Recurrent somatic mutations in the

Recurrent somatic mutations in the JAK2, MPL, and CALR genes have been described in patients diagnosed with Philadelphia-negative myeloproliferative neoplasms (MPN), including polycythemia vera (PV), essential thrombocythemia (ET), and primary myelofibrosis (PMF). These mutations are generally mutually exclusive, and their profiles in different disease entities are diverse. In PV, JAK2 mutations exist in approximately 95% of patients. However, in ET and PMF patients, JAK2, CALR, and MPL mutations are present at frequencies of approximately 60%, 20%, and 5%, respectively.1 To further understand MPN pathogenesis associated with the ET and PMF induced by different gene alterations, classification and epidemiological examination of patients according to gene alterations have been performed. In ET, the CALR mutation is associated with a lower hemoglobin level, higher platelet count, lower leukocyte count, and younger age compared with the JAK2V617F mutation;2-5 similar characteristics have been observed in PMF patients.6,7 The CALRmutation is also associated with male predominance,2,5 lower thrombosis risk,4,6 and better overall survival;6 however, these characteristics are not always evident and are diverse in some cases. The same gender ratio has been reported in a Chinese cohort of ET patients with JAK2and CALRmutations.4 The variation between cohorts in the published data most likely reflects different genetic backgrounds in the different ethnic groups that were stud
ied. In addition, because all analyses have been performed in Caucasian populations, with the exception of one study from China,4 the epidemiological evidence regarding the Asian population is limited. Here, we studied a Japanese MPN cohort that was previously characterized with respect to the JAK2V617F mutation. The cohort consisted of 66 PV, 112 ET, and 23 PMF patients, as defined by the 2008 World Health Organization (WHO) criteria.8 Clinical and laboratory parameters were obtained at the time of first diagnosis or when genomic DNA samples were collected. This study was conducted in accordance with the Declaration of Helsinki and was approved by the ethics committee of Juntendo University School of Medicine (IRB#2012208 and #2013020). All patient specimens that had previously been analyzed for the JAK2 mutation8 were assessed for CALR and MPL mutations using polymerase chain reaction (PCR)-based assays and subsequent deep-sequencing. In addition, the specimens that exhibited a JAK2V617F mutant allele frequency below 10% in the previous study were re-evaluated via deep sequencing (Online Supplementary Appendixand Online Supplementary Table S1). Re-evaluation identified one PV and 2 ET patients as negative for the JAK2mutation who a PCR-based assay had previously identified as JAK2V617F-positive with a low allele frequency. Conversely, JAK2 mutations in MPN patients who were negative for JAK2, MPL, and CALR mutations by PCRbased assays were not identified by deep sequencing (see below for MPLand CALRmutation detection). Thus, JAK2 mutations were found in 64 (97%) PV (including 3 exon 12
haematologica 2015; 100:e46
LETTERS TO THE EDITOR
Table 1. Clinical and hematologic characteristics according to gene mutation status.
ET (n=110**) PMF (n=23)
Mutation JAK2 CALR MPL negative JAK2 CALR MPL negative Number of patients (n) 59 21 8 22 11 714 Male:female (n) 24:35 13:8 2:6 9:13 7:4 5:2 1:0 2:2 Age (years) 60.2 59.0 62.0 45.0 71.9 63.6 77 53.3 (19-83) (33-86) (32-81) (26-81) (52-88) (55-81) (38-76) WBC (×109/L) 11.1 7.9 8.2 9.6 14.8 7.2 4.9 16.4 (5.2-52.3) (4.1-12.7) (4.9-11.3) (4.8-21.9) (2.2-52.8) (3.2-12.3) (5.4-44.1) RBC (×109/L) 4783 4421 4364 4615 3876 3236 2960 3105 (3420-7060) (2590-5570) (3600-4600) (3670-6160) (2230-5760) (2200-4111) (1920-3680) Hct (%) 42.0 41.3 39.6 40.9 32.8 29.2 24.8 28.1 (25.4-54.1) (27.6-49.6) (34.3-44.6) (33.8-50.0) (20.4-40.5) (19.4-38.7) (17.5-34.0) Hb (g/dL) 13.7 13.6 12.7 13.4 10.3 9.1 7.8 9.4 (7.9-16.9) (9.4-17.0) (10.8-14.1) (10.8-16.8) (6.6-13.0) (5.7-12.7) (6.1-11.5) MCV (fL) 88.6 93.7 90.8 89.3 86.2 90.2 83.8 90.7 (66.1-106.6) (87.4-115.4) (85.5-97.8) (61.7-97.0) (60.8-98.4) (83.5-98.5) (87.0-92.4) Platelets (×109/L) 890 1109 1177 910 430 477 351 264 (486-1580) (496-2832) (800-1592) (349-2337) (70-1280) (82-1491) (2-855)
Thrombotic event* 9/55 1/19 1/8 3/19 2/6 0/5 0/1 0/2 (16.4%) (5.3%) (12.5%) (15.8%) (33.3%) (0%) (0%) (0%) Splenomegaly* 8/59 0/20 1/8 1/20 9/11 4/6 1/1 3/4 (13.6%) (0%) (12.5%) (5.0%) (81.8%) (66.7%) (100%) (75%)
WBC: white blood cell count; RBC: red blood cell count; Hct: hematocrit; Hb: hemoglobin; MCV: mean corpuscular volume. Values with a range are indicated by median values. *A subset of patients was evaluated. **The patients who exhibited mutations in two different genes were omitted.
