Virulence genes and serogrouping.A

Virulence genes and serogrouping.
A multiplex PCR to detect genes for F18 (F107), F41, F4 (K88), F5 (K99), and F6 (987P) fimbriae; heat-stable enterotoxins a and b (STa, STb), heat-labile enterotoxin, and Stx2 was performed on all of the isolates (4). The Stx2 primers also detected the edema disease variant, Stx2e. Strains were serogrouped using standard methods to determine if they belonged to serogroups commonly associated with edema disease (O138, O139, and O141) or to serogroup O147 (3). Typing for the H antigen was performed on representative strains by the E. coli Reference Center at Penn State University.

PFGE.
All of the serogroup O147 isolates recovered from outbreaks of edema disease between 1996 and 2001 (strain set 1) were analyzed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) using standard methods (14). Briefly, the strains were grown overnight in tryptic soy broth, washed, and embedded in agarose plugs. The plugs were treated with lysozyme (1 mg/ml) in a lysis buffer with 10 mM Tris (pH 7.5), 50 mM NaCl, 100 mM EDTA (pH 8.0), 0.2% sodium deoxycholate, and 0.5% (wt/vol) N-lauroylsarcosine for 2 h at 37°C and then with proteinase K (0.5 mg/ml) in a buffer with 0.5 mM EDTA (pH 8.0) and 1% (wt/vol) N-lauroylsarcosine overnight at 55°C. The plugs were washed with 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride and 10 mM Tris-1 mM EDTA buffer (pH 8.0) and then digested with 5 U of XbaI restriction enzyme overnight at 37°C. The DNA was separated using a 1% agarose gel on a CHEF-DR II system (Bio-Rad, Hercules, CA) with the following settings: initial switch time, 2.16 s; final switch time, 54.17 s; run time, 22 h at 150 V.

Kết quả (Việt) 2:

. Gen độc lực và serogrouping
Một PCR multiplex để phát hiện gen cho F18 (F107), F41, F4 (K88), F5 (K99), và F6 (987P) fimbriae; nhiệt ổn định độc tố a và b (STA, STB), enterotoxin nhiệt không ổn định, và stx2 được thực hiện trên tất cả các chủng (4). Các mồi stx2 cũng phát hiện các biến thể bệnh phù nề, Stx2e. Chủng này được serogrouped sử dụng phương pháp tiêu chuẩn để xác định xem họ thuộc nhóm huyết thanh thường liên quan đến bệnh phù (O138, O139, O141 và) hoặc nhóm huyết thanh O147 (3). Typing cho các kháng nguyên H đã được thực hiện trên các chủng đại diện của Trung tâm tham khảo E. coli tại Đại học. Penn State

PFGE.
Tất cả các nhóm huyết thanh O147 phân lập được thu hồi từ sự bùng phát của bệnh phù nề giữa những năm 1996 và 2001 (chủng tập 1) được phân tích bởi pulsed- điện trường gel (PFGE) sử dụng phương pháp tiêu chuẩn (14). Tóm lại, các chủng được trồng qua đêm trong canh đậu nành tryptic, rửa sạch, và nhúng vào trong phích cắm agarose. Các phích cắm đã được điều trị với lysozyme (1 mg / ml) trong một bộ đệm ly giải với 10 mM Tris (pH 7.5), 50 mM NaCl, 100 mM EDTA (pH 8,0), 0,2% natri deoxycholate, và 0,5% (wt / vol) N-lauroylsarcosine trong 2 giờ ở 37 ° C và sau đó với proteinase K (0,5 mg / ml) trong một bộ đệm với 0,5 mM EDTA (pH 8,0) và 1% (wt / vol) N-lauroylsarcosine qua đêm ở 55 ° C. Các phích cắm đã được rửa sạch với 1 mM phenylmethylsulfonyl florua và 10 mM Tris-1 mM EDTA đệm (pH 8,0) và sau đó tiêu hóa với 5 U của XbaI hạn chế enzyme qua đêm ở 37 ° C. DNA được tách ra bằng cách sử dụng agarose gel 1% trên một hệ thống CHEF-DR II (Bio-Rad, Hercules, CA) với các thiết lập sau đây: thời gian chuyển đổi ban đầu, 2,16 s; Hiện tắc cuối cùng, 54,17 s; chạy thời gian, 22 h ở 150 V.