The preparation of protein bioconju

The preparation of protein bioconjugates has been largely dependent on the development of selective chemistries that are orthogonal to the diverse functionalities present in a protein. Here, we report a new method for C-terminus-directed modification of recombinant proteins. The method is based on the thioacid/azide amidation reaction. Essentially, hydrothiolytic cleavage of the thioester intermediate in protein splicing yields a recombinant protein with a unique thioacid group at the C-terminus, which is then chemoselectively amidated with an electron-poor organic azide carrying a biofunctional tag. The small ubiquitin protein was used as a model system to demonstrate the utility of this new bioconjugation method. C-terminal PEGylation or biotinylation of ubiquitin was readily achieved through amidation of ubiquitin thioacid with a sulfonazide-functionalized PEG or biotin derivative. Our data validate that thioacid/azide amidation is a mechanistically novel and practically useful method for site-selective protein modification.

Kết quả (Việt) 1:

Việc chuẩn bị của protein bioconjugates đã phần lớn phụ thuộc vào sự phát triển của chemistries chọn lọc được trực giao cho các chức năng đa dạng hiện diện trong một protein. Ở đây, chúng tôi báo cáo một phương pháp mới cho C-terminus chỉ đạo sửa đổi của protein tái tổ hợp. Các phương pháp dựa trên phản ứng amidation thioacid/Azua. Về cơ bản, hydrothiolytic cát thioester trung gian trong protein chế sản lượng protein tái tổ hợp với một nhóm độc đáo thioacid tại C-terminus, sau đó là chemoselectively amidated với một Azua hữu cơ điện tử-nghèo, mang theo một thẻ biofunctional. Protein nhỏ ubiquitin được sử dụng như là một mô hình hệ thống để chứng minh các tiện ích của phương pháp này bioconjugation mới. C-ga PEGylation hoặc biotinylation của ubiquitin dễ dàng đạt được thông qua amidation của ubiquitin thioacid với hàm PEG hoặc biotin ngành sulfonazide. Dữ liệu của chúng tôi xác nhận rằng thioacid/Azua amidation là một phương pháp mechanistically tiểu thuyết và thực tế hữu ích cho các trang web lựa chọn protein sửa đổi.

Kết quả (Việt) 2:

Việc chuẩn bị bioconjugates protein đã được phần lớn phụ thuộc vào sự phát triển của chất hóa học có chọn lọc mà là trực giao với các chức năng đa dạng hiện diện trong một protein. Ở đây, chúng tôi báo cáo một phương pháp mới để sửa đổi C-terminus-đạo của protein tái tổ hợp. Phương pháp này dựa trên phản ứng amin hoá thioacid / azit. Về cơ bản, sự phân tách hydrothiolytic của các trung gian thioester trong nối protein mang lại một protein tái tổ hợp với một nhóm thioacid độc đáo tại C-ga cuối, sau đó được chemoselectively amidated với một azide hữu electron nghèo mang theo một thẻ biofunctional. Các protein ubiquitin nhỏ đã được sử dụng như một hệ thống mô hình để chứng minh công dụng của phương pháp bioconjugation mới này. PEGylation C-thiết bị đầu cuối hoặc biotinylation của ubiquitin được dễ dàng đạt được thông qua amin hoá của ubiquitin thioacid với một sulfonazide-chức hóa PEG hoặc biotin phái sinh. dữ liệu của chúng tôi xác nhận rằng thioacid / amin hoá azit là một phương pháp mechanistically tiểu thuyết và thực tế hữu ích cho sửa đổi protein trang web có chọn lọc.

Kết quả (Việt) 3:

Protein trong sinh học đã xây dựng phần lớn phụ thuộc vào sự chọn lọc các chất hóa học của protein, là chức năng khác trong phát triển hiện trực.Ở đây, chúng ta c-terminus-directed sửa đổi báo cáo phương pháp mới tái cấu trúc protein.Phương pháp này dựa trên thio / azido amide axit hóa.Về cơ bản, trong protein cắt xén của este hydrothiolytic tách giữa lưu huỳnh tạo ra một thiết bị đầu cuối của một đặc thio Group tập hợp protein, và hóa chất điện tử hữu cơ với sự lựa chọn sai - azido mang dấu hiệu sinh học. protein nhỏ như hệ thống mô hình để chứng minh mới này đánh dấu sinh học phương pháp thực tiễn.C - thiết bị đầu cuối hay sửa đổi biotin hóa hóa là dễ thực hiện, thông qua với sulfonazide thio amide quan năng hóa PEG hay biotin phái sinh.Dữ liệu của chúng tôi cho thấy, thio amide là một thợ máy / điệp mới mẻ của trang web thực tế thay đổi tính cách có chọn lọc của protein.