7.1 Reagents and chemicalsAlpha lip

7.1 Reagents and chemicals
Alpha lipoic acid [DL-α-lipoic acid; purity ≥ 99.0%] and bisphenol A (99%)
were purchased from Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany). Potassium dihydrogen
phosphate p.A, ortho-phosphoric acid (85%), HPLC-gradient grade acetonitrile and
methanol were delivered from Merck (Merck, Darmstadt, Germany).
Deionized water, prepared using a Barnstead Easypur LF (Dubuque, Iowa,
USA) water purification system, was used in all experiments.
7.2 Preparation of solutions
7.2.1 Stock solutions
A stock solution of α-LA was prepared by dissolving 10.0 mg of α-LA in 100
ml of methanol. Calibration solutions of six different concentrations between 0.005
and 1 µg/ml were made by diluting the stock solution with acetonitrile/water (30/70,Alpha lipoic acid in dietary supplements
103
v/v). A stock solution of Bisphenol A was prepared by dissolving 10 mg bisphenol A
in 100 ml of methanol (internal standard) and was diluted with acetonitrile/water
(30/70, v/v) to 2 µg/ml. All the solutions were stored in tightly sealed amber
volumetric flasks at 4°C.
7.2.2 Dietary supplements
Six different dietary supplements (capsules/tablets/sachet) were purchased
from local pharmacies as well as from the US market. A detailed description is given
in Table 14. Ten tablets were weighed, finely ground and the average weight of one
tablet was determined. Likewise, the content of 10 capsules was pooled and the
average weight of one capsule was taken.
7.2.3 Mobile phase
Mobile phase I: Acetonitrile/methanol/50 mM potassium dihydrogen
phosphate (pH 3, adjusted with phosphoric acid), 350/65/585, (v/v/v) were mixed,
filtered through a 0.45 µm Sartolon polyamide filter (Sartorius AG, Goettingen
Germany) and degassed for 20 minutes prior to use.
Mobile phase II: consisted of 0.1% acetic acid in water and acetonitrile (55/45,
v/v).
7.3 Sample preparation
Three aliquots (50 mg) of each homogenized supplement and of the sachet
were dissolved in 8.0 ml of methanol and sonicated for 30 min at room temperature.
The mixtures were then transferred into 25 ml volumetric flasks and the volume was
made up to the mark with distilled water.
2 ml of the extracts were pipetted out into Eppendorf tubes and centrifuged for
10 min at 10,000 rpm. The supernatants were further diluted with acetonitrile/water
(30/70, v/v) depending on the content of supplement. 500 µl of these solutions were
then transferred to autosampler vials containing 450 µl acetonitrile/water (30/70, v/v)
and 50 µl of bisphenol A solution (2 µg/ml).

Kết quả (Việt) 1:

7.1 thử và hóa chấtAlpha lipoic acid [DL-α-lipoic acid; độ tinh khiết ≥ 99,0%] và bisphenol (99%)đã được mua từ Sigma-Aldrich (Steinheim, Đức). Kali dihydrogenphotphat p.A, ortho phosphoric acid (85%), độ dốc HPLC grade acetonitrile vàmethanol được chuyển giao từ hãng Merck (Merck, Darmstadt, Đức).Deionized nước, chuẩn bị bằng cách sử dụng một Barnstead Easypur LF (Dubuque, Iowa,Hệ thống lọc nước MỸ), được sử dụng trong tất cả các thí nghiệm.7.2 chuẩn bị các giải pháp7.2.1 cổ phần giải phápMột giải pháp cổ của α-LA đã được chuẩn bị bằng cách hòa tan 10,0 mg α-LA 100ml của methanol. Giải pháp hiệu chuẩn của sáu nồng độ khác nhau giữa 0,005và 1 µg/ml đã được thực hiện bởi pha loãng cổ phiếu giải pháp với acetonitrile/nước (30/70, Alpha lipoic acid trong chế độ ăn uống bổ sung103v/v). Một giải pháp cổ của Bisphenol A đã được chuẩn bị bằng cách hòa tan 10 mg bisphenol Atrong 100 ml methanol (tiêu chuẩn nội bộ) và đã được pha loãng với nước acetonitrile(30/70, v/v) để 2 µg/ml. Tất cả các giải pháp đã được lưu trữ trong hổ phách chặt kínthể tích bình ở 4° C.7.2.2 chế độ ăn uống bổ sungSáu khác nhau bổ sung chế độ ăn uống (viên nén/viên nang/gói) đã được muatừ các hiệu thuốc địa phương cũng như từ các thị trường Hoa Kỳ. Một mô tả chi tiết được đưa ratrong bảng 14. 10 viên nén được cân nặng, Thái mặt đất và trọng lượng trung bình của mộtmáy tính bảng được xác định. Tương tự, nội dung của các viên nang 10 được gộp lại và cáctrọng lượng trung bình của một viên nang được thực hiện.7.2.3 di động giai đoạnĐiện thoại di động giai đoạn I: Acetonitrile-methanol-50 mM kali dihydrogenphốt phát (pH 3, điều chỉnh với axit photphoric), 350/65/585, (v/v/v) đã được pha trộn,lọc qua một 0,45 μm Sartolon Poliamit bộ lọc (Sartorius AG, GoettingenĐức) và degassed cho 20 phút trước khi sử dụng.Điện thoại di động giai đoạn II: bao gồm các axit axetic 0,1% trong nước và acetonitrile (55/45,v/v).7.3 chuẩn bị mẫuBa aliquots (50 mg) mỗi bổ sung homogenized và của góiđã được hòa tan trong 8.0 ml methanol và sonicated trong 30 phút ở nhiệt độ phòng.Các hỗn hợp sau đó được chuyển vào 25 ml lọ thể tích và khối lượngthực hiện để đánh dấu với nước cất.2 ml của các chất chiết xuất đã được pipetted ra vào Eppendorf ống và ly cho10 phút tại 10.000 vòng/phút. Các supernatants đã tiếp tục pha loãng với acetonitrile/nước(30/70, v/v) tùy thuộc vào nội dung bổ sung. 500 ml của các giải pháp đãsau đó chuyển sang autosampler lọ chứa 450 ml acetonitrile nước (30/70, v/v)và 50 ml bisphenol một giải pháp (2 µg/ml).

