We assessed the specificity of the

We assessed the specificity of the de- scribed RT-PCR by several methods. CBPV primers were compared to the refer- ence honey bee virus sequences available in the GenBank database using the ALIGN program (FASTA program version 2.0,
Pearson & University of Virginia, USA). The first seven PCR products ob- tained and two PCR products from hive without clinical symptoms were sequenced (Qiagen, Hilden, Germany). The nucleo- tide and deduced amino acid sequences were submitted to the GenBank database under accession numbers [AF461053] to [AF461061] (http: //www.ncbi.nlm.nih.gov/ Genbank/index.html). They were aligned and compared to the reference CBPV strain [AF375659] and to the honey bee virus se- quences available in the GenBank database using the ALIGN program (Myers and Miller, 1988; Huang and Miller, 1991) and verified by visual inspection. In the absence of clinical symptoms, detection was vali- dated in ten field samples by Southern blot- ting (Sambrook et al., 1989). PCR product of 455 pb from our reference CBPV strain was used as probe at the concentration of 10 ng/ml in hybridization buffer. Hybrid- ization was carried out at 55 oC overnight in an hybridization oven (Stuart Scientific, Surrey, UK). Labelling and detection were performed with the “AlkPhos direct label- ling and detection” and the “CDP star de- tection reagent” (gene image™, Amersham pharmacia biotech, Slough, UK). To determine its sensitivity, the RT-PCR test



was applied to 10-fold serial dilutions of several samples of 10 experimentally-in- fected bees. This experiment was repeated two other times on new bee extracts.


Comparison of diagnostic tests

Using clinical observation and experi- mental infection we selected two asymp- tomatic and one symptomatic hives. Performance characteristics of the three tests (experimental infection, AGID and RT-PCR) were compared in samples before and after experimental infection. Charac- teristic samples were selected for AGID and RT-PCR tests 13 days after experimen- tal inoculation.

Kết quả (Việt) 2:

Chúng tôi đánh giá các đặc trưng của de- tả RT-PCR bằng nhiều phương pháp. CBPV mồi được so sánh với các refer- khoa mật ong rút ong trình tự có sẵn trong cơ sở dữ liệu GenBank sử dụng chương trình ALIGN (chương trình FASTA phiên bản 2.0,
Pearson & Đại học Virginia, Hoa Kỳ). Bảy sản phẩm PCR lần đầu tiên quan sát trì và hai sản phẩm PCR từ tổ không có triệu chứng lâm sàng đã được lập trình tự (Qiagen, Hilden, Đức). Các triều nucleotide và trình tự axit amin suy luận đã được trình lên cơ sở dữ liệu GenBank dưới con số nhập [AF461053] để [AF461061] (http: //www.ncbi.nlm.nih.gov/ GenBank / index.html). Họ đã liên kết và so sánh với các tài liệu tham khảo CBPV chủng [AF375659] và virus ong mật ong hậu se- có sẵn trong cơ sở dữ liệu GenBank sử dụng chương trình ALIGN (Myers và Miller, 1988; Huang và Miller, 1991) và được xác nhận qua sự kiểm tra trực quan. Trong trường hợp không có triệu chứng lâm sàng, phát hiện được vali- ngày trong mười mẫu ruộng do Southern blot- ting (Sambrook et al., 1989). Sản phẩm PCR của 455 pb từ tài liệu tham khảo CBPV căng thẳng của chúng tôi đã được sử dụng như thăm dò ở nồng độ 10 ng / ml trong lai đệm. Hóa Hybrid- được tiến hành ở 55 oC qua đêm trong lò lai (Stuart khoa học, Surrey, Anh). Dán nhãn và phát hiện được thực hiện với "AlkPhos label- trực tiếp ling và phát hiện" và "ngôi sao CDP triển sự bảo thuốc thử" (gene ảnh ™, Amersham Pharmacia công nghệ sinh học, Slough, Vương quốc Anh). Để xác định độ nhạy của nó, các xét nghiệm RT-PCR được áp dụng cho 10 lần pha loãng nối tiếp của một số mẫu của 10 con ong dịch sàng thực nghiệm-tư. Thí nghiệm này được lặp đi lặp lại hai lần khác vào chất chiết xuất từ ong mới. So sánh các xét nghiệm chẩn đoán dùng quan sát lâm sàng và bệnh tâm thần nghiệm chúng tôi chọn hai Tomatic asymp- và một phát ban có triệu chứng. Đặc điểm hoạt động của ba bài kiểm tra (nhiễm thực nghiệm, AGID và RT-PCR) được so sánh trong các mẫu trước và sau khi gây nhiễm thực nghiệm. Mẫu teristic charac đã được lựa chọn cho AGID và RT-PCR kiểm tra 13 ngày sau khi thực nghiệm tiêm tal.