mutations), 61 (54.5%) ET, and 11 (47.8%) PMF patients in this cohort (Figure 1A). The MPLW515K/L mutation was assessed using a newly developed allele-specific PCR technique called dual amplification refractory mutation system PCR (DARMS-PCR) and subsequent capillary electrophoresis.9 All identified MPL mutations were further verified using deep sequencing. In addition, by screening MPN patients who were previously negative for JAK2, MPL, and CALR mutations we identified MPLW515K/L mutations below the detection limit of DARMS-PCR as well as other MPL mutations (MPLW515R). Collectively, the MPLW515K/L/R mutation was identified in 9 (8.0%) ET and one (4.4%) PMF patients (Table 1 and Figure 1A), which was similar to the frequencies of 3%-8.3% that were found in Caucasian cohorts2,3,5-7,10-13 but different from those in a Chinese cohort with a substantially lower frequency (1.2%).4 We noted that one ET patient exhibited both the MPLW515K (allele frequency 50.7%) and W515L (allele frequency 2.5%) mutations. The CALR mutation on exon 9 was examined using our in-house fragment analysis method (Online Supplementary Appendix). All identified CALR mutations were confirmed by deep sequencing. CALRmutations were identified in 22 (19.6%) ET and 7 (30.4%) PMF patients (Figure 1A), which was similar to the reported frequency in ET (15.5-28%)2-6 and PMF (25%) patients.7 In contrast, one study examined a Cypriot cohort and identified a frequency of 8.7%,10 but patients with thrombocytosis were not classified according to the WHO 2008 criteria. Unlike the MPL mutation, the CALR mutation was present at similar frequencies in ET patients in both Japanese (19.6%) and Chinese (22.7%)4 cohorts. CALR mutations (n=29) were present in the following distribution: 11 type 1 (c.1092_1143del), 8 type 2 (c.1154_1155insTTGTC), one type 4 (c.1102_1135del), one type 22 (c.1120_1123del), one type 28 (c.1131_1152del), 2 type 33 (c.1154_1155insATGTC), and
one type 34 (c.1154delinsCTTGTC) mutation, as well as four novel mutations (type 42-45; c.1100_1133del, c.1126_1144del, c.1153_1154insTCTGT, and c.1148_1154>GAC) (Online Supplementary Table S2). The CALRmutation in PMF patients is limited to types 1 and 2, and the type 1 mutation (n=6) is more frequent than the type 2 mutation (n=1), as observed in a Caucasian PMF cohort.3 All novel CALR mutations generate a frame shift that converts the C-terminal amino acids from negatively to positively charged, as is the case for other mutations (Online Supplementary Table S2). Although JAK2, MPL, and CALR mutations have been proposed to be mutually exclusive, we identified one ET patient with JAK2V617F and MPLW515L mutations and one ET patient with JAK2V617F and CALR mutations, which was consistent with recent reports that described a rare concomitant mutation of these gene mutations in Caucasian7,14 and Chinese4 cohorts. Finally, patient specimens that were negative for JAK2V617F, MPLW515K/L, and CALR exon 9 mutations by PCR-based assays were analyzed by deep sequencing of all the JAK2, MPL, and CALR exons (Online Supplementary Appendix). This analysis identified 22 (19.6%) ET and 4 (17.4%) PMF “triple-negative” patients (Figure 1A). We compared the hematologic and clinical features of patients who were classified according to mutation status (Table 1), with the exception of 2 ET patients who harbored concurrent JAK2 and MPL or CALR mutations (see above). In the ET patients, compared with the JAK2V617F mutation, the presence