Sperm collection and preparationSpe

Sperm collection and preparation
Sperm samples were collected by masturbation. Samples were analysed
following WHO indications (WHO, 1999) for total sperm
number, concentration, motility and morphology and were prepared
using a discontinuous PureSperm gradient (Nidacon, Gothemberg,
Sweden). Briefly, sperm was layered upon a 40:80% PureSperm density
gradient, processed by centrifuge at 600 × g for 15 min and resuspended
in 1 ml of sperm culture medium (PureSperm wash, Nidacon,
Gothemberg, Sweden). After density gradient separation, a second
evaluation of concentration, motility and morphology was performed.
Ovarian stimulation, IVF, ICSI and embryo development
Ovarian stimulation was achieved by recombinant FSH (Gonal F,
Serono, Rome, Italy; Puregon, Organon, Rome, Italy) and monitored
by endovaginal echography and plasma estradiol. Thirty-six hours
before oocyte retrieval, 10 000 IU of hCG (Gonasi, Amsa, Rome,
Italy) was administered. Oocyte retrieval was carried out under general
anaesthesia by a vaginal ultrasonography-guided aspiration. At
16–18 h after insemination or microinjection, as previously described
(Borini et al., 2004a,b), oocytes were assessed for two PN presence.
Forty-eight hours after oocyte retrieval, embryos were classified
according to morphology and then transferred into the uterus. Clinical
pregnancy was determined by ultrasound detection of gestational
sac and biochemical pregnancy by the presence of only one positive
β-hCG measurement.
DNA fragmentation analysis
Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate
(dUTP) in situ DNA nick end labelling (TUNEL) assay
was performed on sperm suspension after density gradient separation
as previously described by Benchaib et al. (2003). Briefly, part of the
sperm sample was used for oocyte insemination, whereas the other
part of semen suspension was washed in phosphate-buffered saline
(PBS) (Sigma-Aldrich, Milan, Italy), smeared onto microscope slides,
fixed in 4% paraformaldehyde (Sigma-Aldrich) in PBS for 30 min at
4°C and permeabilized with 0.1% Triton X-100 in 0.1% sodium citrate
(Sigma-Aldrich). Strand breaks in DNA were detected by
TUNEL using a commercially available kit (In situ Cell Death Detection
Kit, Fluorescein, Roche, Monza, Italy) according to the manufacturer’s
instructions. A negative control was performed for each
sample by using fluorescein isothiocyanate (FITC)-labelled dUTP
without enzyme. The percentage of spermatozoa with fragmented
DNA was determined by direct observation of 500 spermatozoa per
sample with an epifluorescence microscope (NIKON eclipse 80i,
Florence, Italy).
IVF patients were divided in two groups: group A (n = 69), low
TUNEL patients (TUNEL positivity 10%). Sixty-nine of the 82 males undergoing IVF were
TUNEL negative (group A) and 13 were TUNEL positive
(group B). Twenty of the 50 ICSI males were TUNEL negative
(group C) and 30 were TUNEL positive (group D). Both age
and BMI of women of group A and B were not statistically different
(age: 37.5 ± 3.75 and 35.61 ± 3.42 years, respectively,
P = 0.095; BMI: 22.35 ± 3.21 and 23.17 ± 3.64 kg/m2
, respectively,
P = 0.411); also age and BMI of women in group C and
D were not statistically different (age: 36.95 ± 4.91 and 36.72 ±
4.92 years, respectively, P = 0.872; BMI: 21.43 ± 2.64 and
21.76 ± 3.12 kg/m2
, respectively, P = 0.699). There was no
statistical difference in the number of couples who underwent
previous ART treatment between groups A and B and between
by guest on June 4, 2013 http://humrep.oxfordjournals.org/ Downloaded from
A.Borini et al.
2878
groups C and D (P = 0.356 and P = 1.000, respectively), (Table I).
Moreover, there was not a statistical difference between groups
A and B and between groups C and D as regards the mean values
of sperm parameters (mean values and P-values in Table I).
DNA fragmentation and sperm characteristics
Table II summarizes the results of correlation analysis between
DNA fragmentation and sperm parameters. Highly significant
negative correlations (P < 0.01) were observed between sperm
DNA fragmentation and all sperm parameters (total number,
concentration, motility and morphology), before and after
discontinuous gradient centrifugation.
