục vụ để tăng cường chức năng hoạt hóa phiên mã của nó (Leo và Chen, 2000). Các NCOA1 phiên 08. Sinh sản Communication N ° 08-26 7 Đại hội thế giới về Di truyền học ứng dụng để sản xuất chăn nuôi, 19-ngày 23 Tháng Tám, 2002, Montpellier, Pháp thực hiện protein histone acetyl hóa và tương tác với nhau acetyltransferase, P300 / CBP, trong quá trình phơi nhiễm sắc không thể tiếp cận (Spencer et al., 1997). Do đó, các protein NCOA 1 tăng cường hoạt động của các thụ thể ESR đó, lần lượt, kích thích sự phiên mã của các gen estrogen đáp ứng cụ thể và trung gian phản ứng sinh lý tiếp theo (Nephew et al., 2000). Dưới đây chúng tôi báo cáo về một locus tích cực liên quan đến sự sản xuất nhiều Meishan đặc điểm tìm thấy trên SSC 3 tại locus NCOA1. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Primer Design. Qua GenBank, một cơ sở dữ liệu trình tự DNA được cung cấp bởi các quốc gia Trung tâm Thông tin Công nghệ sinh học (NCBI), chúng tôi đã có thể để có được toàn bộ bộ gen chuỗi và cDNA của gen NCOA1 con người. Sử dụng trình tự DNA công cụ so sánh sẵn từ NCBI chúng tôi xác định trình tự gia súc có tính tương đồng cao với con người tự NCOA1 và thiết kế mồi oligonucleotide phổ quát mà có thể khuếch đại các mảnh tương ứng của bộ gen lợn. Thiết kế Primer được tiến hành bằng cách sử dụng trực tuyến công cụ thiết kế oligonucleotide Primer3 (Rozen và Skaletsky, 1998). Các mồi xuôi sử dụng có trình tự 5 'AGGGGCTACCCTCCTGTAAG, và mồi ngược lại là 5' CTTCTCTGCCAGTTCTCCAGTC. Polymerase Chain phản ứng. Một mảnh của exon 11 của gen NCOA1 được khuếch đại bằng cách sử dụng trình tự mồi cụ thể được trích dẫn trước đây. Các điều kiện PCR gồm 10 ml mỗi phản ứng bao gồm khoảng 60 ng DNA của bộ gen, 75 ng của cả hai phía trước và ngược mồi, 200 nM dNTP, 2,5 mM MgCl2, 1.0 ml đệm 10X PCR, và 0,5 U AmpliTaq DNA Polymerase (Applied Biosystems , Thành phố Foster, USA). Sau một bước biến tính ban đầu của 94o C trong 3 phút, các điều kiện kéo dài đi xe đạp cho các phản ứng PCR là 8 chu kỳ của touchdown 94 oC trong 30 s, 63 oC-56 oC trong 30 s, 72 oC trong 30 s, và 32 chu kỳ 94 oC trong 30 s, 55 oC trong 30 s, và 72 oC trong 30 s. Một bước đi kéo dài 72 oC trong 5 phút đã được đưa cho những bước cuối cùng. Giải mã bộ gen DNA Amplified Fragments. Các mồi thiết kế đã được sử dụng để khuếch đại và các mảnh DNA chuỗi từ gộp DNA của bộ gen lợn. Hai hồ DNA bao gồm của cả 20 Ehuralien hoặc 20 mẫu Landrace. Đối với mỗi trộn DNA đã được chuẩn bị từ mẫu máu. Một khi các mảnh DNA đã được khuếch đại sạch sẽ, các mảnh vỡ đã được lập trình tự sử dụng một ABI 377 sequencer tự động đặt tại Guelph Molecular Supercentre, Đại học Guelph. Các trình tự thu được từ các Ehuralien và Landrace gộp các mẫu DNA được so sánh với bất kỳ đa hình và biên giới intron / exon được xác định. định kiểu gen của động vật. Trong vòng 11 exon một đa hình đơn nucleotide (T / C thay thế) đã được xác định. Kỹ thuật PCR-RFLP đã được xác định là có hiệu quả nhất phương pháp kiểu gen động vật cho đa hình. Các enzyme hạn chế Rsa1 được xác định để có thể tách những DNA nếu một cơ sở cytosine có mặt ở vị trí của thymine, như thể hiện trong hình 1. Hạn chế phá mẫu được thực hiện ở 37 oC trong 3 giờ. Animal Dân số. Các quần thể động vật được phát triển bởi Viện Roslin, Scotland, và bao gồm một Meishan x Large White ba thế hệ dân lai với 30 phiên 08. Sinh sản Communication N ° 08-26 7 Đại hội thế giới về Di truyền học ứng dụng để sản xuất chăn nuôi, 19-ngày 23 tháng tám năm 2002, Montpellier, France vật ông bà trong đó 16 là tinh khiết Mi Sơn và 14 tinh khiết Large White. 