PROCEDURECoating of cell culture di

PROCEDURE
Coating of cell culture dishes
1| Coat 60-mm dishes with proper ECM substrates for the cell type to be studied (e.g., for fibroblasts, use 10mgml
1
fibronectin or 50mgml
1
poly-L-lysine as a control) by incubating the dishes overnight at 41C or for 2 h at 371Cwithout
rotation or shaking.
2| Remove the unbound ECM substrate and block the coated dishes with 3 ml of 2 mg ml

1bovine serum albumin for 1 h at 371C. Then, wash the dishes once with PBS and refill the dishes with 3–5 ml of media before plating the cells. For the particular cell type used, the appropriate amount of serum in the medium during thein vitro scratch assay is required to be determined.
It is recommended to use a lower percentage of serum than that used in the growth media to minimize cell proliferation, but just sufficient to prevent apoptosis and/or cell detachment.
mCRITICAL STEPApart from the serum, if the assay is to study the effects of growth factors or other compounds, these soluble factors should be included in the media before addition of cells.

Kết quả (Việt) 1:

THỦ TỤCLớp phủ của di động văn hóa món ăn1| Áo khoác paltô cho các món ăn 60-mm với chất nền ECM thích hợp cho loại tế bào được nghiên cứu (ví dụ, cho fibroblasts, sử dụng 10mgml 1fibronectin hoặc 50mgml 1Poly L, lysine là một điều khiển) bởi ấp các món ăn qua đêm ở 41 C hoặc cho 2 h 371Cwithoutxoay hoặc lắc.2| Loại bỏ chất nền ECM toạc và chặn các món ăn tráng với 3 ml 2 mg ml1bovine huyết thanh albumin cho 1 h 371C. Sau đó, rửa chén đĩa một lần với PBS và nạp tiền các món ăn với 3-5 ml media trước khi mạ các tế bào. Cho các loại hình di động cụ thể được sử dụng, số tiền thích hợp của huyết thanh trong môi trường trong thein ống nghiệm đầu khảo nghiệm là cần thiết để được xác định.Đó là khuyến cáo sử dụng một tỷ lệ phần trăm thấp hơn huyết thanh hơn mà được sử dụng trong các phương tiện truyền thông phát triển để giảm thiểu sự gia tăng tế bào, nhưng chỉ đủ để ngăn chặn quá trình chết rụng và/hoặc di động đội.mCRITICAL STEPApart từ huyết thanh, nếu khảo nghiệm là nghiên cứu những ảnh hưởng của yếu tố tăng trưởng hoặc các hợp chất khác, các yếu tố này hòa tan trong nên được bao gồm trong các phương tiện truyền thông trước khi bổ sung các tế bào.

Kết quả (Việt) 2:

THỦ TỤC
Coating các món ăn nuôi cấy tế bào
1 | Coat 60-mm món ăn với các chất nền ECM thích hợp cho các loại tế bào phải được nghiên cứu (ví dụ, đối với các nguyên bào sợi, sử dụng 10mgml 1?
Fibronectin hoặc 50mgml 1?
poly-L-lysine như một điều khiển) bằng cách ủ các món ăn đêm tại 41C hoặc cho 2 h tại 371Cwithout
xoay hoặc lắc.
2 | Tháo ECM đế cởi ra và ngăn chặn các món ăn tráng với 3 ml 2 mg ml
albumin huyết thanh 1bovine trong 1 giờ ở 371C?. Sau đó, rửa các món ăn một lần với PBS và đổ đầy các món ăn với 3-5 ml của phương tiện truyền thông trước khi mạ các tế bào. Đối với các loại tế bào đặc biệt được sử dụng, số tiền thích hợp của huyết thanh trong môi trường trong quá trình Thein vitro đầu khảo nghiệm là cần thiết để xác định được.
Nó được khuyến cáo sử dụng một tỷ lệ thấp hơn của huyết thanh hơn so với sử dụng trong các phương tiện truyền thông phát triển để giảm thiểu sự tăng sinh tế bào, nhưng chỉ đủ để ngăn chặn quá trình apoptosis và / hay giải thoát tế bào.
mCRITICAL STEPApart từ huyết thanh, nếu xét nghiệm là nghiên cứu ảnh hưởng của yếu tố tăng trưởng và các hợp chất khác, các yếu tố hòa tan nên được bao gồm trong các phương tiện truyền thông trước khi bổ sung các tế bào.