. Immature embryos were isolated an

. Immature embryos were isolated and plated on solid
MS medium containing 3% (w/v) maltose, 2 mg l~1 2,4-D
(2,4-dichlorophenoxyacetic acid), 0.8% (w/v) agarose or 0.3% (w/v)
gelrite (MS2). After a 16- to 18-h preculture at 28°C in a dark room,
immature embryos (80—100 pieces per petri dish) were bombarded
with the PDC-1000/He system (Datta et al. 1996). The manufacturer’s
instructions were followed for coating 1.0-lm gold microcarriers
(Bio-Rad, Hercules, Calif.), with plasmid DNA, prepared
using the Magic Maxipreps DNA purification system (Promega,
Madison, Wis). After bombardment, target explants were directly
transferred to MS2 medium supplemented with 50 mg l~1 hygromycin
B for selection. Developing calli were subcultured every
2 weeks on the same medium for five to seven cycles. Resistant calli
were transferred to 20 ml N6 medium supplemented with 2 mg l~1
kinetin, 1 mg l~1 NAA, 2 mg l~1 glycine, 1 g/l CH, 30 g/l maltose,
3 g/l gelrite, and 50 mg l~1 hygromycin B (3N6) in the dark and at
28°C for preregeneration. After 7—10 days, the same calli were
transferred to 50-ml flasks containing 20 ml 3N6 medium without
hygromycin B for plant regeneration. Two- to three-week-old plantlets
were transferred to either Yoshida’s culture solution or directly
to the soil and placed in the greenhouse under a day : night temperature
regime of 29°: 23°C.

Kết quả (Việt) 1:

. Non phôi đã được cô lập và mạ ngày rắnMS trung bình chứa 3% (w/v) maltose, 2 mg l ~ 1 2,4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic acid), 0,8% (w/v) agarose hoặc 0,3% (w/v)gelrite (MS2). Sau khi một preculture h 16 tới 18 tại 28° C trong một căn phòng tối tăm,non phôi (80-100 miếng cho một món ăn petri) đã tiến hành bắn phávới hệ thống PDC-1000/ông (Datta et al. 1996). Các nhà sản xuấthướng dẫn được tiếp nối cho lớp phủ 1.0-lm vàng microcarriers(Sinh học-Rad, Hercules, California), với plasmid DNA, chuẩn bịbằng cách sử dụng hệ thống thanh lọc Magic Maxipreps DNA (Promega,Madison, Wis). Sau đợt bắn phá, mục tiêu explants trực tiếpchuyển sang phương tiện MS2 bổ sung với 50 mg l ~ 1 hygromycinB để lựa chọn. Phát triển calli đã được subcultured mỗi2 tuần trên cùng một phương tiện cho chu kỳ 5-7. Khả năng kháng calliđược chuyển đến trung bình 20 ml N6 bổ sung với 2 mg l ~ 1kinetin, 1 mg l ~ 1 NAA, 2 mg l ~ 1 glycine, 1 g/l CH, 30 g/l maltose,3 g/l gelrite, và 50 mg l ~ 1 hygromycin B (3N6) trong bóng tối và tại28° C cho preregeneration. Sau khi 7-10 ngày, calli tương tự đãchuyển đến 50 ml bình chứa 20 ml 3N6 trung bình mà không cóhygromycin B cho tái tạo thực vật. Hai đến ba-tuần-tuổi plantletsđược chuyển đến một trong hai Yoshida văn hóa giải pháp hoặc trực tiếpđể đất này và đặt trong nhà kính dưới một ngày: nhiệt độ ban đêmchế độ ° 29: 23 ° C.

Kết quả (Việt) 2:

. Phôi chưa trưởng thành đã bị cô lập và mạ trên rắn
môi trường MS có chứa 3% (w / v) maltose, 2 mg l ~ 1 2,4-D
(2,4-D), 0,8% (w / v) agarose 0,3% (w / v)
gelrite (MS2). Sau một preculture 16 đến 18 giờ ở 28 ° C trong một căn phòng tối,
phôi non (80-100 miếng mỗi petri món ăn) đã tấn công dồn dập
với PDC-1000 / Ông hệ thống (Datta et al. 1996). Các nhà sản xuất
hướng dẫn đã được theo sau để phủ lên bề microcarriers vàng 1,0-lm
(Bio-Rad, Hercules, Calif.), Với DNA plasmid, chuẩn bị
sử dụng hệ thống lọc thuật Maxipreps DNA (Promega,
Madison, Wisconsin). Sau khi bắn phá, cấy mục tiêu đã được trực tiếp
chuyển giao cho MS2 vừa bổ sung 50 mg l ~ 1 hygromycin
B để lựa chọn. Mô sẹo phát triển được cấy mỗi
2 tuần trên các phương tiện tương tự cho năm đến bảy chu kỳ. Mô sẹo chịu
được chuyển giao cho 20 ml môi trường N6 bổ sung 2 mg l ~ 1
kinetin, 1 mg l ~ 1 NAA, 2 mg l ~ 1 glycine, 1 g / l CH, 30 g / l maltose,
3 g / l gelrite, và 50 mg l ~ 1 hygromycin B (3N6) trong bóng tối và ở
nhiệt độ 28 ° C cho preregeneration. Sau 7-10 ngày, các mô sẹo tương tự đã được
chuyển giao cho bình 50 ml có chứa 20 ml 3N6 trung mà không
hygromycin B để tái sinh cây. Hai đến cây con ba tuần tuổi
đã được chuyển giao cho một trong hai giải pháp văn hóa của Yoshida hoặc trực tiếp
vào đất và đặt trong nhà kính dưới một ngày: nhiệt độ ban đêm
chế độ 29 °: 23 ° C.