1. Incubate overnight the donor str

1. Incubate overnight the donor strain ( H. elongata /pBBR1BETA), the recipient strain ( H. elongata Rf R ), and the helper strain 3.5. Expression of the Plasmid pBBR1BETA in E. coli 3.6. Expression of the b -Carotene Genes in H. elongata ATCC 33173 T
21312 Carotenoids’ Production from Halophilic Bacteria( E. coli /pRK600) in their respective medium and antibiotics: LB Km (50 μ g/mL), SW2 Rf (25 μ g/mL), and LB Cm (30 μ g/mL), respectively.
2. Mix the culture of bacteria in proportion 1:1:1.
3. Centrifuge for 1 min at 13,000 × g to precipitate the cells.
4. Wash twice with 500 μ L of SW2 medium to eliminate the rest of the antibiotics and resuspend in 150 μ L of SW2.
5. The mating mixture is taking place on the surface of a sterile 0.45- μ m pore-membrane fi lter onto a plate of SW2 medium.
6. Incubate at 37°C for 10–12 h.
7. Resuspend the cells of the fi lter in 1 mL of 20% (w/v) sterile glycerol and after appropriate dilutions, plate onto SW2 medium containing rifampicin (25 μ g/mL), to counterselect the donor strain, and kanamycin (50 μ g/mL), to select for H. elongata transconjugants carrying the plasmid pBBR1BETA (see Note 16).
8. Select one of the transconjugants of H. elongata . These colonies can be distinguished from the parental unconjugated strain by a subtle difference in the color. Colonies presumably containing β -carotene are deep orange-yellow in color.

Kết quả (Việt) 1:

1. ấp cho nở qua đêm căng nhà tài trợ (H. elongata /pBBR1BETA), căng thẳng cho người nhận (H. elongata Rf R), và căng thẳng helper 3.5. Biểu hiện của pBBR1BETA Plasmid trong E. coli 3.6. Biểu hiện của b-Carotene gien trong H. elongata ATCC 33173 T 21312 carotenoid sản xuất từ các vi khuẩn chuỗi (E. coli /pRK600) trong phương tiện truyền thông tương ứng và thuốc kháng sinh của họ: LB Km (50 μ g/mL), SW2 Rf (25 μ g/mL) và LB Cm (30 μ g/mL), tương ứng. 2. trộn các nền văn hóa của vi khuẩn ở tỷ lệ 1:1:1. 3. máy ly tâm cho 1 phút tại 13.000 × g kết tủa các tế bào. 4. rửa sạch hai lần với 500 μ L SW2 vừa để loại bỏ các phần còn lại của các loại thuốc kháng sinh và resuspend trong 150 μ L SW2. 5. hỗn hợp giao phối diễn ra trên bề mặt của một vô trùng 0,45-μ m lỗ chân lông-màng fi lter lên một tấm SW2 vừa. 6. ấp cho nở ở 37° C cho 10-12 h. 7. resuspend các tế bào của fi lter trong 1 mL 20% (w/v) vô trùng glycerol và sau khi thích hợp dilutions, tấm vào SW2 vừa chứa rifampicin (25 μ g/mL), để counterselect các nhà tài trợ căng thẳng, và kanamycin (50 μ g/mL), để chọn cho H. elongata transconjugants mang plasmid pBBR1BETA (xem lưu ý 16). 8. chọn một trong những transconjugants H. elongata. Các thuộc địa có thể phân biệt từ parental unconjugated căng bởi một sự khác biệt tinh tế màu sắc. Thuộc địa có lẽ là có chứa β-caroten là sâu màu cam-màu vàng.

Kết quả (Việt) 2:

1. Ủ qua đêm chủng các nhà tài trợ (H. elongata / pBBR1BETA), chủng người nhận (H. elongata Rf R), và sự căng thẳng 3,5 helper. Biểu hiện của plasmid pBBR1BETA trong E. coli 3.6. Biểu hiện của gen b -Carotene trong H. elongata ATCC 33.173 T
sản xuất 21.312 Carotenoid 'từ Vi khuẩn Halophilic (E. coli / pRK600) trong môi trường của họ tương ứng và kháng sinh: LB Km (50 μ g / mL), SW2 Rf (25 μ g / mL), và LB Cm (30 μ g / mL), tương ứng.
2. Trộn văn hóa của vi khuẩn theo tỷ lệ 1: 1: 1.
3. Máy ly tâm cho 1 phút ở 13.000 × g kết tủa các tế bào.
4. Rửa hai lần với 500 μ L của SW2 vừa để loại bỏ phần còn lại của thuốc kháng sinh và resuspend trong 150 μ L của SW2.
5. Hỗn hợp giao phối đang diễn ra trên bề mặt của một vô trùng 0.45- μ m lỗ màng fi lter lên một tấm của SW2 trung bình.
6. Ủ ở 37 ° C trong 10-12 h.
7. Resuspend các tế bào của lter fi trong 1 ml dung dịch 20% (w / v) glycerol vô trùng và sau khi pha loãng thích hợp, tấm lên SW2 môi trường có chứa rifampicin (25 μ g / mL), để counterselect chủng các nhà tài trợ, và kanamycin (50 μ g / mL), để chọn cho transconjugants H. elongata mang plasmid pBBR1BETA (xem chú 16).
8. Chọn một trong những transconjugants H. elongata. Những đàn có thể được phân biệt chủng unconjugated của cha mẹ bằng một sự khác biệt tinh tế trong màu sắc. Thuộc địa có lẽ chứa -carotene β là màu cam-màu vàng.