Tracheal and popliteal lymph nodes

Tracheal and popliteal lymph nodes were
collected from 66 red deer, 20 fallow deer, 56
roe deer, and 16 mouflon. All samples were
from healthy free-ranging animals that were
shot by professional hunters from September
to December 2003 in all counties of Hungary.
Samples were frozen at 220 C for 1–2 mo be-
fore PCR testing.
Samples of 34 sheep and 44 goats (lymph
nodes and spleens) were also collected from
healthy animals that were euthanized at abat-
toirs and from animals submitted for diagnostic
examination to the Veterinary Diagnostic Insti-
tute Budapest. All sheep and goat samples orig-
inated from northern Hungary.
For sample preparation, thawed tissues were
homogenized in mortars and digested with Pro-
teinase-K (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, Mis-
souri, USA) at 50 C overnight. Cell debris was
sedimented by centrifugation (15,200 3 G for
1 min). DNA was purified from supernatant us-
ing a Miniprep Express Matrix Kit (Qbiogene
Inc., Carlsbad, California, USA) as directed by
the manufacturer.
For the detection of BoHV-1 and BoHV-5, a
duplex nested PCR with GC1, CR1, and CR26
primers was used (Ros et al., 1999). For the
detection of BoHV-4 and AlHV-1, a duplex
nested PCR assay was used (Fa´bia´n and Egyed,
2004). To detect BoHV-2, a novel nested PCR
was developed to amplify a sequence of the gly-
coprotein H (gH) gene. The gH sequence was
obtained from the GenBank European Molec-
ular Biology Laboratory (EMBL) data bank
(accession number AF 375976), and the follow-
ing oligonucleotides were selected as primers:
MAM-1: 59-GTT TGA CGC TGG CTT AGT
GG-39; MAM-2: 59-TAT CAG GAT TAC CCC
GAC CC-39; MAM-3: 59-TGA CGC TGG CTT
AGT GGG TA-39, and MAM-4: 59-CGG TAG
GTA TAG ACG GTC GCT C-39. The outer
primers (MAM-1 and MAM-2), flanked a 276-
bp fragment; the inner primers (MAM-3 and
MAM-4) amplified a 237-bp long product. The
PCR amplifications were carried out in 50-ml
reaction mixtures containing 5-ml of 103 PCR
buffer (100 mM of Tris [pH 9.0], 500 mM of
KCl, 1 mg of bovine serum albumin per ml),
100 M of (each) deoxynucleoside triphosphate
(Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden), 15
pmol of each primer, 1 U of Taq DNA poly-
merase (Fermentas AB, Vilnius, Lithuania.), 6
ml of 25 mM MgCl2, and 5 ml of sample (max-

Kết quả (Việt) 1:

Sự và thuộc về nhượng chân hạchthu thập từ 66 red deer, 20 hoang deer, 56Roe deer, và 16 mouflon. Tất cả các mẫutừ động vật khỏe mạnh khác nhau, miễn phí đó làbị bắn bởi thợ săn chuyên nghiệp từ tháng chínđến tháng 12 2003 trong tất cả các quận của Hungary.Mẫu đã được đông lạnh ở 220 C cho 1-2 mo-Fore PCR thử nghiệm.Mẫu 34 cừu và 44 dê (bạch huyếtnút và lá lách) cũng được thu thập từđộng vật khỏe mạnh euthanized tại abat-toirs và từ động vật được gửi đi để chẩn đoánkiểm tra để các thú y chẩn đoán Insti-tute Budapest. Tất cả cừu và dê mẫu orig-inated từ miền bắc Hungary.Chuẩn bị mẫu, xả đá mô đãhomogenized trong cối và tiêu hóa với Pro -teinase-K (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, Mis-Souri, Mỹ) ở 50 C qua đêm. Mảnh vỡ tế bàosedimented bởi số (15.200 3 G cho1 phút). DNA là purified từ supernatant chúng tôi-ing một Miniprep nhận ma trận Kit (QbiogeneInc, Carlsbad, California, Mỹ) theo chỉ định củaCác nhà sản xuất.Để phát hiện BoHV-1 và BoHV-5, mộtDuplex lồng PCR với GC1, CR1 và CR26chất nền, mồi là sử dụng (Ros et al., 1999). Cho cácBoHV-4 và AlHV-1, một songlồng nhau PCR khảo nghiệm là sử dụng (Fa´bia´n và Egyed,Năm 2004). phát hiện BoHV-2, một cuốn tiểu thuyết lồng nhau PCRđược phát triển để khuyếch đại một chuỗi gly-coprotein H (gH) gen. Dãy gH làthu được từ các GenBank châu Âu Molec-ular ngân hàng dữ liệu sinh học phòng thí nghiệm (EMBL)(gia nhập số AF 375976), và làm theo -ing oligonucleotides đã được chọn là chất nền, mồi:MAM-1: 59-GTT TGA CGC TGG CTT AGTGG-39; MAM-2: 59-TAT CAG GAT TAC CCCGẤC CC-39; MAM-3: 59-TGA CGC TGG CTTAGT GGG TA-39, và MAM-4: 59-CGG thẻGTA THẺ ACG GTC GCT C-39. Bên ngoàilớp lót (MAM-1 và MAM-2), flanked một 276-BP mảnh; lớp lót bên trong (MAM-3 vàMAM-4) amplified một sản phẩm dài 237-bp. CácĐảng Cộng sản Romania amplifications đã được thực hiện trong 50 mlphản ứng hỗn hợp có chứa 5-ml của Đảng Cộng sản Romania 103bộ đệm (100 mM của Tris [pH 9.0], 500 mMKCl, 1 mg bò huyết thanh albumin mỗi ml),100 M (mỗi) triphosphate deoxynucleoside(Công nghệ sinh học Pharmacia, Uppsala, Thuỵ Điển), 15pmol của mỗi mồi, 1 U Taq DNA poly-merase (Fermentas AB, Vilnius, Lithuania.), 6ml của 25 mM MgCl2, và 5 ml mẫu (max-

