4. Materials and methods4.1. Sample

4. Materials and methods
4.1. Sample collection and DNA extraction
The A. vera plants were collected from Sungai Buloh horticulture nursery area (3.235283 N, 101.568342 E), Selangor. For a relatively wide coverage, five different plants were dug at different points in the same location, neatly transferred into sterile biosafety bag and brought to Laboratory for immediate analyses. Each plant was washed under running tap water to remove soil particles and allowed to drain. The leaves, stems and roots were detached with sterile knife and washed with sterile distilled water plus a few drops of Tween-20 and left for 10–15 min to drain. These were then cut into 4–5 pieces (2–3 cm in size). Surface sterilization was performed according to the methods described by Azevedo et al. [30] with modifications to the duration for sterilization and ethanol concentrations. Briefly, tissues were immersed separately in 90% ethanol (5 min), followed by sodium hypochlorite (3%) solution (2 min), and into 75% ethanol (3 min). The disinfected leaves, stems and roots were rinsed three times in sterile distilled water and drained in laminar flow hood. To validate the effectiveness of the surface sterilization procedure, the surface-sterilized tissues (control) and the last rinsing water were inoculated onto nutrient agar plates and any bacteria growth in the control agar plates within 24 h of incubation (30 °C ± 2 °C) indicates ineffective surface-sterilization and samples discarded. After surface sterilization, the tissues were gently homogenized separately with sterile 12.5 mM potassium phosphate buffer (pH 7.1) using sterile test-tube and glass rod to release the microbes in the tissues. The resulting homogenates were centrifuge at 8000 ×g for 3 min and the supernatants were collect-ed separately in triplicate per tissue. Bacteria genomic DNA was extract-ed from the supernatants using GF-1 bacterial DNA extraction kit by Vivantis. The extracted genomic DNA was quantified and checked for purity at A260/280 nm (1.9–2.0) (Nanodrop, Thermo Fisher Scientific, U.S.A.) and stored at −20 °C.

Kết quả (Việt) 1:

4. vật liệu và phương pháp4.1. Lấy mẫu bộ sưu tập và khai thác DNAThe A. vera plants were collected from Sungai Buloh horticulture nursery area (3.235283 N, 101.568342 E), Selangor. For a relatively wide coverage, five different plants were dug at different points in the same location, neatly transferred into sterile biosafety bag and brought to Laboratory for immediate analyses. Each plant was washed under running tap water to remove soil particles and allowed to drain. The leaves, stems and roots were detached with sterile knife and washed with sterile distilled water plus a few drops of Tween-20 and left for 10–15 min to drain. These were then cut into 4–5 pieces (2–3 cm in size). Surface sterilization was performed according to the methods described by Azevedo et al. [30] with modifications to the duration for sterilization and ethanol concentrations. Briefly, tissues were immersed separately in 90% ethanol (5 min), followed by sodium hypochlorite (3%) solution (2 min), and into 75% ethanol (3 min). The disinfected leaves, stems and roots were rinsed three times in sterile distilled water and drained in laminar flow hood. To validate the effectiveness of the surface sterilization procedure, the surface-sterilized tissues (control) and the last rinsing water were inoculated onto nutrient agar plates and any bacteria growth in the control agar plates within 24 h of incubation (30 °C ± 2 °C) indicates ineffective surface-sterilization and samples discarded. After surface sterilization, the tissues were gently homogenized separately with sterile 12.5 mM potassium phosphate buffer (pH 7.1) using sterile test-tube and glass rod to release the microbes in the tissues. The resulting homogenates were centrifuge at 8000 ×g for 3 min and the supernatants were collect-ed separately in triplicate per tissue. Bacteria genomic DNA was extract-ed from the supernatants using GF-1 bacterial DNA extraction kit by Vivantis. The extracted genomic DNA was quantified and checked for purity at A260/280 nm (1.9–2.0) (Nanodrop, Thermo Fisher Scientific, U.S.A.) and stored at −20 °C.

Kết quả (Việt) 2:

4. Vật liệu và phương pháp
4.1. Thu thập mẫu DNA và khai thác
các nhà máy vera A. đã được thu thập từ khu vực vườn ươm Sungai Buloh (3.235283 N, 101.568342 E), Selangor. Đối với một phạm vi tương đối rộng, năm nhà máy khác nhau đã được đào tại các điểm khác nhau trong cùng một vị trí, gọn gàng chuyển vào túi an toàn sinh học vô trùng và đưa đến phòng thí nghiệm để phân tích ngay lập tức. Mỗi nhà máy đã được rửa sạch dưới vòi nước chảy để loại bỏ các hạt đất và cho phép để ráo nước. Các lá, thân và rễ được tách ra với con dao vô trùng và rửa sạch bằng nước cất vô trùng cộng với một vài giọt Tween-20 và để lại trong khoảng 10-15 phút để ráo nước. Những sau đó được cắt thành 4-5 miếng (2-3 cm trong kích thước). Khử trùng bề mặt được thực hiện theo các phương pháp được mô tả bởi Azevedo et al. [30] với những thay đổi với thời hạn đối với nồng độ khử trùng và ethanol. Tóm lại, mô được ngâm riêng trong 90% ethanol (5 phút), tiếp theo là sodium hypochlorite (3%), giải pháp (2 phút), và thành 75% ethanol (3 phút). Các lá khử trùng, thân và rễ được rửa ba lần trong nước cất vô trùng và để ráo nước trong mui xe chảy tầng. Để xác nhận tính hiệu quả của quy trình khử trùng bề mặt, các mô bề mặt tiệt trùng (điều khiển) và nước rửa cuối cùng được tiêm vào đĩa thạch dinh dưỡng và các vi khuẩn phát triển trong biển kiểm soát môi trường thạch trong vòng 24 giờ ủ (30 ° C ± 2 ° C) cho thấy không có hiệu quả bề mặt và khử trùng mẫu bị loại bỏ. Sau khi khử trùng bề mặt, các mô đã được nhẹ nhàng đồng nhất riêng với vô trùng 12.5 mM đệm kali phosphate (pH 7.1) sử dụng vô trùng trong ống nghiệm và thanh thuỷ tinh để phát hành các vi khuẩn trong các mô. Các homogenates kết quả là máy ly tâm ở 8000 xg trong 3 phút và nước nổi đã thu thập-ed riêng trong ba lần mỗi mô. Vi khuẩn DNA được chiết xuất-ed từ các nước nổi sử dụng GF-1 vi khuẩn kit tách chiết DNA bằng Vivantis. Các DNA chiết xuất được định lượng và kiểm tra độ tinh khiết tại A260 / 280 nm (1,9-2,0) (Nanodrop, Thermo Fisher Scientific, USA) và được lưu trữ ở -20 ° C.