DNA fragmentation and ART outcome
Fertilization rate
A correlation analysis was carried out to determine the relationship
between fertilization rate and sperm DNA fragmentation
in both ICSI and IVF treatments. The fertilization rate
does not appear to have been affected by sperm DNA fragmentation
in ICSI (r = –0.159; P = 0.271), whereas in IVF there
was a slight negative correlation between the two parameters
(r = –0.219; P = 0.049).
Clinical pregnancy and pregnancy loss
We evaluated the possible relationship between sperm TUNEL
positivity (threshold = 10%) and clinical pregnancy and pregnancy
loss in both IVF and ICSI groups (Table I).
As regards the IVF group, clinical pregnancy rates were not
statistically significantly different in group A and group B (A
versus B = 23.2 versus 15.4%; P = 0.723); pregnancy loss rates
were also not statistically significantly different in group A and
group B (A versus B = 15.8 versus 50%; P = 0.194).
In the ICSI group, a highly significant difference was found
between group C and group D as regards clinical pregnancy
rates (C versus D = 45 versus 10%; P = 0.007). There was also
a highly significant difference in pregnancy loss between groups
C and D, with no biochemical pregnancies or miscarriages
found in group C (C versus D = 0 versus 62.5%; P = 0.009).
We also tested the possible relationship between DNA fragmentation
and clinical pregnancy and pregnancy loss using a
20% threshold, as suggested by other authors (Seli et al.,
2004). The results did not significantly change: (i) in the ICSI
group, clinical pregnancy and pregnancy loss rates were statistically
significantly different in patients with high and low
sperm DNA fragmentation (P = 0.04 and P = 0.02, respectively)
and (ii) in IVF group, clinical pregnancy and pregnancy
loss rates were not statistically different in the two group of
patients (P = 1.000).
Sperm parameters and ART outcome
Clinical pregnancy and pregnancy loss
We evaluated the relationship between sperm parameters (concentration,
motility and morphology), measured on semen
before discontinuous gradient centrifugation, and clinical pregnancy
and pregnancy loss in both IVF and ICSI groups. In particular,
we used WHO threshold levels for normal
concentration (≥20 × 106
/ml), motility (progressive motility
≥50%) and morphology (normal forms ≥30%). In both IVF and
ICSI groups, there was no statistically significant difference in
pregnancy rates between patients with normal or abnormal
concentration, motility and morphology. These sperm parameters
did not even appear to affect the onset of pregnancy loss:
no significant difference in pregnancy loss rates was found
between patients with normal or abnormal concentration,
motility and morphology (Table III).
Table I. Relationship between TUNEL positivity (low TUNEL

Kết quả (Việt) 1:

Tinh trùng bộ sưu tập và chuẩn bịTinh trùng mẫu đã được thủ dâm. Mẫu được phân tíchtheo chỉ dẫn WHO (WHO, 1999) cho tất cả tinh trùngsố, tập trung, motility và hình thái học và được chuẩn bị sẵn sàngbằng cách sử dụng một gradient PureSperm gián đoạn (Nidacon, Gothemberg,Thụy Điển). Một thời gian ngắn, tinh trùng lớp khi một 40:80% PureSperm mật độgradient, xử lý bởi máy ly tâm 600 × g cho 15 phút và resuspendedtrong 1 ml của các phương tiện truyền thông cho các nền văn hóa tinh trùng (rửa