of the CALR or MPL mutation was associated with lower leukocyte and higher platelet counts (Table 1). The CALR mutation was also associated with a lower red blood cell count. These hematologic features are consistent with the features reported for different ethnic groups.2-5 We observed a trend of male dominance among the ET patients with CALRmutations (male to female ratio 13:8) compared with the patients with JAK2 mutations (male to female ratio 24:35), which is consistent with findings in Caucasian cohorts but inconsistent with findings in a Chinese cohort.4 We determined that the triple-negative ET patients (mean age 45.0 years old) were strikingly younger than the patients with other genotypes (Table 1 and Figure 1B). Adjusted P values for multiple comparisons of ages between triple-negative and other genotypes such as mutated JAK2, CALR, or MPL by Tukey-Kramer test were

Kết quả (Việt) 1:

Thường xuyên Soma đột biến trong gen JAK2, MPL, và CALR đã được mô tả ở những bệnh nhân được chẩn đoán với Philadelphia âm ung myeloproliferative (MPN), trong đó có vera (PV), cần thiết thrombocythemia (ET) và chính myelofibrosis (PMF). Những đột biến nói chung là loại trừ lẫn nhau, và hồ sơ của họ trong bệnh khác nhau thực thể được đa dạng. Trong PV, đột biến của JAK2 tồn tại trong khoảng 95% bệnh nhân. Tuy nhiên, bệnh nhân ET và PMF, JAK2, CALR và MPL đột biến có mặt ở tần số khoảng 60%, 20%, và 5%, respectively.1 để hiểu hơn nữa MPN sinh bệnh liên quan đến ET và PMF gây ra bởi gen khác nhau thay đổi, phân loại và các kiểm tra dịch tễ của bệnh nhân theo gen thay đổi đã được thực hiện. Ở ET, đột biến CALR được liên kết với một mức độ thấp của hemoglobin, cao tiểu cầu đếm, thấp hơn các tính bạch cầu, và tuổi thấp hơn so với các đột biến JAK2V617F; đặc điểm tương tự 2-5 đã được quan sát ở PMF patients.6,7 The CALRmutation cũng được kết hợp với ưu thế tỷ, 2, 5 giảm nguy cơ huyết khối, 4, 6 và tổng thể tốt hơn sự sống còn; 6 Tuy nhiên, những đặc điểm là không luôn luôn hiển nhiên và rất đa dạng trong một số trường hợp. Cùng tỷ lệ giới tính đã được báo cáo trong quân đội Trung Quốc ET bệnh nhân với JAK2and CALRmutations.4 biến thể giữa cohorts trong dữ liệu được xuất bản rất có thể phản ánh nền tảng di truyền khác nhau trong các nhóm sắc tộc khác nhau đã là studIED. Ngoài ra, bởi vì tất cả phân tích đã được thực hiện trong quần thể Cap, ngoại trừ một nghiên cứu từ Trung Quốc, 4 các dịch tễ học bằng chứng về dân châu á được giới hạn. Ở đây, chúng tôi nghiên cứu quân đội Nhật bản MPN mà trước đây được đặc trưng đối với đột biến JAK2V617F. Một đội quân bao gồm 66 PV, 112 ET, và bệnh nhân PMF 23, như được xác định bởi 2008 thế giới tổ chức y tế (người) criteria.8 lâm sàng và phòng thí nghiệm thông số đã thu được tại thời điểm đầu tiên chẩn đoán hoặc khi gen mẫu DNA đã được thu thập. Nghiên cứu này được tiến hành phù hợp với tuyên bố Helsinki và được chấp thuận bởi Ủy ban đạo đức của Juntendo University School of Medicine (IRB #2012208 và #2013020). Tất cả các mẫu vật bệnh nhân trước đó đã được phân tích cho JAK2 mutation8 được đánh giá cho CALR và MPL đột biến bằng cách sử dụng phản ứng chuỗi polymerase (PCR)-dựa trên thử nghiệm và sau đó sâu-trình tự. Ngoài ra, các mẫu vật trưng bày một tần số đột biến allele JAK2V617F dưới 10% trong nghiên cứu trước đó đã được tái đánh giá thông qua trình tự sâu (trực tuyến bổ sung Appendixand trực tuyến bổ sung bảng S1). Tái thẩm định xác định một PV và 2 ET bệnh nhân như tiêu cực cho JAK2mutation người