Northern and Southern Blotting Faci

Northern and Southern Blotting Facilitate Hybridization with Electrophoretically Separated Nucleic Acid Molecules
In a complex mixture of nucleic acids, DNA probes are often used to detect only those molecules with sequences that are complementary to all or part of the probe. Gel electrophoresis can be used to fractionate the many different RNA or DNA molecules in a crude mixture according to their size before the hybridiza¬tion reaction is performed; if the probe binds to molecules of only one or a few sizes, one can be certain that the hybridization was indeed specific. Moreover, the size information obtained can be invaluable in itself. An example illustrates this point.
Suppose that one wishes to determine the nature of the defect in a mutant mouse that produces abnormally low amounts of albumin, a protein that liver cells normally secrete into the blood in large amounts. First, one collects identi¬cal samples of liver tissue from mutant and normal mice (the latter serving as controls) and disrupts the cells in a strong detergent to inactivate nucleases that might otherwise degrade the nucleic acids. Next, one separates the RNA and DNA from all of the other cell components: the proteins present are completely denatured and removed by repeated extractions with phenol—a potent organic solvent that is partly miscible with water; the nucleic acids, which remain in the aqueous phase, are then precipitated with alcohol to separate them from the small molecules of the cell. Then, one separates the DNA from the RNA by their different solubilities in alcohols and degrades any contaminating nucleic acid of the unwanted type by treatment with a highly specific enzyme—either an RNase or a DNase. The mRNAs are typically separated from bulk RNA by retention on a chromatography column that specifically binds the poly-A tails of mRNAs.

Kết quả (Việt) 1:

Bắc và Nam thấm tạo điều kiện cho lai với các phân tử axit Nucleic Electrophoretically tách raTrong một hỗn hợp phức tạp của các axit nucleic, đầu dò DNA thường được sử dụng để phát hiện chỉ là những phân tử với trình tự được bổ sung cho tất cả hay một phần của thăm dò. Gel electrophoresis có thể được sử dụng để fractionate là một phân tử DNA hoặc RNA khác nhau nhiều trong một hỗn hợp dầu thô theo kích thước của họ trước khi phản ứng hybridiza¬tion được thực hiện; Nếu việc thăm dò liên kết với các phân tử kích cỡ chỉ một hoặc một vài, một trong những có thể chắc chắn là lai ghép đã được thực sự cụ thể. Hơn nữa, những thông tin kích thước thu được có thể là vô giá trong chính nó. Một ví dụ minh họa điểm này.Giả sử rằng một mong muốn để xác định tính chất của các khiếm khuyết trong một con chuột đột biến tạo ra một lượng thấp bất thường albumin, một loại protein mà tế bào gan bình thường tiết vào máu với số lượng lớn. Đầu tiên, một trong những thu thập identi¬cal mẫu của các tế bào gan từ người đột biến và chuột bình thường (sau này phục vụ như điều khiển) và sẽ phá vỡ các tế bào trong một chất tẩy rửa mạnh để hủy kích hoạt nucleases mà nếu không có thể làm suy thoái các axit nucleic. Tiếp theo, một tách các RNA và DNA từ tất cả các thành phần tế bào khác: các protein hiện nay hoàn toàn là denatured và gỡ bỏ bằng cách lặp đi lặp lại nhổ với phenol — một dung môi hữu cơ mạnh là một phần như với các nước; Các axit nucleic, vẫn còn trong giai đoạn dịch nước, sau đó được kết tủa với rượu để tách chúng từ các phân tử nhỏ của tế bào. Sau đó, một tách các DNA từ RNA của họ solubilities khác nhau trong rượu và làm giảm bất kỳ axit nucleic contaminating của các loại không mong muốn bằng cách điều trị với một loại enzyme cao cụ thể — hoặc là một RNase hoặc một DNase. Các mRNAs thường được tách ra từ số lượng lớn RNA bằng lưu giữ trên một cột sắc ký đặc biệt gắn bó với đuôi poly-A của mRNAs.

Kết quả (Việt) 2:

Bắc và Nam Blotting Tạo thuận lợi Hybridization với Electrophoretically Ly Nucleic Acid phân tử
Trong một hỗn hợp phức tạp của các axit nucleic, đầu dò DNA thường được sử dụng để phát hiện chỉ có các phân tử với các cảnh quay đều bổ sung cho tất cả hoặc một phần của đầu dò. Gel điện có thể được sử dụng để phân đoạn nhiều phân tử RNA hoặc DNA khác nhau trong một hỗn hợp thô theo kích thước của chúng trước khi phản ứng hybridiza¬tion được thực hiện; nếu đầu dò gắn với các phân tử chỉ có một hoặc một vài kích thước, ai có thể chắc chắn rằng việc lai đã thực sự cụ thể. Hơn nữa, những thông tin kích thước thu được có thể là vô giá trong chính nó. Một ví dụ minh họa điểm này.
Giả sử rằng ta muốn xác định bản chất của sự khiếm khuyết trong một con chuột đột biến tạo ra một lượng thấp bất thường của albumin, một loại protein mà các tế bào gan bình thường tiết ra vào trong máu với số lượng lớn. Đầu tiên, một thu thập mẫu identi¬cal của mô gan từ con chuột đột biến và bình thường (chấp sau khi các điều khiển) và phá vỡ các tế bào trong một chất tẩy rửa mạnh để vô nucleases mà nếu không có thể làm suy giảm các axit nucleic. Tiếp theo, một tách RNA và DNA từ tất cả các thành phần tế bào khác: các protein hiện nay là hoàn toàn biến tính và loại bỏ bằng cách nhổ lặp đi lặp lại với phenol một dung môi hữu cơ mạnh đó là một phần có thể trộn với nước; các axit nucleic, mà vẫn còn trong giai đoạn dịch, sau đó kết tủa với rượu để tách chúng ra khỏi các phân tử nhỏ của tế bào. Sau đó, một tách DNA từ RNA bởi tính tan khác nhau của họ trong rượu và làm giảm bất kỳ axit nucleic ô nhiễm của các loại không mong muốn bằng cách xử lý với một enzyme hoặc rất cụ thể một RNase hoặc một DNase. Các mRNA thường được tách ra từ RNA số lượng lớn với giữ trên một cột sắc ký mà cụ thể gắn đuôi poly-A của mRNA.