PureSperm, Nidacon,Gothemberg, Thụy Điển). Sau khi mật độ gradient tách, một lần thứ haiđánh giá của tập trung, motility và hình thái học được thực hiện.Kích thích buồng trứng, thụ tinh ống nghiệm, ICSI và phôi thai phát triểnKích thích buồng trứng đạt được bằng cách tái tổ hợp FSH (Gonal F,Serono, Rome, ý; Puregon, Organon, Rome, ý) và theo dõibởi endovaginal echography và plasma estradiol. Ba mươi sáu giờtrước khi thu hồi oocyte, 10 000 IU của hCG (Gonasi, Amsa, Rome,Ý) được quản lý. Oocyte thu hồi được thực hiện theo tổng hợpgây mê bởi một đường hô hấp dẫn đường bằng siêu âm âm đạo. Tại16-18 h sau khi thụ tinh hoặc microinjection, như đã mô tả(Borini et al., 2004a, b), oocytes được đánh giá cho hai PN hiện diện.48 giờ sau khi oocyte truy, phôi đã được phân loạitheo hình thái học và sau đó chuyển vào tử cung. Lâm sàngmang thai đã được xác định bởi phát hiện thiết bị siêu âm thai nghéntúi và mang thai sinh hóa bởi sự hiện diện của chỉ là một tích cựcĐo lường β-hCG.Phân tích phân mảnh ADNThiết bị đầu cuối deoxynucleotidyl transferase trung gian deoxyuridine triphosphate(dUTP) tại chỗ DNA nick khảo nghiệm (TUNEL) cuối cùng đã được ghi nhãnđược thực hiện trên tinh trùng đình chỉ sau khi mật độ gradient táchnhư đã được mô tả bởi Benchaib et al. (2003). Một thời gian ngắn, là một phần của cáctinh trùng mẫu được sử dụng cho oocyte thụ tinh, trong khi khácmột phần của hệ thống treo tinh dịch được rửa sạch trong dung dịch muối đệm phosphat(PBS) (Sigma-Aldrich, Mi-lan, ý), bôi lên cho slide kính hiển vi,cố định trong 4% paraformaldehyde (Sigma-Aldrich) trong PBS trong 30 phút tại4° C và permeabilized với 0.1% Triton X-100 ở 0,1% Citrat natri(Sigma-Aldrich). Strand nghỉ trong DNA đã được phát hiện bởiTUNEL bằng cách sử dụng một bộ thương mại có sẵn (tại chỗ chết phát hiện CellKit, Fluorescein, Roche, Monza, ý) theo các nhà sản xuấthướng dẫn. Một kiểm soát tiêu cực được thực hiện cho mỗimẫu bằng cách sử dụng fluorescein isothiocyanate (FITC)-với nhãn hiệu dUTPkhông có enzyme. Tỷ lệ phần trăm của spermatozoa với phân mảnhDNA đã được xác định bởi các quan sát trực tiếp của 500 spermatozoa mỗimẫu với một kính hiển vi epifluorescence (NIKON thực 80i,Firenze, ý).Thụ tinh ống nghiệm bệnh nhân được chia thành hai nhóm: group A (n = 69), thấpBệnh nhân TUNEL (TUNEL positivity < 10%); nhóm B (n = 13), caoTUNEL các bệnh nhân (TUNEL positivity ≥10%). ICSI bệnh nhân cũngchia thành hai nhóm: Nhóm C (n = 20), thấp TUNEL bệnh nhân(TUNEL positivity < 10%); nhóm D (n = 30), cao TUNEL bệnh nhân(TUNEL positivity ≥10%). Giá trị ngưỡng của 10% được chọn trongphù hợp với nghiên cứu trước đây của Benchaib et al. (2003) thực hiện bằng cách sử dụngkỹ thuật tương tự cho chuẩn bị tinh trùng (mật độ gradient chia lyvới PureSperm) và cho các phát hiện của DNA thiệt hại đình chỉ tinh trùngthu được theo cách này (TUNEL khảo nghiệm và đánh giá tích cựctinh trùng với kính hiển vi epifluorescence).Kết quả định nghĩa và phân tích thống kê(i) tỷ lệ mang thai lâm sàng được định nghĩa là số lượng bệnh nhânvới nhịp tim thai nhi chia cho số lần điều trị;(ii) tỷ lệ mang thai sinh hóa là số hóa sinhmang thai chia cho số β-HCG bệnh nhân tích cực;(iii) tỷ lệ sẩy thai tự phát là số tự phátsẩy thai chia cho số β-HCG bệnh nhân tích cực;(iv) tỉ lệ tổn thất mang thai là số hóa có thaivà tự phát sẩy thai chia cho số β-HCGbệnh nhân tích cực;(v) TUNEL dương tính