một khảo nghiệm PCR dựa trên trước đây đã xác định là JAK2V617F-dương tính với một tần số thấp allele. Ngược lại, JAK2 đột biến ở những bệnh nhân MPN người có tiêu cực cho đột biến của JAK2, MPL, và CALR bởi PCRbased thử nghiệm đã không được xác định bởi trình tự sâu (xem dưới đây để MPLand CALRmutation phát hiện). Vì vậy, đột biến của JAK2 đã được tìm thấy trong 64 (97%) PV (bao gồm cả 3 exon 12haematologica năm 2015; 100:E46CÁC CHỮ CÁI ĐỂ TRÌNH BIÊN TẬPBảng 1. Đặc điểm lâm sàng và máy theo gen đột biến trạng thái.ET (n = 110 **) PMF (n = 23)Mutation JAK2 CALR MPL negative JAK2 CALR MPL negative Number of patients (n) 59 21 8 22 11 714 Male:female (n) 24:35 13:8 2:6 9:13 7:4 5:2 1:0 2:2 Age (years) 60.2 59.0 62.0 45.0 71.9 63.6 77 53.3 (19-83) (33-86) (32-81) (26-81) (52-88) (55-81) (38-76) WBC (×109/L) 11.1 7.9 8.2 9.6 14.8 7.2 4.9 16.4 (5.2-52.3) (4.1-12.7) (4.9-11.3) (4.8-21.9) (2.2-52.8) (3.2-12.3) (5.4-44.1) RBC (×109/L) 4783 4421 4364 4615 3876 3236 2960 3105 (3420-7060) (2590-5570) (3600-4600) (3670-6160) ( 2230 – 5760) (2200-4111) (1920-3680) Hct (%) 42.0 41.3 39.6 40.9 32.8 29.2 24.8 28.1 (25.4-54.1) (27.6-49.6) (34.3-44.6) (33.8-50.0) (20.4-40.5) (19.4-38.7) (17.5-34.0) Hb (g/dL) 13.7 13.6 12.7 13.4 10.3 9.1 7.8 9.4 (7.9-16.9) (9.4-17.0) (10.8-14.1) (10.8-16.8) (6.6-13.0) (5.7-12.7) (6.1-11.5) MCV (fL) 88.6 93.7 90.8 89.3 86.2 90.2 83.8 90.7 (66.1-106.6) (87.4-115.4) (85.5-97.8) (61.7-97.0) (60.8-98.4) (83.5-98.5) (87.0-92.4) Platelets (×109/L) 890 1109 1177 910 430 477 351 264 (486-1580) (496-2832) (800-1592) (349-2337) (70-1280) (82-1491) (2-855)Bớt sự kiện * 9/55 1/19 1/8 3/19 2/6 0/5 0/1 0/2 (16.4%) (5,3%) (12,5%) (15,8%) (33,3%) (0%) (0%) (0%) Splenomegaly * 8/59 0/20 1/8 1/20 9/11 4/6 1/1 3/4 (13,6%) (0%) (12,5%) (5,0%) (81.8%) (66,7%) (100%) (75%)WBC: tế bào máu trắng tính; RBC: tế bào máu đỏ tính; HCT: hematocrit; HB: hemoglobin; MCV: có nghĩa là khối lượng corpuscular. Giá trị với một phạm vi được chỉ định bởi giá trị trung bình. * Một tập hợp con của bệnh nhân được đánh giá. ** Các bệnh nhân trưng bày các đột biến trong gen khác nhau hai đã được bỏ qua. mutations), 61 (54.5%) ET, and 11 (47.8%) PMF patients in this cohort (Figure 1A). The MPLW515K/L mutation was assessed using a newly developed allele-specific PCR technique called dual amplification refractory mutation system PCR (DARMS-PCR) and subsequent capillary electrophoresis.9 All identified MPL mutations were further verified using deep sequencing. In addition, by screening MPN patients who were previously negative for JAK2, MPL, and CALR mutations we identified MPLW515K/L mutations below the detection limit of DARMS-PCR as well as other MPL mutations (MPLW515R). Collectively, the MPLW515K/L/R mutation was identified in 9 (8.0%) ET and one (4.4%) PMF patients (Table 1 and Figure 1A), which was similar to the frequencies of 3%-8.3% that were found in Caucasian cohorts2,3,5-7,10-13 but different from those in a Chinese cohort with a substantially lower frequency (1.2%).4 We noted that one ET patient exhibited both the MPLW515K (allele frequency 50.7%) and W515L (allele frequency 2.5%) mutations. The CALR mutation on exon 9 was examined using our in-house fragment analysis method (Online Supplementary Appendix). All identified CALR mutations were confirmed by deep sequencing. CALRmutations were identified in 22 (19.6%) ET and 7 (30.4%) PMF patients (Figure 1A), which was similar to the reported frequency in ET (15.5-28%)2-6 and PMF (25%) patients.7 