100 μL frozen glycerol stock with t

100 μL frozen glycerol stock with the recombinant strain was inoculated into a 250 mL shake flask containing 50 mL DM and incubated at 37oC, 200 rpm for approximately 12 h. Aliquots from this preculture were transferred into 50 mL fresh DM (in 250 mL shake flask) until the optical density (OD600) reached 0.055, and the culture continued at 37oC with shaking at 200 rpm. To determine the optimal time, IPTG was added at 2 h intervals from the initial inoculation (OD600 = 0.055) until 12 h, to achieve a final concentration of 0.5 mM. Samples were harvested to assay Pfu activity until 18 h. The Pfu activity was directly assayed following the heat treatment and centrifugation steps.
To determine the optimal IPTG dosage, different volumes of the IPTG stock solution were added as a single dose at the second hour when the initial optical density was 0.055. The cell growth and the Pfu activity were tested after induction at 2 h intervals until cultivation was halted.
After the optimum time and concentration of singlepulse IPTG induction was determined, a induction strategy was developed. The developed induction strategy consisted of multiple additions of a small dosage of IPTG from 2 to 6 h (with the same initial optical density of 0.055), and the additional dosage ranged from 0.25 to 200 lM at different intervals that ranged from 0.5 to 4 h. Cultivation was stopped after 12 h and then the Pfu activity was directly assayed. All experiments were performed in triplicate.
A 5 L fermentor (GBJT-5 A, China) equipped with pH and pO2 probes (Mettler–Toledo, USA) was used for the Pfu fermentation with 3 L liquid DM. The seed was cultured in 250 mL shake flask containing 50 mL DM at 37oC, 200 rpm for 12 h. The inoculation volume and initial optical density were 10 % and 0.055, respectively. Temperature was controlled at 37 C during the cultivation. The agitation speed and air flow rate were set at 200 rpm and 1 vvm under uncontrolled dissolved oxygen concentration (DOC) mode, respectively. Under the controlled DOC mode, the DOC was set at 10, 20, 30, 40, and 50 % by automatically adjusting agitation speed of 200–800 rpm and air flow rate of 1–2 vvm.
Analysis
The cell growth was monitored by measuring the optical density at 600 nm. The samples were diluted with deionized water until the measurement value was within the linear range of the spectrophotometer (Unico, UV-2100). To measure the dry cell weight (DCW), the cells were collected by centrifugation (10,000g for 10 min) in pre-weighed tubes, the pellets washed three times with deionized water, and then dried at 80 C until they reached a constant weight. An OD600 of 1.0 was equivalent to 0.4 g L-1 DCW.

Kết quả (Việt) 1:

100 μL đông lạnh glyxêrin cổ với tái tổ hợp chủng được tiêm chủng vào một bình lắc 250 mL có 50 mL DM và ủ tại 37oC, vòng/phút 200 cho khoảng 12 h. Aliquots từ preculture này được chuyển thành 50 mL tươi DM (trong 250 mL lắc flask) cho đến khi mật độ quang học (OD600) đến 0.055, và các nền văn hóa tiếp tục tại 37oC với lắc 200 rpm. Để xác định thời gian tối ưu, IPTG được bổ sung vào khoảng 2 h từ tiêm phòng ban đầu (OD600 = 0.055) đến 12 h, để đạt được một nồng độ cuối cùng của 0,5 mM. Mẫu đã được thu hoạch để Pfu hoạt động khảo nghiệm cho đến 18 h. Hoạt động Pfu được trực tiếp assayed sau xử lý nhiệt và số bước. Để xác định liều lượng IPTG tối ưu, các khối lượng khác nhau của giải pháp cổ IPTG được thêm vào như một liều duy nhất vào giờ thứ hai khi mật độ quang học ban đầu là 0.055. Tăng trưởng tế bào và các hoạt động Pfu đã được thử nghiệm sau khi cảm ứng lúc 2 h khoảng cho đến khi canh tác đã được tạm dừng.Sau khi thời gian tối ưu và sự tập trung của singlepulse IPTG cảm ứng đã được xác định, một chiến lược cảm ứng được phát triển. Chiến lược phát triển cảm ứng bao gồm nhiều bổ sung của một nhỏ liều lượng của IPTG từ 2 đến 6 h (với cùng một ban đầu quang học mật độ 0.055), và liều lượng bổ sung bao gồm từ 0,25 đến 200 lM tại các khoảng khác nhau mà trải dài từ 0,5 đến 4 h. trồng trọt dừng lại sau khi 12 h và sau đó hoạt động Pfu được trực tiếp assayed. Tất cả thí nghiệm đã được thực hiện trong triplicate.Một 5 L fermentor (GBJT-5 A, Trung Quốc) được trang bị với đầu dò pH và pO2 (Mettler-Toledo, Hoa Kỳ) đã được sử dụng cho quá trình lên men Pfu với chất lỏng 3 L DM. Các hạt giống được nuôi cấy trong 250 mL lắc flask có 50 mL DM ở 37oC, 200 vòng/phút cho 12 h. Khối lượng tiêm chủng và mật độ quang học ban đầu là 10% và 0.055, tương ứng. Nhiệt độ được kiểm soát ở 37 C trong trồng trọt. Kích động tốc độ và không khí lưu lượng là thiết lập ở 200 rpm và 1 vvm dưới chế độ tập trung (DOC) không kiểm soát được hòa tan oxy, tương ứng. Dưới các chế độ kiểm soát của bác sĩ, bác sĩ đã được đặt ở 10, 20, 30, 40 và 50% bằng kích động tốc độ 200-800 viên mỗi phút và tốc độ dòng chảy máy của 1-2 vvm điều chỉnh tự động.Phân tíchTăng trưởng tế bào đã được giám sát bằng cách đo mật độ quang học tại 600 nm. Các mẫu được pha loãng với nước deionized cho đến khi giá trị đo trong phạm vi tuyến tính của phối (Unico, UV-2100). Để đo lường trọng lượng Giặt di động (DCW), các tế bào được thu thập bởi số (10, 000g cho 10 phút) trong ống trước cân nặng, các viên rửa ba lần với deionized nước, và sau đó được sấy khô ở 80 C cho đến khi họ đạt đến một hằng số trọng lượng. Một OD600 1.0 là tương đương với cách 0.4 g L-1 DCW.

