Assay of Total Reduced Glutathione

Assay of Total Reduced Glutathione Level (GSH)
A colorimetric assay using Ellman’s reagent was used for this test. The assay employs a kinetic enzymatic recy-cling assay based on the oxidation of GSH by 5,5’-dithiobis(2-nitrobenzoic acid) [DTNB] to measure the total
glutathione (tGSH) content of biological samples. After 24 h of treatment with the test compounds, cells were
rinced twice with PBS, sonicated for 30 min and scrapped until detachment. 500 µl of the lysate was centrifuged
for 5 min at 400 rpm. 100 µl of supernatant from each sample were used to perform the test and put in a
96-wells plate. 100 µl of DTNB 1.26 mM and 50 µl of GSH reductase 2.5 U/ml were added to the test samples.
The plate was incubated 5 min at room temperature before adding 50 µl of NADP 0.72 mM to each sample. The
absorbance was monitored directly after at 340 nm for 5 min (recording 10 time points) with an automated spec-trophotometer Labsystemsi EMS Reader MF (Ramat-Gan, Israel). The experiment was carried out in triplicate.

Kết quả (Việt) 1:

Khảo nghiệm tổng số giảm Glutathione cấp (GSH)Một khảo nghiệm colorimetric bằng cách sử dụng của Ellman tinh khiết đã được sử dụng cho thử nghiệm này. Các khảo nghiệm sử dụng một enzym recy bám khảo nghiệm động dựa trên quá trình oxy hóa của GSH 5, 5'-dithiobis(2-nitrobenzoic acid) [DTNB] để đo lường tổng số Glutathione (tGSH) nội dung mẫu sinh học. Sau 24 h của điều trị với các hợp chất thử nghiệm, tế bào đã rinced hai lần với PBS, sonicated trong 30 phút và tháo dỡ cho đến đội. 500 ml của các lysate được ly trong 5 phút ở 400 rpm. 100 ml supernatant từ mỗi mẫu được sử dụng để thực hiện các bài kiểm tra và đặt trong một 96-wells tấm. 100 ml DTNB 1.26 mM và 50 ml của GSH reductase 2.5 U/ml đã được thêm vào các mẫu thử nghiệm. Các tấm được ủ 5 phút ở nhiệt độ phòng trước khi thêm 50 ml NADP 0.72 mM vào mỗi mẫu. Các hấp thu đã được giám sát trực tiếp sau khi tại 340 nm cho 5 phút (ghi 10 điểm thời gian) với một spec-trophotometer tự động Labsystemsi EMS Reader MF (Ramat Gan, Israel). Các thử nghiệm được thực hiện trong triplicate.

Kết quả (Việt) 2:

Khảo nghiệm của Total Giảm Glutathione Level (GSH)
Một thử nghiệm so màu sử dụng thuốc thử Ellman đã được sử dụng để thử nghiệm này. Xét nghiệm này sử dụng một enzyme Recy-bám khảo nghiệm động học dựa trên quá trình oxy hóa của GSH bởi 5,5'-dithiobis (axit 2-nitrobenzoic) [DTNB] để đo tổng
glutathione (tGSH) nội dung của các mẫu sinh học. Sau 24 h của điều trị bằng các hợp chất thử nghiệm, các tế bào được
rinced hai lần với PBS, âm trong 30 phút và loại bỏ cho đến khi bong. 500 ml lysate ly tâm
trong 5 phút ở 400 rpm. 100 ml nước nổi từ mỗi mẫu được sử dụng để thực hiện các bài kiểm tra và đặt trong một
tấm 96-giếng. 100 ml DTNB 1,26 mM và 50 ml GSH reductase 2,5 U / ml đã được thêm vào các mẫu thử nghiệm.
Các tấm được ủ trong 5 phút ở nhiệt độ phòng trước khi thêm 50 ml NADP 0,72 mM mỗi mẫu. Việc
hấp thụ được theo dõi trực tiếp sau khi ở 340 nm trong 5 phút (ghi 10 điểm thời gian) với một spec-trophotometer tự động Labsystemsi EMS đọc MF (Ramat-Gan, Israel). Thí nghiệm được thực hiện trong ba lần.