In contrast, one study examined a Cypriot cohort and identified a frequency of 8.7%,10 but patients with thrombocytosis were not classified according to the WHO 2008 criteria. Unlike the MPL mutation, the CALR mutation was present at similar frequencies in ET patients in both Japanese (19.6%) and Chinese (22.7%)4 cohorts. CALR mutations (n=29) were present in the following distribution: 11 type 1 (c.1092_1143del), 8 type 2 (c.1154_1155insTTGTC), one type 4 (c.1102_1135del), one type 22 (c.1120_1123del), one type 28 (c.1131_1152del), 2 type 33 (c.1154_1155insATGTC), andone type 34 (c.1154delinsCTTGTC) mutation, as well as four novel mutations (type 42-45; c.1100_1133del, c.1126_1144del, c.1153_1154insTCTGT, and c.1148_1154>GAC) (Online Supplementary Table S2). The CALRmutation in PMF patients is limited to types 1 and 2, and the type 1 mutation (n=6) is more frequent than the type 2 mutation (n=1), as observed in a Caucasian PMF cohort.3 All novel CALR mutations generate a frame shift that converts the C-terminal amino acids from negatively to positively charged, as is the case for other mutations (Online Supplementary Table S2). Although JAK2, MPL, and CALR mutations have been proposed to be mutually exclusive, we identified one ET patient with JAK2V617F and MPLW515L mutations and one ET patient with JAK2V617F and CALR mutations, which was consistent with recent reports that described a rare concomitant mutation of these gene mutations in Caucasian7,14 and Chinese4 cohorts. Finally, patient specimens that were negative for JAK2V617F, MPLW515K/L, and CALR exon 9 mutations by PCR-based assays were analyzed by deep sequencing of all the JAK2, MPL, and CALR exons (Online Supplementary Appendix). This analysis identified 22 (19.6%) ET and 4 (17.4%) PMF “triple-negative” patients (Figure 1A). We compared the hematologic and clinical features of patients who were classified according to mutation status (Table 1), with the exception of 2 ET patients who harbored concurrent JAK2 and MPL or CALR mutations (see above). In the ET patients, compared with the JAK2V617F mutation, the presence of the CALR or MPL mutation was associated with lower leukocyte and higher platelet counts (Table 1). The CALR mutation was also associated with a lower red blood cell count. These hematologic features are consistent with the features reported for different ethnic groups.2-5 We observed a trend of male dominance among the ET patients with CALRmutations (male to female ratio 13:8) compared with the patients with JAK2 mutations (male to female ratio 24:35), which is consistent with findings in Caucasian cohorts but inconsistent with findings in a Chinese cohort.4 We determined that the triple-negative ET patients (mean age 45.0 years old) were strikingly younger than the patients with other genotypes (Table 1 and Figure 1B). Adjusted P values for multiple comparisons of ages between triple-negative and other genotypes such as mutated JAK2, CALR, or MPL by Tukey-Kramer test were <0.001, 0.015, and 0.037, respectively. The mean age of the triple-negative ET patients exhibited a wide variation between the cohorts, ranging from 42 to 53 years.3-5 The difference in age between the triple-negative patients and patients with other genotypes was more than 14 years, which was only observed in our cohort. In other cohorts, the difference in the ages of the triple-negative patients with the youngest age and patients with other genotypes with the second youngest age was, at most, five years.15 Despite a lack of known clonal gene mutations, the triplenegative patients’ bone marrow biopsies indicated apparent proliferation of megakaryocytes with a large and mature morphology, and their clinical characteristics corresponded to the WHO 2008 criteria for ET. Although it w

