Two proinflammatory cytokines (TNF-

Two proinflammatory cytokines (TNF-α and IL-1β)
and 2 anti-inflammatory cytokines (IL-10 and TGF-β) were measured in the serum samples by porcine-specific ELISA according to the recommendation of the manu- facturer (R and D Systems Inc., Minneapolis, MN). All samples were analyzed in duplicate. Briefly, standard, control, and samples were added to the wells with a coated monoclonal antibody specific for each cytokine. After incubation for 2 h, the unbound substances were washed away, and an enzyme-linked polyclonal anti- body specific for the cytokine was added to the wells to sandwich the cytokine immobilized during the first incubation. A further 2 h of incubation was followed by a wash to remove any unbound antibody-enzyme reagent, and then a substrate solution was added to the wells and color developed in proportion to the amount of the cytokine bound in the initial step. The color de- velopment was stopped by adding the stop solution, and the intensity of the color was measured at 450 nm with the correction wavelength set at 530 nm. Concentrations were calculated from a standard curve. The procedures for TGF-β were similar to those described before, except for different incubation times. The IL-10 and IL-1β con- centrations were less than the sensitivity of the ELISA kit for IL-10 (5.5 pg/mL) and IL-1β (13.6 pg/mL); there- fore, they were not detectable in the serum samples.

Kết quả (Việt) 1:

Hai lên phân bào (TNF-α và IL-1β)và 2 phân bào chống viêm (IL-10 và TGF-β) được đo bằng các mẫu huyết thanh của porcine cụ thể ELISA theo đề xuất của Hãng SX-facturer (R và D Systems Inc., Minneapolis, MN). Tất cả các mẫu được phân tích trong bản sao. Một thời gian ngắn, tiêu chuẩn, kiểm soát, và mẫu đã được thêm vào các giếng với một tráng monoclonal kháng cụ thể cho mỗi cytokine. Sau khi ủ bệnh cho 2 h, toạc chất đã được rửa sạch đi, và một liên kết với enzyme polyclonal chống-cơ thể cụ thể để cytokine đã được thêm vào các giếng bánh sandwich cytokine hỏng trong quá trình ấp trứng đầu tiên. 2giờ một thêm ấp theo sau là một rửa để loại bỏ bất kỳ tinh khiết toạc kháng thể-enzym, và sau đó một giải pháp chất nền đã được thêm vào các giếng và màu phát triển theo tỷ lệ số cytokine ràng buộc trong bước đầu tiên. Màu de-velopment được dừng lại bằng cách thêm các giải pháp ngăn chặn, và cường độ của màu sắc được đo tại 450 nm với bước sóng chỉnh đặt ở 530 nm. Nồng độ được tính từ một đường cong tiêu chuẩn. Các thủ tục cho TGF-β được tương tự như mô tả trước đó, ngoại trừ thời gian ủ bệnh khác nhau. Những chiếc IL-10 và IL-1β centrations con là ít hơn sự nhạy cảm của kit ELISA cho IL-10 (5,5 pg/mL) và IL-1β (13,6 pg/mL); đó-fore, chúng không được phát hiện trong các mẫu huyết thanh.

Kết quả (Việt) 2:

Hai cytokine tiền viêm (TNF-α và IL-1β)
và 2 cytokine chống viêm (IL-10 và TGF-β) được đo trong mẫu huyết thanh bằng phương pháp ELISA lợn cụ thể theo đề nghị của nhà sản manu- (R và D Systems Inc., Minneapolis, MN). Tất cả các mẫu được phân tích thành hai bản. Tóm lại, tiêu chuẩn, kiểm soát, và các mẫu được thêm vào các giếng với một kháng thể đơn dòng tráng cụ thể cho từng cytokine. Sau khi ủ trong 2 giờ, các chất không ràng buộc đã bị cuốn trôi, và một cơ thể đa giá chống enzyme liên kết cụ thể cho các cytokine đã được bổ sung vào giếng cho bánh sandwich các cytokine cố định trong quá trình ủ đầu tiên. Hơn 2 giờ ủ đã được theo sau bởi một rửa để loại bỏ bất kỳ cởi kháng thể enzyme tinh khiết, và sau đó là một giải pháp nền được thêm vào các giếng và màu sắc phát triển tỷ lệ thuận với số lượng các cytokine bị ràng buộc trong bước đầu. Màu de- velopment đã được ngừng lại bằng cách thêm các giải pháp ngăn chặn, và cường độ của màu sắc được đo ở 450 nm với bước sóng điều chỉnh thiết lập tại 530 nm. Nồng độ đã được tính từ một đường cong chuẩn. Các thủ tục cho TGF-β tương tự với những mô tả trước đây, ngoại trừ thời gian ủ khác nhau. Các IL-10 và IL-1β nồng thấp hơn so với độ nhạy của bộ kit ELISA cho IL-10 (5,5 pg / mL) và IL-1β (13,6 pg / ml); fore there-, họ không phát hiện được trong các mẫu huyết thanh.