Kết quả (Việt) 2:

100 ml đông lạnh cổ glycerol với các chủng tái tổ hợp được cấy vào 250 mL lắc bình chứa 50 ml DM và ủ ở 37oC, 200 rpm cho khoảng 12 h. Phân ước từ preculture này đã được chuyển giao vào 50 mL DM tươi (trong 250 mL lắc bình) cho đến khi mật độ quang học (OD600) đạt 0,055, và các nền văn hóa tiếp tục ở 37oC với lắc ở 200 rpm. Để xác định thời gian tối ưu, IPTG đã được bổ sung tại 2 h từ cấy ban đầu (OD600 = 0,055) cho đến 12 h, để đạt được nồng độ cuối cùng của 0,5 mM. Các mẫu được thu hoạch để thử nghiệm hoạt động PFU cho đến 18 h. Các hoạt động PFU đã trực tiếp khảo nghiệm sau xử lý nhiệt và bước ly tâm.
Để xác định IPTG liều tối ưu, khối lượng khác nhau của các giải pháp chứng khoán IPTG đã được thêm vào như một liều duy nhất vào giờ thứ hai khi mật độ quang ban đầu là 0,055. Sự tăng trưởng tế bào và hoạt động PFU đã được thử nghiệm sau khi cảm ứng tại 2 h cho đến khoảng thời gian canh tác đã bị chững lại.
Sau thời gian tối ưu và nồng độ IPTG singlepulse cảm ứng đã được xác định, một chiến lược cảm ứng đã được phát triển. Chiến lược phát triển induction gồm nhiều bổ sung một liều lượng nhỏ của IPTG 2-6 h (với cùng một mật độ quang học đầu tiên của 0,055), và liều thêm dao 0,25-200 LM khoảng thời gian khác nhau mà dao động 0,5-4 h . Trồng trọt đã dừng lại sau 12 h và sau đó các hoạt động PFU đã khảo nghiệm trực tiếp. Tất cả các thí nghiệm đã được thực hiện trong ba lần.
A 5 L lên men (GBJT-5 A, Trung Quốc) được trang bị với pH và PO2 đầu dò (Mettler-Toledo, USA) đã được sử dụng cho quá trình lên men PFU với 3 L lỏng DM. Các hạt giống được nuôi trong 250 mL bình lắc có chứa 50 ml DM ở 37oC, 200 rpm trong 12 h. Khối lượng tiêm chủng và mật độ quang ban đầu là 10% và 0.055, tương ứng. Nhiệt độ được kiểm soát ở 37 C trong thời gian canh tác. Tốc độ kích động và lưu lượng không khí tỷ lệ đã được thiết lập ở 200 rpm và 1 VVM dưới nồng độ oxy hòa tan (DOC) chế độ không kiểm soát được, tương ứng. Dưới chế độ kiểm soát DOC, DOC đã được thiết lập ở mức 10, 20, 30, 40, và 50% bằng cách tự động điều chỉnh tốc độ kích động của 200-800 rpm và luồng không khí tỷ lệ 1-2 VVM.
Phân tích
các tế bào phát triển được theo dõi bằng cách đo mật độ quang ở 600 nm. Các mẫu được pha loãng với nước cất cho đến khi giá trị đo được trong phạm vi tuyến tính của máy quang phổ (Unico, UV-2100). Để đo trọng lượng tế bào khô (DCW), các tế bào được thu thập bằng cách ly tâm (10,000g cho 10 phút) trong ống cân trước, các viên rửa ba lần với nước cất, sau đó sấy khô ở 80 C cho đến khi họ đạt đến một khối lượng không đổi . Một OD600 của 1.0 là tương đương với 0,4 g L-1 DCW.