tỷ lệ là một số bệnh nhân với ADNphân mảnh > 10% chia cho số lần điều trị.Thống kê phân tích được thực hiện với SPSS cho Windows phần mềmgói phiên bản 10.1 (SPSS, Chicago, IL, Hoa Kỳ). Kolmogorov-Smirnov thử nghiệm đã được sử dụng để xác định xem các dữ liệu đã là ngẫu nhiên mẫutừ một phân phối bình thường. Chi-vuông test hoặc Fisher chính xácthử nghiệm đã được sử dụng để so sánh tỷ lệ lâm sàng mang thai, mang thai mấttỷ giá và số của phương pháp trị liệu nghệ thuật trước đó trong nhóm khác nhau củabệnh nhân. T-thử nghiệm được áp dụng cho phân tích bà mẹ tuổi, nữ BMI vàtham số tinh trùng. Spearman của xếp hạng tương quan, hợp lệ cho không bình thườngphân phối dữ liệu, được áp dụng để xác định sự tương quan giữaTham số phân mảnh và tinh trùng trong DNA và giữa phân mảnh DNAvà tỷ lệ thụ tinh. Thống kê sự khác biệt được coi làđáng kể tại P < 0,05 và rất quan trọng ở P < 0,01.Kết quảTrong nhóm tổng thể của bệnh nhân nghệ thuật (ICSI + thụ tinh ống nghiệm), các lâm sàngtỷ lệ mang thai là 22,7%. Mang thai sinh hóa và sẩy thaitỷ giá là 15 và 10%, tương ứng. Lâm sàng mang thaitỷ lệ là 24% trong 50 cặp vợ chồng trải qua chu kỳ ICSI;sinh hóa tỷ lệ mang thai và sẩy thai là 11.8 và17,6%, tương ứng. Tỷ lệ mang thai lâm sàng là 21,9% ở 82các cặp vợ chồng đang trải qua một chu kỳ thụ tinh ống nghiệm; mang thai sinh hóa vàtỷ lệ sẩy thai là 17.4 và 4,3%, tương ứng.Bệnh nhân được chia thành các nhóm theo mức độ củaphân mảnh DNA tinh trùng, bằng cách sử dụng một ngưỡng phân mảnh DNAgiá trị của 10% (Benchaib và ctv., 2003). Đàn ông 132kiểm tra, 43 (32,6%) là TUNEL tích cực (phân mảnh DNA> 10%). Sáu mươi chín của đàn ông 82 trải qua thụ tinh ống nghiệmTUNEL tiêu cực (bảng A) và 13 là TUNEL tích cực(bảng B). Hai mươi của 50 nam giới ICSI là TUNEL tiêu cực(Nhóm C) và 30 TUNEL tích cực (nhóm D). Cả hai tuổivà BMI của phụ nữ của nhóm A và B không phải là ý nghĩa thống kê khác nhau(tuổi: 37,5 ± 3,75 và 35.61 ± 3.42 năm, tương ứng,P = 0.095; BMI: 22.35 ± 3,21 và 23,17 ± 3,64 kg/m2, tương ứng,P = 0.411); cũng tuổi và BMI của phụ nữ trong nhóm C vàD không thống kê khác nhau (tuổi: 36.95 ± 4.91 và 36.72 ±4,92 năm, tương ứng, P = 0.872; BMI: 21.43 ± 2,64 và21,76 ± 3,12 kg/m2tương ứng, P = 0.699). Đã có không cóthống kê sự khác biệt trong số các cặp vợ chồng người đã trải quađiều trị nghệ thuật trước giữa nhóm A và B và giữa bởi đánh vào ngày 4 tháng 8 năm 2013 http://humrep.oxfordjournals.org/ tải về từ A.Borini et al.2878Nhóm C và D (P = 0.356 và P = 1.000, tương ứng), (bàn tôi).Hơn nữa, có không phải là một sự khác biệt thống kê giữa nhómA và B và giữa nhóm C và D cũng liên quan đến các giá trị có nghĩa làtham số tinh trùng (có nghĩa là giá trị và P-giá trị trong bảng tôi).Đặc điểm phân mảnh và tinh trùng DNABảng II tổng hợp kết quả phân tích mối tương quan giữaDNA phân mảnh và tinh trùng tham số. Rất quan trọngtiêu cực tương quan (P < 0,01) đã được quan sát thấy giữa tinh trùngPhân mảnh DNA và tất cả các thông số tinh trùng (tổng số,tập trung, motility và hình thái học), trước và sau khigián đoạn gradient số.Phân mảnh DNA và nghệ thuật kết quảTỷ lệ thụ tinhMột phân tích mối tương quan được thực hiện để xác định mối quan hệgiữa phân mảnh DNA tỷ lệ và tinh trùng thụ tinhtrong cả hai ICSI và thụ tinh ống nghiệm điều trị. Tỷ lệ thụ tinhdường như không có bị ảnh hưởng bởi sự phân mảnh DNA tinh trùngở ICSI (r = –0.159; P = 0.271), trong khi trong thụ tinh ống nghiệm cólà một sự tương quan tiêu cực nhẹ giữa hai tham số(r = –0.219; P = 0.049).Lâm sàng mang thai và mang thai mấtChúng tôi đánh giá mối quan hệ có thể giữa tinh trùng TUNELtích cực (ngưỡng = 10%) và lâm sàng mang thai và mang thaitổn thất trong nhóm thụ tinh ống nghiệm và ICSI (bàn tôi).