Khảo nghiệm Antiproliferative. Các tế bào được cấy trong 96 giếng tấm phẳng đáy tại 5000-10 000 tế bào / giếng. Sự khác biệt về số lượng tế bào mạ điều chỉnh cho sự khác biệt về tốc độ tăng trưởng của các dòng tế bào khác nhau. Các tế bào được cho phép để tuân thủ các giếng qua đêm, sau đó các thảo dược
chiết xuất đã được thêm vào xấp ba giếng trong nối tiếp pha loãng gấp 3 lần. Nước được thêm vào các giếng kiểm soát ở độ pha loãng 1:10 trong môi trường. Những tấm được ủ ở 37 ° C, 5% CO2 trong 3 ngày, sau đó khảo nghiệm fro ức chế sự tăng trưởng bằng cách sử dụng một sulforhodamine B (SRB) khảo nghiệm (Skehan et al., 1990). Các tế bào được cố định bằng cách cho thêm lạnh 50% axit tricloaxetic đến nồng độ cuối cùng 10%. Sau một ủ trong 1 giờ ở nhiệt độ 4 ° C, các tế bào được rửa năm lần với nước cất. Các tế bào này sau đó được nhuộm bằng 0,4% SRB (Sigma) hòa tan trong 1% acid acetic trong 15-30 phút và sau đó rửa năm lần với 1% axit acetic để loại bỏ vết bẩn chưa cam kết.
Sau khi các tấm đã sấy khô không khí ở nhiệt độ phòng, các ràng buộc thuốc nhuộm được hòa tan với 10 mm cơ sở Tris và các tấm được phân tích trên một đầu đọc microplate (Molecular Devices) tại 595 nm. Sự ức chế sự tăng trưởng phần trăm được tính như sau: (ave OD giếng kiểm soát - giếng chiết xuất thảo dược OD ave..) / (Ave giếng kiểm soát OD).
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
thô Twelve chiết xuất thảo dược dung dịch nước đã được sàng lọc đối với một bảng điều khiển của con người và các dòng tế bào ung thư ở chuột đại diện cho các loại mô học khác nhau (vú, phổi, tuyến tụy và tuyến tiền liệt). Những loại thảo mộc (Bảng 1) được lựa chọn dựa trên các nghiên cứu trước đây của chúng tôi chứng minh
hoạt động kháng sinh của họ chống lại một bảng điều khiển của các dòng tế bào ung thư vú (Campbell et al., 2002). Như thể hiện trong Bảng 2, các chất chiết xuất từ dung dịch nước thô trưng bày hoạt động ức chế sự tăng trưởng chống lại một loạt các chất chiết xuất lines.The tế bào ung thư ban đầu đã được thử nghiệm cho ức chế sự tăng trưởng
hoạt động ở độ pha loãng 1:10. Đường cong đáp ứng đủ liều sau đó thu được những chất chiết xuất từ đó chứng minh hơn 50% ức chế trong màn hình ban đầu. Giá trị IC50 đã được xác định từ những đường cong liều phản ứng.
So sánh độ nhạy của các dòng tế bào khác nhau để các chất chiết xuất, các dòng tế bào chuột (LLC, Panc02 và MCNeuA) được ghi nhận là nhạy hơn các dòng tế bào của con người (A549, Panc-1 , LNCaP, PC-3 và MCF-7). Chỉ kiểm tra các dòng tế bào của con người, hai loại thảo mộc (G. sinensis và S. Barbata) cho thấy một số mức độ chuyên biệt cho các dòng tế bào ung thư vú (MCF-7). Các
giá trị IC50 cho G. sinensis trên MCF-7 là 486 mg / mL. Ngược lại, giá trị IC50 đã không đạt được trên các dòng tế bào khác. Tương tự như vậy, giá trị IC50 cho S. Barbata trên MCF-7 là 818 mg / ml, trong khi giá trị IC50 trên dòng tế bào ung thư của người khác đều là> 1000 mg / mL.
Eleven của các chiết xuất thảo mộc dịch nước cũng đã được thử nghiệm chống lại văn hóa bình thường tế bào người vú biểu mô (huMEC). Như thể hiện trong Bảng 2, chín trong số các chất chiết xuất thất bại trong việc đạt được một giá trị IC50 trên huMEC, chỉ ra rằng các loại thảo mộc khá thụ động trên các tế bào bình thường. Một trong những loại thảo mộc (A. argyi) đã chứng minh hoạt tính chống huMEC có một giá trị IC50 của 669 mg / mL
mà là lớn hơn 2-7 lần so với giá trị IC50 thu được với các dòng tế bào ung thư, một lần nữa cho thấy một số đặc trưng cho các tế bào ung thư so với các tế bào bình thường. Ngược lại, V. segetalis đã hoạt động tích cực trên huMEC bình thường như nó đã được trên một số dòng tế bào ung thư.
đang được dịch, vui lòng đợi..