Kết quả (Việt) 2:

Đột biến soma thường xuyên trong gen JAK2, MPL, và CALR đã được mô tả ở những bệnh nhân được chẩn đoán u Philadelphia âm myeloproliferative (MPN), bao gồm đa hồng cầu vera (PV), tiểu cầu thiết yếu (ET), và myelofibrosis chính (PMF). Những đột biến này thường là loại trừ lẫn nhau, và hồ sơ của họ trong thực thể bệnh khác nhau rất đa dạng. Trong PV, đột biến JAK2 tồn tại trong khoảng 95% bệnh nhân. Tuy nhiên, trong ET và PMF bệnh nhân, đột biến JAK2, CALR, và MPL có mặt tại các tần số xấp xỉ 60%, 20% và 5%, respectively.1 Để hiểu rõ hơn MPN sinh bệnh liên quan với ET và PMF gây ra bởi biến đổi gen khác nhau , phân loại và kiểm tra dịch tễ học của bệnh nhân theo sự biến đổi gen đã được thực hiện. Trong ET, đột biến CALR được liên kết với một mức độ thấp hơn hemoglobin, số lượng tiểu cầu cao hơn, số lượng bạch cầu thấp hơn, và tuổi trẻ hơn so với các đột biến JAK2V617F; 2-5 đặc điểm tương tự đã được quan sát thấy trong PMF patients.6,7 Các CALRmutation cũng là kết hợp với ưu thế nam giới, nguy cơ huyết khối 2,5 thấp hơn, 4,6 và tỷ lệ sống tốt hơn; 6 Tuy nhiên, những đặc điểm này không phải luôn luôn rõ ràng và rất đa dạng trong một số trường hợp. Tỷ lệ giới tính tương tự đã được báo cáo trong một nghiên cứu đoàn hệ của Trung Quốc với các bệnh nhân ET JAK2and CALRmutations.4 các biến thể giữa đội quân trong các dữ liệu được công bố rất có thể phản ánh nguồn gốc di truyền khác nhau trong các nhóm dân tộc khác nhau mà là stud
IED. Ngoài ra, bởi vì tất cả các phân tích đã được thực hiện trong các quần da trắng, với ngoại lệ của một nghiên cứu từ Trung Quốc, 4 các bằng chứng dịch tễ liên quan đến dân số châu Á bị hạn chế. Ở đây, chúng tôi đã nghiên cứu một nhóm MPN Nhật đã được biết trước đây liên quan đến đột biến JAK2V617F với. Các nhóm gồm 66 PV, 112 ET, và 23 bệnh nhân PMF, theo định nghĩa của Tổ chức Y tế thế giới năm 2008 (WHO) criteria.8 thông số lâm sàng và xét nghiệm được thực hiện tại thời điểm chẩn đoán đầu tiên hoặc khi mẫu DNA của bộ gen đã được thu thập. Nghiên cứu này được tiến hành theo quy định của Tuyên bố Helsinki và được sự chấp thuận của ủy ban đạo đức của Juntendo University School of Medicine (IRB # 2.012.208 và 2.013.020 #). Tất cả các mẫu bệnh nhân mà trước đó đã được phân tích cho mutation8 JAK2 được đánh giá đột biến CALR và MPL sử dụng phản ứng chuỗi polymerase (PCR) xét nghiệm dựa trên và tiếp theo sâu chuỗi. Ngoài ra, các mẫu vật trưng bày một JAK2V617F đột biến tần số alen dưới 10% trong các nghiên cứu trước đây đã được tái đánh giá thông qua sắp xếp chuyên sâu (Online bổ sung Appendixand trực tuyến bổ sung Bảng S1). Đánh giá lại xác định được một PV và 2 bệnh nhân ET là tiêu cực cho JAK2mutation người một xét nghiệm PCR dựa trên trước đó đã được xác định là JAK2V617F dương với một tần số alen thấp. Ngược lại, đột biến JAK2 ở bệnh nhân MPN người âm tính đột biến JAK2, MPL, và CALR bằng xét nghiệm PCRbased không được xác định bởi trình tự sâu (xem dưới đây để phát hiện MPLand CALRmutation). Như vậy, đột biến JAK2 đã được tìm thấy trong 64 (97%) PV (bao gồm 3 exon 12
haematologica 2015; 100: E46
CHỮ TO THE EDITOR
Bảng 1. Đặc điểm lâm sàng và huyết học theo tình trạng đột biến gene.
