paraformaldehyde and 0.3% glutarald

paraformaldehyde and 0.3% glutaraldehyde in 0.1 M
sodium phosphate buffer (pH 7.0).
Immunolabelling of kiwi PMEI
The prepared specimens were blocked using 3% non-fat
dry milk solution in PBS for 30 min at room temperature.
The MA (developed as described above) were diluted to a
final concentration of 700 lg/mL in PBS (although reliable
immunolabelling responses were also obtained up to a
concentration of 60 lg/mL) containing 1% non-fat dry
milk and added to the specimen for 2 h and 30 min at room
temperature. After washing the sections with PBS a secondary
antibody, rabbit-anti-mouse conjugated with fluorescein
isothiocyanate (FITC) (Nordic Immunological
Laboratories) was added in a 1:20 dilution in PBS with 3%
non-fat dry milk for 1 h and 15 min at room temperature.
After a last washing step with PBS, sections were mounted
in an antifade agent (citifluor, Agar Scientific, Stansted,
UK) and examined with an Olympus BX-41 microscope or
an Olympus Fluoview 1000 confocal microscope. The
experiment was five times repeated for at least three
specimen preparation repeats; representative images are
shown.
Results
Kiwi PMEI purification and characterisation
The proteinaceous inhibitor of PME (PMEI) was extracted
from the water-soluble fraction of kiwi fruit. Through
affinity chromatography kiwi PMEI could be separated
from other contaminating proteins. The elution profile after
affinity chromatography showed a single peak of proteins
which coincides with PMEI inhibitory capacity, as reported
by Jolie et al. (2009). SDS-PAGE analysis followed by
silver staining revealed the presence of a broad band
around 18.6 and a smaller, only slightly visible, band
around 16.5 kDa upon purification of PMEI (Fig. 1). An
extra purity check of the purified kiwi PMEI was performed
by MALDI-TOF-MS, showing a rather broad peak

Kết quả (Việt) 1:

paraformaldehyde và 0,3% glutaraldehyde 0.1 mnatri phosphat đệm (pH 7,0).Immunolabelling của kiwi PMEICác mẫu vật chuẩn bị đã bị chặn bằng cách sử dụng 3% mỡsữa bột các giải pháp trong PBS trong 30 phút ở nhiệt độ phòng.MA (phát triển như mô tả ở trên) được pha loãng với mộtcuối cùng nồng độ 700 lg/mL ở PBS (mặc dù đáng tin cậyphản ứng immunolabelling cũng đã được lên đến mộtnồng độ của lg 60/mL) có chứa 1% mỡ Giặtsữa và thêm vào các mẫu vật trong 2 h 30 phút tại Phòngnhiệt độ. Sau khi rửa các bộ phận với PBS một phụkháng thể anti-thỏ con chuột kết với fluoresceinisothiocyanate (FITC) (Nordic miễn dịchPhòng thí nghiệm) đã được thêm vào 1:20 pha loãng trong PBS với 3%mỡ sữa cho 1 giờ 15 phút ở nhiệt độ phòng.Sau khi một bước rửa qua với PBS, phần được lắptại một đại lý antifade (citifluor, khoa học Agar, Stansted,Vương Quốc Anh) và kiểm tra với một kính hiển vi Olympus BX-41 hoặcmột kính hiển vi confocal Olympus Fluoview 1000. Cácthử nghiệm đã được năm lần lặp đi lặp lại cho ít nhất bachuẩn bị mẫu lặp đi lặp lại; hình ảnh đại diệnHiển thị.Kết quảKiwi PMEI làm sạch và characterisationChất ức chế proteinaceous của PME (PMEI) được chiết xuấttừ phần hòa tan trong nước của kiwi trái cây. Thông quamối quan hệ sắc ký kiwi PMEI có thể được tách ratừ các protein khác contaminating. Hồ sơ elution sausắc ký ái lực cho thấy đơn vị proteinmà trùng với khả năng ức chế PMEI, theo báo cáobởi Jolie et al. (2009). Dùng mũi SDS-TRANG phân tích tiếp theonhuộm bạc tiết lộ sự hiện diện của một ban nhạc rộngQuanh 18.6 và một ban nhạc nhỏ hơn, chỉ một chút có thể nhìn thấy,khoảng 16,5 kDa khi thanh lọc của PMEI (hình 1). Mộtkiểm tra thêm độ tinh khiết của kiwi tinh khiết PMEI được thực hiệnbởi MALDI-TOF-MS, Đang hiển thị một đỉnh cao khá rộng

Kết quả (Việt) 2:

paraformaldehyde và 0,3% trong glutaraldehyde 0,1 M
đệm sodium phosphate (pH 7.0).
Immunolabelling kiwi PMEI
Các mẫu vật chuẩn bị đã bị chặn bằng 3% mỡ
giải pháp sữa khô trong PBS trong 30 phút ở nhiệt độ phòng.
MA (được phát triển như mô tả ở trên ) được pha loãng đến
nồng độ cuối cùng của 700 lg / mL trong PBS (mặc dù đáng tin cậy
đáp ứng immunolabelling cũng đã thu được lên đến một
nồng độ 60 lg / mL) có chứa 1% không chất béo
sữa và thêm vào các mẫu trong 2 giờ và 30 phút ở phòng
nhiệt độ. Sau khi rửa các phần bằng PBS một thứ
kháng thể, thỏ chống chuột liên hợp với fluorescein
isothiocyanate (FITC) (Bắc Âu miễn dịch
phòng thí nghiệm) đã được thêm vào trong một pha loãng 1:20 trong PBS với 3%
sữa không chất béo trong 1 giờ và 15 phút ở nhiệt độ phòng.
Sau một bước rửa qua với PBS, phần được gắn
trong một đại lý antifade (citifluor, Agar khoa học, Stansted,
Anh) và kiểm tra với một Olympus BX-41 kính hiển vi hoặc
kính hiển vi đồng tiêu Olympus Fluoview 1000. Các
thí nghiệm được năm lần lặp đi lặp lại ít nhất ba
lần lặp lại chuẩn bị mẫu; hình ảnh đại diện được
hiển thị.
Kết quả
Kiwi PMEI lọc và đặc
Các chất ức chế proteinaceous của PME (PMEI) được chiết xuất
từ phần tan trong nước của trái kiwi. Thông qua
kiwi sắc ký ái lực PMEI có thể được tách ra
từ các protein gây ô nhiễm khác. Các hồ sơ rửa giải sau khi
sắc ký ái lực cho thấy một đỉnh cao duy nhất của protein
mà trùng với PMEI khả năng ức chế, theo báo cáo
của Jolie et al. (2009). Phân tích SDS-PAGE sau đó
nhuộm màu bạc cho thấy sự hiện diện của một băng rộng
khoảng 18,6 và một nhỏ hơn, chỉ hơi có thể nhìn thấy, ban nhạc
khoảng 16,5 kDa khi thanh lọc PMEI (Hình. 1). Một
kiểm tra độ tinh khiết bổ sung của tinh khiết kiwi PMEI được thực hiện
bởi MALDI-TOF-MS, cho thấy một đỉnh khá rộng