Đối với nhóm thụ tinh ống nghiệm, tỷ lệ mang thai lâm sàng đã khôngthống kê đáng kể khác nhau trong nhóm A và nhóm B (Aso với B = 23.2 so với 15.4%; P = 0.723); mang thai mất tỷ giáđã cũng không khác biệt đáng kể về mặt thống kê ở bảng A vàNhóm B (A so với B = 15.8 so với 50%; P = 0.194).Trong nhóm ICSI, một sự khác biệt rất quan trọng đã được tìm thấygiữa nhóm C và D cũng liên quan đến lâm sàng mang thaitỷ giá (C so với D = 45 so với 10%; P = 0,007). Cũng đã cósự khác biệt rất quan trọng trong mang thai mất giữa nhómC và D, không có sinh hóa mang thai hoặc sẩy thailoài này có ở nhóm C (C so với D = 0 so với 62,5%; P = 0.009).Chúng tôi cũng thử nghiệm có thể có mối quan hệ giữa sự phân mảnh DNAvà lâm sàng mang thai và mang thai giảm cân bằng cách sử dụng một20% ngưỡng, theo đề nghị của các tác giả (Seli và ctv.,Năm 2004). các kết quả đã không thay đổi đáng kể: (i) trong ICSINhóm, lâm sàng mang thai và mang thai mất tỷ giá đã thống kêđáng kể khác nhau ở những bệnh nhân với cao và thấptinh trùng DNA phân mảnh (P = 0,04 và P = 0,02, tương ứng)và (ii) trong thụ tinh ống nghiệm nhóm, lâm sàng mang thai và mang thaitỷ lệ mất mát không thống kê khác nhau trong hai nhóm củabệnh nhân (P = 1.000).Tham số tinh trùng và nghệ thuật kết quảLâm sàng mang thai và mang thai mấtChúng tôi đánh giá mối quan hệ giữa tham số tinh trùng (nồng độ,motility và hình thái học), đo trên tinh dịchtrước khi gián đoạn gradient số, và lâm sàng mang thaivà mang thai mất trong thụ tinh ống nghiệm và ICSI nhóm. Đặc biệt,chúng tôi sử dụng những người ngưỡng cấp đối với bình thườngtập trung (≥20 × 106/ ml), motility (motility tiến bộ≥50%) và hình thái học (hình thức bình thường ≥30%). Trong cả hai thụ tinh ống nghiệm vàICSI nhóm, có là không có sự khác biệt ý nghĩa thống kê trongmang thai tỷ lệ giữa các bệnh nhân với bình thường hoặc bất thườngtập trung, motility và hình thái học. Các tham số tinh trùngđã không thậm chí xuất hiện để ảnh hưởng đến sự khởi đầu của thai kỳ mất:không có sự khác biệt đáng kể trong mang thai mất tỷ lệ đã được tìm thấygiữa các bệnh nhân với nồng độ bình thường hoặc bất thường,motility và hình thái học (bảng III).Bàn I. mối quan hệ giữa TUNEL positivity (thấp TUNEL < 10%, nhóm A và C; cao TUNEL ≥10%, nhóm B và D) và phương pháp trị liệu nghệ thuật trước,bà mẹ tuổi, nữ BMI, tinh trùng tham số (trước khi mật độ

Kết quả (Việt) 2:

Bộ sưu tập tinh trùng và chuẩn bị
tinh trùng mẫu được thu thập bằng cách thủ dâm. Các mẫu được phân tích
WHO chỉ (WHO, 1999) cho tổng số tinh trùng sau
số, tập trung, khả năng vận động và hình thái học và đã được chuẩn bị
bằng cách sử dụng một PureSperm dốc liên tục (Nidacon, Gothemberg,
Thụy Điển). Tóm lại, tinh trùng đã được xếp lớp trên một 40: 80% mật độ PureSperm
gradient, xử lý bằng máy ly tâm tại 600 × g trong 15 phút và lơ lửng
trong 1 ml môi trường nuôi cấy tinh trùng (rửa PureSperm, Nidacon,
Gothemberg, Thụy Điển). Sau khi mật độ tách gradient, một thứ hai
đánh giá tập trung, khả năng vận động và hình thái học đã được thực hiện.
