Under high centrifugal force, a sol

Under high centrifugal force, a solution of cesium chloride (CsCl) molecules will dissociate, and the heavy Cs+ atoms will be forced towards the outer end of the tube, thus forming a shallow density gradient (Figure-7(a)). DNA molecules placed in this gradient will migrate to the point where they have the same density as the gradient (the isopycnic point). Macromolecules present in the CsCl solution when it is centrifuged will form bands at distinct points in the gradient. The gradient is sufficient to separate types of DNA with slight differences in density due to differing (G+C) content, or physical form (e.g., linear versus circular molecules). Density gradient centrifugation in the presence of ethidium bromide (EtBr)can be used to separate supercoiled DNA from non-supercoiled molecules (Figure-7(b)). EtBr binds to DNA molecules by intercalating between adjacent base pairs, causing partial unwinding of the double helix. Density gradient centrifugation can separate DNA, RNA and protein and is an alternative to phenol extraction and ribonuclease treatment for DNA purification.

EtBr-Cscl density gradient centrifugation is a very efficient method for obtaining pure plasmid DNA. When a cleared lysate is subjected to this procedure, plasmids band at a distinct point, separated from the linear bacterial DNA, with the protein floating at the top of the gradient and RNA pelleted at the bottom. The position of the DNA bands can be seen by shining ultraviolet radiation on the tube, which causes the bound EtBr to fluoresce. The EtBr bound to the plasmid DNA is extracted with n-butanol (Figure-7(c)) and the CsCl removed by dialysis (Figure-7(d)). The resulting plasmid preparation is pure and can be used in cloning.

Kết quả (Việt) 1:

Lực ly tâm cao, giải pháp của cesium clorua (CsCl) phân tử sẽ chia rẻ và nặng Cs + nguyên tử sẽ bị buộc phải hướng tới kết thúc bên ngoài của ống, vì vậy hình thành một nông mật độ gradient (Figure-7(a)). Phân tử DNA được đặt ở độ dốc này sẽ di chuyển đến điểm mà họ có mật độ tương tự như các gradient (isopycnic điểm). Đại phân tử có trong các giải pháp CsCl khi nó ly sẽ hình thành các ban nhạc tại điểm khác biệt trong các gradient. Gradient là đủ để phân tách các loại ADN bằng các khác biệt nhỏ trong mật do khác nhau (G + C) nội dung, hoặc mẫu vật lý (ví dụ, tuyến tính so với thông tư phân tử). Mật độ gradient số sự hiện diện của ethidium bromua (EtBr) có thể được sử dụng để tách supercoiled ADN từ các phân tử không supercoiled (Figure-7(b)). EtBr liên kết với các phân tử DNA của intercalating giữa các cặp cơ sở lân cận, gây ra một phần thư giãn của xoắn kép. Mật độ gradient số có thể tách DNA, RNA và protein và là một thay thế cho chiết xuất phenol và ribonuclease điều trị làm sạch DNA. EtBr-Cscl số mật độ gradient là một phương pháp rất hiệu quả cho việc thu thập DNA tinh khiết plasmid. Khi một xóa lysate phải chịu các thủ tục này, một plasmid band tại một điểm khác biệt, tách ra từ vi khuẩn DNA tuyến tính, với các protein nổi ở đầu của gradient và RNA pelleted ở phía dưới. Vị trí của các ban nhạc DNA có thể được nhìn thấy bằng cách chiếu xạ tia cực tím trên ống, mà nguyên nhân EtBr bị ràng buộc để fluoresce. EtBr sự ràng buộc để plasmid DNA được chiết xuất với n-butanol (Figure-7(c)) và CsCl gỡ bỏ bằng cách lọc máu (Figure-7(d)). Chuẩn bị plasmid kết quả là tinh khiết và có thể được sử dụng trong nhân bản.