ET (n = 110 **) PMF (n = 23)
Đột biến JAK2 CALR MPL âm JAK2 CALR MPL tiêu cực Số bệnh nhân (n) 59 21 8 22 11 714 Nam: nữ (n) 24:35 13: 8 2: 6 09:13 7: 4 5: 2 1: 0 2: 2 Tuổi (năm) 60,2 59,0 62,0 45,0 71,9 63,6 77 53,3 (19-83) (33-86) (32-81) (26-81) (52-88) (55-81) (38 -76) WBC (× 109 / L) 11,1 7,9 8,2 9,6 14,8 7,2 4,9 16,4 (5,2-52,3) (4,1-12,7) (4,9-11,3) (4,8-21,9) (2,2-52,8) (3,2-12,3) (5,4 -44,1) RBC (× 109 / L) 4783 4421 4364 4615 3876 3236 2960 3105 (3420-7060) (2590-5570) (3600-4600) (3670-6160) (2230-5760) (2200-4111) (1920 -3680) Hct (%) 42,0 41,3 39,6 40,9 32,8 29,2 24,8 28,1 (25,4-54,1) (27,6-49,6) (34,3-44,6) (33,8-50,0) (20,4-40,5) (19,4-38,7) (17,5-34,0) Hb (g / dL) 13,7 13,6 12,7 13,4 10,3 9,1 7,8 9,4 (7,9-16,9) (9,4-17,0) (10,8-14,1) (10,8-16,8) (6,6-13,0) (5,7-12,7) (6,1-11,5) MCV (FL) 88,6 93,7 90,8 89,3 86,2 90,2 83,8 90,7 (66,1-106,6) (87,4-115,4) (85,5-97,8) (61,7-97,0) (60,8-98,4) (83,5-98,5) (87,0-92,4) Tiểu cầu (× 109 / L) 890 1109 1177 910 477 351 264 430 (486-1580) (496-2832) (800-1592) (349-2337) (70-1280) (82-1491) (2-855)
kiện huyết khối * 9 / 55 1/19 3/19 1/8 2/6 0/5 0/1 0/2 (16,4%) (5,3%) (12,5%) (15,8%) (33,3%) (0%) (0% ) (0%) Lách to * 8/59 0/20 1/20 9/11 1/8 4/6 1/1 3/4 (13,6%) (0%) (12,5%) (5,0%) (81,8% ) (66,7%) (100%) (75%)
WBC: tế bào máu trắng đếm; RBC: tế bào máu đỏ đếm; Hct: hematocrit; Hb: hemoglobin; MCV: có nghĩa là khối lượng phân từ. Giá trị với một phạm vi được chỉ định bởi các giá trị trung bình. * Một tập hợp con của bệnh nhân được đánh giá. ** Các bệnh nhân trưng bày những đột biến trong hai gen khác nhau đã được bỏ qua.
Đột biến), 61 (54,5%) ET, và 11 (47,8%) bệnh nhân PMF trong nhóm này (Hình 1A). Các MPLW515K / L đột biến được đánh giá bằng cách sử dụng một kỹ thuật mới được phát triển allele cụ thể gọi là PCR khuếch đại kép hệ thống đột biến chịu nhiệt PCR (DARMS-PCR) và mao mạch sau electrophoresis.9 Tất cả các đột biến MPL xác định đã được kiểm chứng bằng cách sử dụng sắp xếp chuyên sâu. Ngoài ra, bằng cách sàng lọc bệnh nhân MPN người trước đây tiêu cực cho JAK2, MPL, và các đột biến CALR chúng tôi xác định đột biến MPLW515K / L so với giới hạn phát hiện của DARMS-PCR cũng như đột biến MPL khác (MPLW515R). Chung, các MPLW515K / L / R đột biến đã được xác định trong 9 (8,0%) và bệnh nhân ET một (4,4%) PMF (Bảng 1 và Hình 1A), mà là tương tự như tần số của 3% -8,3% đã được tìm thấy trong cohorts2,3,5-7,10-13 Da nhưng khác nhau từ những người trong một đoàn hệ của Trung Quốc với một tần số thấp hơn đáng kể (1,2%). 4 Chúng tôi lưu ý rằng một bệnh nhân ET trưng bày cả MPLW515K (tần số alen 50,7%) và W515L ( tần số alen 2,5%) đột biến. Các đột biến CALR trên exon 9 đã được kiểm tra bằng cách sử dụng trong nhà phương pháp phân tích phân mảnh của chúng tôi (Online bổ sung phụ lục). Tất cả các đột biến CALR xác định đã được xác nhận bởi sắp xếp chuyên sâu. CALRmutations đã được xác định trong 22 (19,6%) và ET 7 (30,4%) bệnh nhân PMF (Hình 1A), mà là tương tự như tần số được báo cáo trong ET (15,5-28%) 2-6 và PMF (25%) patients.7 Ngược lại, một nghiên cứu đã khảo sát một nhóm Cypriot và xác định một tần số 8,7%, nhưng 10 bệnh nhân tăng tiểu cầu không được phân loại theo các tiêu chuẩn của WHO năm 2008. Không giống như các đột biến MPL, đột biến CALR đã có mặt tại các tần số tương tự ở bệnh nhân ET ở cả Nhật Bản (19,6%) và 4 đội quân Trung Quốc (22,7%). Đột biến CALR (n = 29) đã có mặt trong sự phân bố như sau: 11 loại 1 (c.1092_1143del), 8 loại 2 (c.1154_1155insTTGTC), một trong những loại 4 (c.1102_1135del), một loại 22 (c.1120_1123del), một loại 28 (c.1131_1152del), 2 loại 33 (c.1154_1155insATGTC), và