kích thích buồng trứng, IVF, ICSI và phát triển của phôi
kích thích buồng trứng đã đạt được bằng cách tái tổ hợp FSH (Gonal F,
Serono, Rome, Italy; Puregon, Organon, Rome, Ý ) và được giám sát
bởi siêu âm endovaginal và estradiol trong huyết tương. Ba mươi sáu giờ
trước khi lấy tế bào trứng, 10 000 IU hCG (Gonasi, Amsa, Rome,
Italy) đã được quản lý. Hồi tế bào trứng được thực hiện dưới chung
gây mê bằng một siêu âm dẫn đường khát vọng âm đạo. Tại
16-18 giờ sau khi thụ tinh hoặc tiêm, như được mô tả trước đây
(Borini et al., 2004a, b), tế bào trứng đã được đánh giá đối với hai mặt PN.
Bốn mươi tám giờ sau khi lấy tế bào trứng, phôi được phân loại
theo hình thái và sau đó được chuyển thành tử cung. Lâm sàng
mang thai được xác định bằng siêu âm phát hiện của thai
sac thai và sinh hóa bởi sự hiện diện của chỉ một tích cực
đo β-hCG.
phân mảnh phân tích ADN
ga deoxynucleotidyl transferase qua trung gian deoxyuridine triphosphate
(dUTP) về nhãn cuối DNA nick situ (tunel) khảo nghiệm
đã được thực hiện đình chỉ tinh trùng sau khi mật độ dốc tách
mô tả như trước đây bởi Benchaib et al. (2003). Tóm lại, một phần của
mẫu tinh trùng đã được sử dụng cho các tế bào trứng thụ tinh, trong khi khác
là một phần của hệ thống treo tinh dịch đã được rửa sạch trong nước muối đệm phosphat
(PBS) (Sigma-Aldrich, Milan, Italy), bôi lên lam kính,
cố định trong 4% paraformaldehyde (Sigma-Aldrich) trong PBS trong 30 phút ở
nhiệt độ 4 ° C và permeabilized với 0,1% Triton X-100 0.1% sodium citrate
(Sigma-Aldrich). Phá vỡ sợi trong DNA được phát hiện bằng
cách sử dụng một bộ tunel thương mại có sẵn (In situ di Chết Detection
Kit, fluorescein, Roche, Monza, Italy) theo của nhà sản xuất
hướng dẫn. Một kiểm soát tiêu cực đã được thực hiện cho từng
mẫu bằng cách sử dụng isothiocyanate fluorescein (FITC) -labelled dUTP
mà không enzyme. Tỷ lệ tinh trùng có bị phân mảnh
DNA đã được xác định bằng cách quan sát trực tiếp của 500 tinh trùng mỗi
mẫu bằng kính hiển vi epifluorescence (NIKON eclipse 80i,
Florence, Italy).
bệnh nhân IVF được chia thành hai nhóm: nhóm A (n = 69), thấp
bệnh nhân Tunel (tunel dương <10%); nhóm B (n = 13), cao
bệnh nhân tunel (tunel dương ≥10%). Bệnh nhân ICSI cũng được
chia thành hai nhóm: nhóm C (n = 20), bệnh nhân tunel thấp
(tunel dương <10%); nhóm D (n = 30), bệnh nhân tunel cao
(tunel dương ≥10%). Các giá trị ngưỡng 10% đã được lựa chọn
phù hợp với các nghiên cứu trước đây của Benchaib et al. (2003) thực hiện bằng cách sử dụng
các kỹ thuật tương tự để chuẩn bị tinh trùng (mật độ tách Gradient
với PureSperm) và để phát hiện các tổn thương DNA về việc đình chỉ tinh trùng
thu được theo cách này (tunel khảo nghiệm và đánh giá tích cực
với tinh trùng epifluorescence kính hiển vi).
định nghĩa Kết quả và phân tích thống kê
(i) tỷ lệ có thai lâm sàng được định nghĩa là số lượng bệnh nhân
có nhịp tim của thai nhi được chia cho số lần điều trị;
(ii) tỷ lệ mang thai Sinh hóa là số lượng sinh hóa
mang thai được chia cho số lượng bệnh nhân β-HCG dương tính;
(iii) tự phát tỷ lệ sẩy thai là số tự phát
sẩy thai và chia cho số bệnh nhân β-HCG dương tính;
(iv) tỷ lệ tổn thất trong thai là số lần mang thai sinh hóa
và sẩy thai tự phát chia cho số lượng β-HCG
bệnh nhân dương tính;
(v) tunel dương tỷ lệ này là số lượng bệnh nhân với DNA
phân mảnh> 10% chia cho số lần điều trị.
