Identification and characterization

Identification and characterization of clones that encode
peanut allergen Ara h L To help identify which of the many
IgE positive clones encoded the Ara h I allergen, a hybridization
probe was constructed using an oligonucleotide developed from
Ara h I amino acid sequence and PCR technology. The oligonucleotide
sequence GA(TC)AA(AG)GA(TC)AA(TC)GTNAT(
TCA)GA(TC)CA was derived from amino acid residues
located within peptide I (Table I) of the Ara h I peanut allergen.
Utilizing this oligonucleotide as one primer and a 27-nucleotide oligo dT stretch as the second primer a portion of the mRNA
sequence that encodes this protein was amplified from peanut
cDNA. This 400-bp DNA fragment was subsequently cloned
and sequenced by the Sanger dideoxy (18) method. DNA sequence
analysis revealed that the 400-bp DNA fragment contained
a poly A stretch on one end and the Ara h I specific
nucleotide sequence on the other end. In addition, this clone
contained nucleotide sequence correctly encoding the remaining
carboxy terminal portion of peptide I. Thus, an Ara h I specific
clone has been isolated and it can be used as a hybridization
probe to identify which of the many IgE positive clones selected
encodes the Ara h I allergen.

Kết quả (Việt) 1:

Xác định và đặc tính của dòng vô tính mã hóachất gây dị ứng đậu phộng Ara h L để giúp xác định mà nhiều ngườiIgE tích cực nhái mã hóa Ara h tôi chất gây dị ứng, một lai ghépthăm dò được xây dựng bằng cách sử dụng một oligonucleotide phát triển từAra h tôi trình tự axit amin và công nghệ Đảng Cộng sản Romania. Oligonucleotidetrình tự GA (TC) AA (AG) GA (TC) AA (TC) GTNAT)TCA) GA (TC) CA bắt nguồn từ dư lượng axit aminnằm trong peptide tôi (bàn tôi) Ara h tôi chất gây dị ứng đậu phộng.Sử dụng này oligonucleotide như một mồi và một oligo 27-nucleotide dT kéo dài như mồi thứ hai một phần của mRNAtrình tự mã hóa protein này được khuyếch đại từ đậu phộngcDNA. Mảnh DNA 400-bp này sau đó đã được nhân bảnvà nói theo phương pháp dideoxy (18) Sanger. Trình tự ADNphân tích cho thấy rằng mảnh DNA 400-bp chứamột poly A căng ra trên một đầu và Ara h tôi cụ thểdãy nucleotide trên đầu kia. Ngoài ra, bản sao nàytrình tự nucleotide chứa chính xác mã hóa còn lạicarboxy thiết bị đầu cuối phần của peptide tôi. Vì vậy, một Ara h tôi cụ thểbản sao đã bị cô lập và nó có thể được sử dụng như một lai ghépthăm dò để xác định đó của nhiều IgE tích cực bắt chước đã chọnmã hóa Ara h tôi chất gây dị ứng.

Kết quả (Việt) 2:

Xác định và mô tả đặc điểm của các dòng mã hoá
chất gây dị ứng đậu phộng Ara h L Để giúp xác định trong nhiều
IgE nhái dương mã hóa các h Ara tôi gây dị ứng, lai ghép
đầu dò được xây dựng bằng cách sử dụng một oligonucleotide phát triển từ
Ara h tôi amin chuỗi acid và công nghệ PCR. Các oligonucleotide
chuỗi GA (TC) AA (AG) GA (TC) AA (TC) GTNAT (
TCA) GA (TC) CA bắt nguồn từ amino acid
nằm trong peptide I (Bảng I) của h Ara Tôi đậu phộng chất gây dị ứng.
Bằng cách sử dụng oligonucleotide này như một lớp sơn lót và một 27-nucleotide oligo dT căng như mồi thứ hai một phần của mRNA
chuỗi mã hóa protein này được khuếch đại từ đậu phộng
cDNA. Đoạn DNA 400 bp này sau đó đã được nhân bản vô tính
và trình tự gen bởi dideoxy Sanger (18) phương pháp. Trình tự DNA
phân tích cho thấy các mảnh DNA 400 bp chứa
một poly A căng trên một đầu và Ara h tôi cụ thể
trình tự nucleotide ở đầu bên kia. Ngoài ra, clone này
chứa trình tự nucleotide một cách chính xác mã hóa, còn lại
phần carboxy thiết bị đầu cuối của peptide I. Như vậy, một h Ara tôi cụ thể
nhân bản đã được phân lập và nó có thể được sử dụng như một lai
thăm dò để xác định đó của IgE nhiều dòng vô tính tích cực lựa chọn
mã hóa các h Ara Tôi dị ứng nguyên.