End labellingOnly EcoRI compatible

End labelling

Only EcoRI compatible primers were labelled. Sufficient primer was

prepared for 35 selective amplifications by combining 3.5 μl δ-[33P]

ATP (1.11×1014 Bq/mmol), 3.5 μl of 10×T4 buffer (250 mM TRIS-
HCl, pH 7.5, 100 mM MgCl2, 50 mM DTT, 5 mM spermidine),

4.7 μl E (plus three selective nucleotides) primer (50 ng/μl stock),

0.9 μl T4 kinase (10 units/ml) and 22.4 μl H2O (final volume 35 μl).

Samples were incubated at 37°C for 30 min then heated to 70°C for

10 min to stop the reaction.

Kết quả (Việt) 1:

Kết thúc ghi nhãn

chỉ EcoRI tương thích chất nền, mồi được gắn nhãn. Đủ mồi là

chuẩn bị cho 35 amplifications chọn lọc bằng cách kết hợp 3.5 μl δ-[33 P]

ATP (1.11 × 1014 Bq/mmol), 3.5 μl 10 × T4 đệm (250 mM TRIS-
HCl, pH 7.5, 100 mM MgCl2, 50 mM DTT, 5 mM spermidine),

7.5 μl E (cộng với ba chọn lọc nucleotide) mồi (50 ng/μl cổ),

0.9 μl T4 kinase (10 đơn vị/ml) và 22.4 μl H2O (cuối cùng khối lượng 35 μl).

mẫu đã được ủ tại 37° C trong 30 phút sau đó đun nóng đến 70° C cho

10 phút để ngăn chặn phản ứng.

Kết quả (Việt) 2:

Ghi nhãn Cuối Chỉ sơn lót thích hợp EcoRI được dán nhãn. Mồi đủ đã được chuẩn bị cho 35 khuyếch đại có chọn lọc bằng cách kết hợp 3,5 ml δ- [33P] ATP (1.11 × 1014 Bq / mmol), 3,5 ml 10 × T4 đệm (250 mM Tris- HCl, pH 7.5, 100 mM MgCl2, 50 mM DTT, 5 mM spermidine), 4,7 ml E (cộng với ba nucleotide chọn lọc) mồi (50 ng / ml chứng khoán), 0,9 ml T4 kinase (10 đơn vị / ml) và 22,4 ml H2O (tích cuối cùng 35 ml). Các mẫu được ủ ở 37 ° C trong 30 phút sau đó đun nóng đến 70 ° C trong 10 phút để dừng phản ứng.