Phân tích thống kê được thực hiện với SPSS cho Windows phần mềm
gói phiên bản 10.1 (SPSS, Chicago, IL, USA). Các Kolmogorov-
test Smirnov đã được sử dụng để xác định xem các dữ liệu được lấy mẫu ngẫu nhiên
từ một phân bố bình thường. Các kiểm định chi bình phương hoặc Fisher chính xác
thử nghiệm đã được sử dụng để so sánh tỉ lệ có thai lâm sàng, sẩy thai
và tỷ lệ số lần điều trị ART trước đó trong các nhóm khác nhau của
bệnh nhân. T-test đã được áp dụng để phân tích tuổi của người mẹ, nữ BMI và
các thông số tinh trùng. Cấp bậc tương quan Spearman, thời hiệu không bình thường
dữ liệu phân tán, đã được áp dụng để xác định mối tương quan giữa
ADN phân mảnh và tinh trùng thông số và giữa các phân mảnh DNA
và tỷ lệ thụ tinh. Sự khác biệt thống kê được coi là
đáng kể ở mức P <0,05 và rất có ý nghĩa ở mức P <0,01.
Kết quả
Trong nhóm tổng thể của bệnh nhân điều trị ARV (ICSI + IVF), các lâm sàng
tỷ lệ có thai là 22,7%. Mang thai và sẩy thai sinh hóa
giá là 15 và 10%, tương ứng. Thai lâm sàng
tỷ lệ này là 24% trong 50 cặp vợ chồng trải qua chu kỳ ICSI;
mang thai sinh hóa và tỷ lệ sẩy thai là 11,8 và
17,6%, tương ứng. Tỉ lệ có thai lâm sàng là 21,9% trong 82
cặp vợ chồng trải qua một chu kỳ IVF; thai sinh hóa và
giá sẩy thai là 17,4 và 4,3%, tương ứng.
Bệnh nhân được chia thành các nhóm theo mức độ
phân mảnh DNA tinh trùng, sử dụng một DNA ngưỡng phân mảnh
giá trị là 10% (Benchaib et al., 2003). Trong số 132 nam giới
kiểm tra, 43 (32,6%) là tunel tích cực (phân mảnh DNA
> 10%). Sáu mươi chín của 82 nam giới trải qua IVF là
tunel âm (nhóm A) và 13 là tunel dương
(nhóm B). Hai mươi của 50 nam giới ICSI là tunel tiêu cực
(nhóm C) và 30 là tunel dương (nhóm D). Cả hai tuổi
và BMI của phụ nữ thuộc nhóm A và B không khác biệt về mặt thống kê
(tuổi: 37,5 ± 3,75 và 35,61 ± 3,42 năm, tương ứng,
P = 0,095; BMI: 22,35 ± 3,21 và 23,17 ± 3,64 kg / m2
, tương ứng,
P = 0,411); cũng tuổi và BMI của phụ nữ trong nhóm C và
D không khác biệt về mặt thống kê (tuổi: 36,95 ± 4,91 và 36,72 ±
4,92 năm, tương ứng, P = 0,872; BMI: 21,43 ± 2,64
21,76 ± 3,12 kg / m2
, tương ứng, P = 0,699). Không có sự
khác biệt thống kê về số lượng các cặp vợ chồng trải qua
điều trị ART trước giữa nhóm A và B và giữa
của khách trên 04 tháng 6 năm 2013 http://humrep.oxfordjournals.org/ Tải về từ
A.Borini et al.
2878
nhóm C và D (P = 0,356 và P = 1.000, tương ứng), (Bảng I).
