We have constructed cloning vectors

We have constructed cloning vectors for the conjugal transfer of DNA from Escherichia coli to Streptomyces spp. All vectors contain the 760-bp oriT fragment from the IncP plasmid, RK2. Transfer functions need to be supplied in trans by the E. coli donor strain. We have incorporated into these vectors selectable antibiotic-resistance markers (AmR, ThR, SpR) that function in Streptomyces spp. and other features that should allow for: (i) integration via homologous recombination between cloned DNA and the Streptomyces spp. chromosome, (ii) autonomous replication, or (iii) site-specific integration at the bacteriophage φC31 attachment site. Shuttle cosmids for constructing genomic libraries and bacteriophage P1 cloning vector capable of accepting approx. 100-kb fragments are also described. A simple mating procedure has been developed for the conjugal transfer of these vectors from E. coli to Streptomyces spp. that involves plating of the donor strain and either germinated spores or mycelial fragments of the recipient strain. We have shown that several of these vectors can be introduced into Streptomyces fradiae, a strain that is notoriously difficult to transform by PEG-mediated protoplast transformation.

Kết quả (Việt) 1:

Chúng tôi đã xây dựng nhân bản vector chuyển conjugal DNA từ Escherichia coli để Streptomyces spp. Tất cả vectơ chứa 760-bp mảnh oriT từ IncP plasmid, RK2. Chuyển giao chức năng cần phải được cung cấp ở trans bởi sự căng thẳng tài trợ E. coli. Chúng tôi đã hợp nhất vào các vectơ lựa chọn kháng sinh-kháng dấu (AmR, ThR, SpR) chức năng đó trong Streptomyces spp. và các tính năng khác nên cho phép: (i) tích hợp thông qua gen tương đồng giữa nhân bản DNA và Streptomyces nhiễm sắc thể spp., (ii) tự trị nhân rộng, hoặc (iii) trang hội nhập tại địa điểm tập tin đính kèm bacteriophage φC31. Đưa đón cosmids để xây dựng thư viện gen và bacteriophage P1 nhân bản véc tơ có khả năng chấp nhận có cự ly khoảng 100-kb mảnh vỡ cũng được mô tả. Một thủ tục giao phối đơn giản đã được phát triển cho việc chuyển giao conjugal của các vector từ E. coli để Streptomyces spp. có liên quan đến mạ của nhà tài trợ căng thẳng và hoặc nảy mầm bào tử hoặc các mảnh vỡ mycelial của căng thẳng cho người nhận. Chúng tôi đã chỉ ra rằng một số của các vector có thể được giới thiệu vào Streptomyces fradiae, một chủng là nổi tiếng là khó khăn để biến đổi bởi PEG trung gian protoplast chuyển đổi.

Kết quả (Việt) 2:

Chúng tôi đã xây dựng các vector cloning cho việc chuyển giao hệ vợ chồng của DNA từ Escherichia coli để Streptomyces spp. Tất cả các vectơ chứa oriT mảnh 760-bp từ plasmid IncP, RK2. Chuyển chức năng cần phải được cung cấp trans do E. coli chủng của nhà tài trợ. Chúng tôi đã kết hợp vào các vectơ cột mốc kháng sinh kháng thể lựa chọn (AMR, THR, SPR) mà chức năng trong Streptomyces spp. và các tính năng khác mà nên cho phép: (i) tích hợp thông qua tái tổ hợp tương đồng giữa DNA nhân bản và spp Streptomyces. nhiễm sắc thể, (ii) nhân rộng tự trị, hoặc (iii) tích hợp trang web cụ thể tại vị trí gắn φC31 khuẩn. Shuttle cosmids để xây dựng thư viện gen và bacteriophage P1 vectơ tách dòng có khả năng chấp nhận approx. Mảnh 100-kb cũng được mô tả. Một thủ tục giao phối đơn giản đã được phát triển cho việc chuyển giao hệ vợ chồng của các vectơ từ E. coli để Streptomyces spp. có liên quan đến mạ của sự căng thẳng và các nhà tài trợ hoặc bào tử nảy mầm hoặc các mảnh sợi nấm của chủng người nhận. Chúng tôi đã chỉ ra rằng một số các vectơ có thể được giới thiệu vào Streptomyces fradiae, một chủng là rất khó khăn để biến đổi bằng cách chuyển đổi kiểu mẫu đầu tiên PEG-qua trung gian.