Trypsin-like proteases from the mid

Trypsin-like proteases from the midgut of Anticarsia gemmatalis Hübner (Lepidoptera: Noctuidae) were purified on an aprotinin-agarose column equilibrated with 0.01 M Tris–HCl containing 5 mM CaCl2 (pH 7.5). The yield was 66.7% with a purification factor of 107 and a final specific activity of 6.88 mM/min/mg protein with the substrate N-α-benzoyl-l-Arg-p-nitroanilide (l-BApNA). The purified fraction showed three bands with proteolytic activity and molecular weights of 66,000, 71,000 and 91,000 (sodium dodecyl sulphate (SDS)-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE)). Enzyme specificity assays were carried out using seven synthetic peptides containing 13 amino acid residues, but differing only on the 5th residue (K, R, Y, L, W or P). Peptide cleavage takes place only with amino acids K or R at the 5th position, which is typical of trypsin. The partially purified enzymes hydrolyzed casein and the synthetic trypsin substrates l-BApNA and N-α-p-tosyl-l-Arg methyl ester (l-TAME). Higher activity was observed at pH 8.5 and 35 °C when using l-BApNA as substrate and at pH 8.0 and 30 °C when using l-TAME. Maximum enzyme activity against l-BApNA was obtained with 20 mM CaCl2 in the reaction mixture. The partially purified enzymes showing trypsin activity were sensitive to inhibition by ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), phenylmethyl sulphonyl fluoride (PMSF), N-α-tosyl-l-lysine chloromethyl ketone (TLCK), benzamidine and aprotinin. Highest inhibition was obtained with TLCK and benzamidine. KM values obtained were 0.32 mM for l-BApNA and 52.5 μM for l-TAME.

Kết quả (Việt) 1:

Giống như trypsin protease từ midgut Anticarsia gemmatalis Hübner (Lepidoptera: Noctuidae) đã được tinh khiết vào một cột aprotinin-agarose equilibrated với 0,01 M Tris-HCl có chứa 5 mM CaCl2 (pH 7,5). Sản lượng là 66,7% với một yếu tố thanh lọc của 107 và một hoạt động cụ thể cuối cùng của 6.88 mM/min/mg protein với bề mặt N-α-benzoyl-l-Arg-p-nitroanilide (l-BApNA). Các phần tinh khiết cho thấy ba ban nhạc với proteolytic hoạt động và trọng lượng phân tử của 66,000, 71,000 và 91.000 (natri dodecyl sunfat (dùng mũi SDS)-polyacrylamide gel điện (trang)). Enzym đặc trưng thử nghiệm đã được thực hiện bằng cách sử dụng 7 tổng hợp peptide có dư lượng axit amin 13, nhưng khác nhau chỉ trên các dư lượng 5 (K, R, Y, L, W hoặc P). Peptide cát khai diễn ra chỉ với axit amin K hoặc R tại vị trí 5 là điển hình của trypsin. Một phần tinh khiết enzym thủy phân đạm casein và tổng hợp trypsin chất l-BApNA và N-α-p-tosyl-l-Arg methyl ester (l chế NGỰ). Cao hoạt động được quan sát thấy ở pH 8.5 và 35 ° C khi sử dụng l-BApNA như là chất nền và pH 8.0 và 30 ° C khi sử dụng chế NGỰ l. Hoạt động của enzyme tối đa đối với l-BApNA nhận được 20 mm CaCl2 trong phản ứng hỗn hợp. Các enzym tinh khiết một phần đang hiện hoạt động trypsin được nhạy cảm với sự ức chế bởi ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), phenylmethyl sulphonyl florua (PMSF), N-α-tosyl-l-lysine xét nghiệm ketone trong chloromethyl (TLCK), benzamidine và aprotinin. Ức chế cao nhất thu được với TLCK và benzamidine. KM giá trị thu được là 0,32 mM l-BApNA và 52.5 μM cho chế NGỰ l.

Kết quả (Việt) 2:

Protease Trypsin giống như từ ruột giữa của Anticarsia gemmatalis Hübner (Lepidoptera: Noctuidae) đã được tinh chế trên một cột aprotinin-agarose được cân bằng với 0,01 M Tris-HCl có chứa 5 mM CaCl2 (pH 7,5). Năng suất là 66,7% với một yếu tố thanh lọc của 107 và một hoạt động cụ thể cuối cùng của 6,88 mM / min / mg protein với các chất nền N-α-benzoyl-l-Arg-p-nitroanilide (l-BApNA). Phần tinh khiết cho thấy ba ban nhạc với hoạt động phân giải protein và trọng lượng phân tử 66.000, 71.000 và 91.000 (sodium dodecyl sulfate (SDS) -polyacrylamide gel electrophoresis (TRANG)). Xét nghiệm đặc hiệu enzyme đã được tiến hành sử dụng bảy peptide tổng hợp chứa 13 amino acid, nhưng chỉ khác nhau về dư lượng lần thứ 5 (K, R, Y, L, W hoặc P). Peptide tách diễn ra chỉ với các axit amin K hay R ở vị trí thứ 5, đó là điển hình của trypsin. Các enzym thủy phân một phần tinh khiết casein và các chất trypsin tổng hợp l-BApNA và N-α-p-tosyl-l-Arg methyl ester (l-TAME). Hoạt động cao hơn được quan sát thấy ở pH 8,5 và 35 ° C khi sử dụng l-BApNA như là chất nền và ở pH 8.0 và 30 ° C khi sử dụng l-TAME. Hoạt động của enzyme tối đa chống l-BApNA đã thu được với 20 mM CaCl2 trong hỗn hợp phản ứng. Các enzym phần tinh khiết cho thấy hoạt tính của trypsin rất nhạy cảm với sự ức chế của axit ethylenediaminetetraacetic (EDTA), phenylmethyl sulphonyl fluoride (PMSF), N-α-tosyl-l-lysine chloromethyl ketone (TLCK), benzamidine và aprotinin. Ức chế cao nhất được thu thập với TLCK và benzamidine. Giá trị thu được là 0,32 KM mM cho l-BApNA và 52,5 mM cho l-TAME.