Hơn nữa, không có sự khác biệt thống kê giữa nhóm
A và B và giữa các nhóm C và D liên quan đến các giá trị trung bình
của các thông số tinh trùng (giá trị trung bình và P-giá trị trong Bảng I).
phân mảnh DNA và đặc điểm tinh trùng
Bảng II tóm tắt các kết quả phân tích tương quan giữa
các mảnh DNA và các thông số tinh trùng. Rất có ý nghĩa
tương quan âm (P <0,01) được quan sát giữa tinh trùng
phân mảnh DNA và tất cả các thông số tinh trùng (tổng số,
tập trung, khả năng vận động và hình thái học), trước và sau khi
liên tục Gradient ly tâm.
phân mảnh DNA và kết quả ART
tỷ lệ thụ tinh
Một phân tích tương quan đã được thực hiện để xác định các mối quan hệ
giữa tỷ lệ thụ tinh và phân mảnh DNA tinh trùng
trong cả hai phương pháp điều trị ICSI và IVF. Tỷ lệ thụ tinh
không xuất hiện để bị ảnh hưởng bởi sự phân mảnh DNA tinh trùng
trong ICSI (r = -0,159; P = 0,271), trong khi ở IVF có
một sự tương quan tiêu cực nhỏ giữa hai tham số
(r = -0,219; P = 0,049) .
thai lâm sàng và sẩy thai
Chúng tôi đánh giá các mối quan hệ có thể có giữa tunel tinh trùng
dương (ngưỡng = 10%) và thai lâm sàng và thai kỳ
mất mát trong cả IVF và nhóm ICSI (Bảng I).
Liên quan đến nhóm IVF, tỉ lệ có thai lâm sàng là không
thống kê khác nhau đáng kể ở nhóm A và nhóm B (A
so với B = 23,2 so với 15,4%; P = 0,723); tỷ lệ sẩy thai
cũng không thống kê khác nhau đáng kể ở nhóm A và
nhóm B (A so với B = 15,8 so với 50%; P = 0,194).
Trong nhóm ICSI, một sự khác biệt rất có ý nghĩa đã được tìm thấy
giữa nhóm C và nhóm D liên quan đến lâm sàng mang thai
giá (C so với D = 45 so với 10%; P = 0,007). Cũng có
một sự khác biệt rất có ý nghĩa trong trường hợp sảy thai giữa nhóm
C và D, không có thai sinh hóa hoặc sẩy thai
được tìm thấy trong nhóm C (C so với D = 0 so với 62,5%; P = 0,009).
Chúng tôi cũng đã thử nghiệm các mối quan hệ có thể có giữa các mảnh DNA
và thai lâm sàng và sẩy thai bằng cách sử dụng một
ngưỡng 20%, theo đề nghị của các tác giả khác (Seli et al.,
2004). Các kết quả không thay đổi đáng kể: (i) trong ICSI
nhóm, mang thai và thai Tỷ lệ tổn thất lâm sàng là thống kê
khác nhau đáng kể ở bệnh nhân cao và thấp
tinh trùng phân mảnh DNA (P = 0,04 và P = 0,02, tương ứng)
và (ii) trong nhóm IVF, thai lâm sàng và thai
Tỷ lệ tổn thất là không khác biệt về mặt thống kê ở nhóm hai của
bệnh nhân (P = 1,000).
thông số tinh trùng và kết quả ART
thai lâm sàng và sẩy thai
Chúng tôi đánh giá mối quan hệ giữa các thông số tinh trùng (nồng độ,
khả năng vận động và hình thái học), đo trên tinh dịch
trước khi gián đoạn ly tâm gradient, và thai lâm sàng
và sẩy thai ở cả hai IVF và ICSI nhóm. Đặc biệt,
chúng tôi sử dụng các mức ngưỡng của WHO đối với bình thường
nồng độ (≥20 × 106
/ ml), sự vận động (vận động của tiến bộ
≥50%) và hình thái (hình thức bình thường ≥30%). Trong cả hai IVF và
ICSI nhóm, không có sự khác biệt ý nghĩa thống kê
tỉ lệ có thai giữa các bệnh nhân bình thường hay bất thường
tập trung, khả năng vận động và hình thái. Những thông số tinh trùng
thậm chí không xuất hiện để ảnh hưởng đến sự khởi đầu của sẩy thai:
không có sự khác biệt đáng kể về tỷ lệ sẩy thai đã được tìm thấy
giữa các bệnh nhân bình thường hay bất thường tập trung,
khả năng vận động và hình thái (Bảng III).
Bảng I. Mối quan hệ giữa tunel dương (tunel thấp <10%, nhóm A và C; cao tunel ≥10%, nhóm B và D) và phương pháp điều trị ART trước đó,
tuổi của người mẹ, nữ BMI, các thông số tinh trùng (trước khi mật độ