Kết quả (Việt) 2:

Khí quản và bạch huyết khoeo các nút đã được
thu thập từ 66 hươu đỏ, hươu hoang 20, 56
trứng hươu, và 16 mou FL vào. Tất cả các mẫu đều
từ động vật thả rông khỏe mạnh đã được
chụp bởi thợ săn chuyên nghiệp từ tháng
đến tháng năm 2003 ở tất cả các quận của Hungary.
Các mẫu được đông lạnh ở 220 C trong 1-2 mo được-
thử nghiệm PCR mui.
Mẫu 34 con cừu và 44 con dê (bạch huyết
và các nút lá lách) cũng được thu thập từ các
động vật khỏe mạnh được cho chết tại abat-
toirs và từ động vật trình chẩn đoán
xét ​​nghiệm để chẩn đoán thú y các thể chế
tute Budapest. Tất cả cừu và dê mẫu tùy thu
inated từ phía Bắc Hungary.
Để chuẩn bị mẫu, mô rã đông được
đồng nhất trong cối và tiêu hóa với Pro-
teinase-K (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, mệnh
souri, Mỹ) lúc 50 C qua đêm. Các mảnh vỡ tế bào đã được
lắng lại bằng ly tâm (15.200 3 G cho
1 phút). DNA là puri fi ed từ bề tôi-
ing một Kit Miniprep tốc Matrix (Qbiogene
Inc., Carlsbad, California, USA) theo chỉ dẫn của
nhà sản xuất.
Đối với việc phát hiện BoHV-1 và BoHV-5, một
duplex lồng PCR với GC1, CR1 , và CR26
mồi đã được sử dụng (Ros et al., 1999). Đối với các
phát hiện của BoHV-4 và AlHV-1, một duplex
xét nghiệm PCR lồng nhau đã được sử dụng (Fa'bia'n và Egyed,
2004). Để phát hiện BoHV-2, một cuốn tiểu thuyết lồng PCR
được phát triển để khuếch đại một trình tự của các gly-
coprotein H (gH) gen. Trình tự gH được
lấy từ GenBank châu Âu Molec-
ular Biology Laboratory (EMBL) ngân hàng dữ liệu
(số lượng nhập 375.976 AF), và các follow-
ing oligonucleotide được lựa chọn như là sơn lót:
MAM-1: 59-GTT TGA CGC TGG CTT AGT
GG -39; MAM-2: 59-TAT CAG GAT TAC CCC
GAC CC-39; MAM-3: 59-TGA CGC TGG CTT
AGT GGG TA-39, và MAM-4: 59-CGG TAG
TAG GTA ACG GTC GCT C-39. Các bên ngoài
mồi (MAM-1 và MAM-2), fl anked một 276-
mảnh bp; mồi bên trong (MAM-3 và
MAM-4) ampli fi ed sản phẩm dài 237 bp. Các
PCR ampli fi cation đã được tiến hành trong 50 ml
hỗn hợp phản ứng có chứa 5 ml 103 PCR
đệm (100 mM Tris [pH 9,0], 500 mM
KCl, 1 mg albumin huyết thanh bò mỗi ml),
100 M (mỗi ) deoxynucleoside triphosphate
(Pharmacia Biotech, Uppsala, Thụy Điển), 15
pmol của mỗi mồi, 1 U của Taq ADN polymerase
merase (Fermentas AB, Vilnius, Lithuania.), 6
ml 25 mM MgCl2, và 5 ml mẫu (max -