30 lợn nái ông bà và 220 F2 đã được sử dụng cho kiểu gen và các kết quả phân tích cho kết hợp với dữ liệu kiểu hình liên quan đến đặc điểm sự sản xuất nhiều ghi nhận trước đây. Thống kê phân tích được hoàn thành bằng cách sử dụng dữ liệu từ 178 kiểu gen động vật từ Roslin dân mà số liệu tỷ lệ rụng trứng đã được ghi lại. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Giải mã bộ gen PCR-khuếch đại DNA từ Meishan và Large White gộp mẫu tiết lộ một T / C single nucleotide polymorphism (SNP ) nằm trong exon 11 của gen NCOA1. Các SNP được xác định là một đột biến im lặng, và phân tích được tiếp tục dựa trên logic của việc sử dụng các đột biến như một marker phân tử. Phân tích thống kê được thực hiện trên các bản ghi kiểu gen NCOA1 của 178 loài động vật từ các Roslin Meishan x dân trắng lớn. Việc phân tích được thực hiện bằng cách sử dụng phần mềm phân tích thống kê (SAS), với một mô hình phù hợp ảnh hưởng của cân nặng lúc nội soi và năm với NCOA1 kiểu gen trên tỷ lệ rụng trứng. Các kiểu gen A1A1 (T / T) đã được tìm thấy vào tài khoản cho tăng 2,17 thể vàng (CP), khác nhau đáng kể từ các kiểu gen A2A2 (C / C) giá trị 16,45 CP (p = 0,0087), trong khi các kiểu gen A1A2 (T / C) cho thấy một sự gia tăng trung bình 0,90, CP mặc dù mức tăng này không được tìm thấy là có ý nghĩa. Phân tích của các kiểu gen dân số và số ghi sinh (NB) cho thấy một xu hướng tương tự, nhưng kết quả đã không tìm thấy được ý nghĩa. Các kiểu gen A1A1 cho thấy tăng 1,82 NB, tiếp cận có ý nghĩa (p = 0,1045) so với các giá trị kiểu gen A2A2 của 12,38 NB. Các kiểu gen A1A2 đã tăng 0,90 NB. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Hình 1. Một gel agarose cho thấy NCOA1 exon 11 Rsa1 đa hình trong tám vật ông bà. Ngõ 1 chứa một dấu chuẩn 100 bp, làn xe 2, 5, 9 và tham khảo để Mi Sơn (M) động vật với những kiểu gen A1A1, ngõ 6 đề cập đến một con vật M với các kiểu gen A1A2, và làn xe 3, 4, 7, và 8 tham khảo vật trắng lớn với các kiểu gen A2A2 Một thụ coactivator hạt nhân tăng cường kích hoạt phiên mã bằng cách tương tác với hạt nhân liên kết với các thụ DNA. Các thụ hạt nhân bị ảnh hưởng, chẳng hạn như các thụ thể estrogen, thụ thể androgen, và thụ thể tuyến giáp, đóng vai trò quan trọng trong một loạt các sinh vật kỳ họp 08. Sinh sản Communication N ° 08-26 7 Đại hội thế giới về Di truyền học ứng dụng để sản xuất chăn nuôi, August 19-23, 2002, Montpellier, France quá trình bao gồm phát triển, cân bằng nội môi, và sinh sản (Leo và Chen, 2000). Các DNA tích điện âm có một sự tương tác mạnh mẽ với các điện tích dương của histone N trạm cuối, và các cấu trúc nucleosome chặt kìm nén sự phiên mã của DNA bằng cách ức chế sự gắn kết của các yếu tố phiên mã chung cho các gen (Jenster et al., 1997). Coactivators là protein tăng cường chức năng hoạt hóa phiên mã của các thụ hạt nhân do hoạt động histone acetyltransferase và bằng cách cung cấp các ràng buộc các trang web cho đồng yếu tố khác để tạo thành một