một loại 34 (c.1154delinsCTTGTC) đột biến, cũng như bốn đột biến mới (loại 42-45; c.1100_1133del, c.1126_1144del, c .1153_1154insTCTGT, và c.1148_1154> GAC) (Online bổ sung Bảng S2). Các CALRmutation ở bệnh nhân PMF được giới hạn trong loại 1 và 2, và loại 1 đột biến (n = 6) là thường xuyên hơn so với loại 2 đột biến (n = 1), như được quan sát trong một Da PMF cohort.3 Tất cả các đột biến CALR tiểu thuyết tạo ra một sự thay đổi khung hình có thể chuyển đổi các axit amin C-thiết bị đầu cuối từ tiêu cực để tích điện dương, như là trường hợp đột biến khác (Online bổ sung Bảng S2). Mặc dù đột biến JAK2, MPL, và CALR đã được đề xuất để loại trừ lẫn nhau, chúng tôi xác định được một ET bệnh nhân có đột biến JAK2V617F và MPLW515L và một bệnh nhân có đột biến JAK2V617F và CALR ET, đó là phù hợp với các báo cáo gần đây được mô tả một đột biến đồng thời hiếm hoi của những đột biến gen trong Caucasian7,14 và Chinese4 đoàn hệ. Cuối cùng, mẫu bệnh nhân âm tính với JAK2V617F, MPLW515K / L, và CALR exon 9 đột biến bằng xét nghiệm PCR dựa trên đã được phân tích bằng cách sắp xếp chuyên sâu của tất cả các exon JAK2, MPL, và CALR (Online bổ sung phụ lục). Phân tích này được xác định 22 (19,6%) và ET 4 (17,4%) bệnh nhân PMF "triple-negative" (Hình 1A). Chúng tôi so sánh huyết học và đặc điểm lâm sàng của bệnh nhân được phân loại theo tình trạng đột biến (Bảng 1), với ngoại lệ của 2 bệnh nhân ET người nuôi dưỡng JAK2 đồng thời và MPL hoặc CALR đột biến (xem ở trên). Trong các bệnh nhân ET, so với các đột biến JAK2V617F, sự hiện diện của các CALR hoặc MPL đột biến có liên quan với bạch cầu và tiểu cầu thấp hơn cao hơn số lượng (Bảng 1). Các CALR đột biến cũng được liên kết với một số lượng tế bào máu đỏ thấp hơn. Những tính năng huyết học phù hợp với các tính năng báo cáo cho groups.2-5 dân tộc khác nhau Chúng tôi quan sát thấy một xu hướng thống trị của nam giới ở các bệnh nhân ET với CALRmutations (nam thành nữ tỷ lệ 13: 8) so với các bệnh nhân có đột biến JAK2 (nam thành nữ tỷ lệ 24:35), phù hợp với những phát hiện trong nghiên cứu thuần tập Da nhưng không phù hợp với những phát hiện trong một cohort.4 Trung Quốc Chúng tôi xác định rằng các bệnh nhân ET triple-âm (tuổi trung bình là 45,0 tuổi) đã nổi bật hơn so với bệnh nhân trẻ hơn có kiểu gen khác ( Bảng 1 và Hình 1B). Giá trị P điều chỉnh cho nhiều so sánh độ tuổi từ ba âm và các kiểu gen như JAK2 đột biến, CALR, hoặc MPL bởi Tukey-Kramer thử nghiệm là <0,001, 0,015, và 0,037, tương ứng. Tuổi trung bình của bệnh nhân ET ba âm trưng bày một sự khác biệt lớn giữa các đội quân, dao động 42-53 years.3-5 Sự khác biệt tuổi tác giữa các bệnh nhân triple-tiêu cực và bệnh nhân có kiểu gen khác đã được hơn 14 năm, trong đó chỉ được quan sát thấy trong nhóm của chúng tôi. Trong thuần tập khác, sự khác biệt trong độ tuổi của bệnh nhân triple-âm tính với tuổi trẻ và bệnh nhân có kiểu gen khác với tuổi trẻ thứ hai là, nhiều nhất, năm years.15 Mặc dù thiếu đột biến gen vô tính đã biết, các bệnh nhân triplenegative 'sinh thiết tủy xương cho thấy sự phát triển rõ ràng của megakaryocytes với một hình thái lớn và trưởng thành, và đặc điểm lâm sàng của họ tương ứng với các tiêu chuẩn của WHO năm 2008 cho ET. Mặc dù nó w