Kết quả (Việt) 2:

7.1 Thuốc thử và hóa chất
Alpha lipoic acid [axit DL-α-lipoic; độ tinh khiết ≥ 99,0%] và bisphenol A (99%)
được mua từ Sigma-Aldrich (Steinheim, Đức). Dihydrogen Potassium
phosphate pA, axit ortho-phosphoric (85%), HPLC-gradient lớp acetonitrile và
methanol được chuyển giao từ Merck (Merck, Darmstadt, Đức).
Nước khử Ion hóa, chuẩn bị sử dụng một Barnstead Easypur LF (Dubuque, Iowa,
Mỹ) hệ thống lọc nước, được sử dụng trong tất cả các thí nghiệm.
7.2 Chuẩn bị các giải pháp
7.2.1 giải pháp Cổ
Dung dịch α-LA đã được chuẩn bị bằng cách hòa tan 10,0 mg α-LA trong 100
ml methanol. Giải pháp hiệu chuẩn sáu nồng độ khác nhau giữa 0.
005 và 1 mg / ml đã được thực hiện bằng cách pha loãng dung dịch với axetonitril / nước (30/70, acid lipoic Alpha trong chất bổ sung chế độ ăn uống
103
v / v). Một giải pháp chứng khoán của Bisphenol A đã được chuẩn bị bằng cách hòa tan 10 mg bisphenol A
trong 100 ml methanol (tiêu chuẩn nội bộ) và được pha loãng với axetonitril / nước
(30/70, v / v) 2 mg / ml. Tất cả các giải pháp đã được lưu trữ trong điều kiện đóng kín hổ phách
bình định mức ở 4 ° C.
7.2.2 bổ sung chế độ ăn uống
Sáu bổ sung chế độ ăn uống khác nhau (viên nang / viên / gói) được mua
từ các hiệu thuốc địa phương cũng như từ thị trường Mỹ. Mô tả chi tiết được đưa ra
trong Bảng 14. Mười viên được cân, nghiền mịn và trọng lượng trung bình của một
viên thuốc đã được xác định. Tương tự như vậy,
nội dung của 10 viên nang đã được gộp chung và các trọng lượng trung bình của một viên nang được thực hiện.
7.2.3 pha động
pha động I: Acetonitrile / methanol / 50 mM kali dihydrogen
phosphate (pH 3, điều chỉnh với axit photphoric), 350/65/585, (v / v / v) đã được pha trộn,
lọc qua một Sartolon 0,45 mm lọc polyamide (Sartorius, Goettingen
Đức) và loại khí trong 20 phút trước khi sử dụng.
Pha động II: gồm 0,1% axit axetic trong nước và acetonitril (55/45,
v / v).
7.3 Mẫu chuẩn bị
ba dung dòch (50 mg) của mỗi bổ sung đồng nhất và các gói
được hòa tan trong 8,0 ml methanol và âm trong 30 phút ở nhiệt độ phòng.
Các hỗn hợp sau đó được chuyển thành 25 ml bình định mức và khối lượng đã
thực hiện lên đến vạch bằng nước cất.
2 ml của các chất chiết xuất được pipetted ra vào ống Eppendorf và ly tâm
10 phút ở 10.000 rpm. Các nước nổi đã được pha loãng thêm với axetonitril / nước
(30/70, v / v) tùy thuộc vào nội dung của bổ sung. 500 ml của các giải pháp đã được
sau đó được chuyển mẫu tự động lọ chứa 450 ml axetonitril / nước (30/70, v / v)
và 50 ml bisphenol A giải pháp (2 mg / ml). v / v) tùy thuộc vào nội dung của bổ sung. 500 ml của các giải pháp đã được sau đó được chuyển mẫu tự động lọ chứa 450 ml axetonitril / nước (30/70, v / v) và 50 ml bisphenol A giải pháp (2 mg / ml). v / v) tùy thuộc vào nội dung của bổ sung. 500 ml của các giải pháp đã được sau đó được chuyển mẫu tự động lọ chứa 450 ml axetonitril / nước (30/70, v / v) và 50 ml bisphenol A giải pháp (2 mg / ml).

Kết quả (Việt) 3:

7.1 Kit và hóa chấtLipoic acid α - [DL- α - lipoic acid; sự thuần khiết và lấy một 99%] và BPA (99%)Từ Sigma - Aldrich (Steinheim, Đức).磷酸二氢钾Phosphat, O - phosphate (85%), HPLC acetonitrile và cấp độ dốcMethanol (... Từ..., Darmstadt, Đức). nước, sử dụng Barnes Ted easypur L.f. sẵn sàng (Dubuque, Iowa,Hệ thống lọc nước Mỹ), được dùng trong các thí nghiệm.Giải pháp chuẩn bị 7.2Cổ phiếu 7.2.1 giảiVới 10 mg α - la làm nguyên liệu, trong 100 trong dung dịch chuẩn bị α - Los Angeles.Methanol methanol.6 loài khác được điều chỉnh nồng độ của dung dịch 0.0051 µ gam / CC - acetonitrile / nước pha loãng là (30 / 70, trong bữa ăn hàng ngày lipoic acid α -一百零三Volume / Volume).Qua 10 mg tan BPA chuẩn bị BPATrong 100 ml methanol (nội bộ tiêu chuẩn), và dùng acetonitrile / nước pha loãng(30 / 70, v/v) 2 µ μ g / mL, tất cả các giải pháp lưu trữ trên đều bị phong tỏa là Amber.Dung lượng chai ở 4 độ C.7.2.2 bữa ăn hàng ngày6 loài khác ăn (hạt / vùng / túi) muaTừ địa phương thuốc, và từ thị trường Mỹ.Gives a detailed description14 trong bảng.Mười một cân nó, đất tốt, trọng lượng trung bình cho% 1Viên chắc chắn.Tương tự, 10 viên nang nội dung hội tụ vàLấy một viên nang có trọng lượng trung bình.Giai đoạn 7.2.3 di chuyển.Giai đoạn chính: acetonitrile / methanol / 50 mmPhosphate (giá trị pH 3, với phosphate điều chỉnh), 350 / 65 / 585, (Volume / Volume / Volume) pha trộn,Qua 0.45 µ m sartolon lọc lọc (Đức Công ty, GoettingenĐức) và 20 phút trước khi sử dụng.Giai đoạn từ 0.1%: dòng chảy của axit axetic trong nước và acetonitrile (55 / 45),Volume / Volume).7.3 mẫu chuẩn bịTrisection (50 mg) mỗi một đồng nhất hóa bổ sung và túi thơm àHòa tan trong 8 CC methanol siêu âm với 30 phút, nhiệt độ trong phòng.Hỗn hợp sau đó sẽ chuyển đến 25 ml dung chai VolumeDùng nước cất làm dấu hiệu.2 cc tham gia vào Bành chiết trừ ống và ly tâm10 phút ở 10.000 quay.Các gạn nước thêm pha loãng bằng acetonitrile /(30 / 70, Volume / Volume) tùy thuộc vào nội dung bổ sung.500 µ L những giải phápSau đó chuyển sang tự động vào loại chai chứa 450 µ L acetonitrile / nước (30 / 70, v/v)50 µ L BPA của dung dịch (2 µ gam / ml).