Cuba. 2 Facultad de Biología, Unive

Cuba.
2 Facultad de Biología, Universidad de La Habana, UH. Calle 25 #455 e/ J y H, Vedado, Plaza, La Habana, Cuba.




ABSTRACT

The present work estimated the genetic variability and relatedness index of the fifth stock of Pacific white shrimp, Litopenaeus vannamei, imported into Cuba for farming purposes from the US Shrimp Improvement System (SIS). Genetic variability was estimated by genotyping 33 samples for four microsatellite loci: M1, Pvan 1815, Pvan 0040 and Pvan 1758. This stock had average expected and observed heterozygosities of 0.37 and 0.27 respectively; the lowest of all stocks previously introduced in Cuba. The above, together with the low amount of allelic variants detected for each microsatellite, was suggestive of low genetic variability. In addition, pairwise relatedness coefficients clustered around unity, indicating a high degree of consanguinity. Taken as a whole, the data suggests that this breeding stock should be crossed first with other individuals from a different source or with higher genetic variability.

Keywords: genetic variability, Litopenaeus vannamei, microsatellites, shrimp.


RESUMEN

Se estimó la variabilidad genética y el índice de parentesco entre lotes de camarón blanco del Pacífico, Litopenaeus vannamei, introducidos por quinta ocasión en Cuba, procedentes del Centro de mejora del camarón, de Estados Unidos (Shrimp Improving System: SIS), para su cultivo. La variabilidad genética se estimó mediante el genotipo de 33 muestras con cuatro loci microsatélites: M1, Pvan 1815, Pvan 0040 y Pvan 1758. El quinto lote de Litopenaeus vannamei tuvo los valores promedios de heterocigosidad esperada y observada, más bajos de todos los introducidos en Cuba: 0.37 y 0.27, respectivamente. Esto, unido a la poca cantidad de variantes alélicas para cada región microsatélite, indica una escasa variabilidad genética. Los valores del coeficiente de parentesco alrededor de la unidad expresan una alta consanguinidad. Todo ello sugiere el cruce de los individuos de esta introducción con otros de diferente origen o más variables genéticamente.

Palabras clave: variabilidad genética, Litopenaeus vannamei, microsatélites, camarón.










INTRODUCTION

Shrimp, as many other fishing resources, has received the impact of overfishing and environmental deterioration. Natural populations have shrunk, turning shrimp farming into a useful alternative for the obtention of this important protein source.

During the year 2003, two stocks of Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) from the US Shrimp Improvement System (SIS), denominated here as scotcks 1 and 2, were introduced for the first time in Cuba [1], followed by the gradual implementation of techniques for the handling, health, nutrition and assessment of the genetic variability of this species in hatcheries and farms previously involved with Litopenaeus schmitti, an autochthonous shrimp. Two additional stocks were introduced during successive years (denominated here as stocks 3 and 4), all characterized using microsatellite markers [2, 3].

A fifth stock of this species, obtained from the same source, was introduced in October 2008. Its genetic composition and allele polymorphism are yet to be exa- mined, however. Although their consanguinity was low, the genetic variability of stocks 1 and 2 was already smaller than in natural populations [2]; stocks 3 and 4, likewise, exhibited a decreased genetic variability [3].

Using allozymes or microsatellites and a number of different shrimp species, it has been demonstrated that loss of genetic variability correlates with significant decreases in productivity (as for instance in Marsupenaeus japonicus [4], Litopenaeus stylirostris [5], P. monodon [6] and L. vannamei [7, 8]). The use of microsatellite markers, however, is better suited for the follow-up and assessment of genetic variability in farmed populations, due to its higher resolution and sensitivity [2, 9].

The objectives of the present work, therefore, are to determine genetic variability and relatedness indexes in a sample from the fifth stock of L. vannamei introduced in Cuba, employing four microsatellite loci and comparing them with all of the previously introduced stocks.

MATERIALS AND METHODS

Sampling

Pleopod samples were taken from the fourth pair, between the exopodito and the endopodito, of 40 randomly chosen individuals evenly split between males and females. The sampling procedure was performed on previously acclimatized shrimp from the hatcheries of the Shrimp Genetic Center in Mariel, Cuba.

Genotyping of microsatellite loci

DNA extraction procedures, microsatellite loci selected for analysis (M1, obtained by Wolfus et al. [8], Pvan 1758, Pvan 1815 and Pvan 0040, isolated by Cruz et al.[10]), amplification programs and electrophoresis conditions for genotyping runs have all been described in Borrell et al. [2].

DNA was extracted with 5% Chelex resin, and the amplified fragments were separated under a running voltage of 2000 mV in 6% bis-acrylamide/acrylamide gels which were later stained with 0.1% silver nitrate-0.05% formaldehyde, fixed with 10% acetic acid and developed with 3% sodium carbonate/0.05% formaldehyde and 20 µg/mL sodium thiosulfate. Samples previously genotyped by these authors [2] were used as controls for each microsatellite locus, with sizes ranging from 206 to 240 for M1, 140 to 146 for Pvan 0040, 110 to 136 for Pvan 1815 and 174 to 188 for Pvan 1758. PGEM® was also included as a conventional size marker.

Statistical processing

Determining the number of alleles per locus, the frequency of each allele and the values for observed (Ho) and expected (He, according to Nei [11]) heterozygosity for each locus, as well as whether the populations were in Hardy-Weinberg equilibrium, was performed with the GeneAlEx (version 6.1) software application [12]. Any locus with at least two alleles where the frequency of the most common allele did not exceed 95% was considered polymorphic [13].

Deviations from equilibrium were corroborated by calculating FIS [14], following the formula FIS = 1 - (Ho/He), with the FSTAT software application (version 2.9.3) [15]. Although it depends on population size, it is unaffected by the presence of multiple alleles per locus, the number of individuals per population or the number of populations.

The genetic relatedness coefficient (r) [16] for a single pair of individuals was also calculated with GeneAlEx ver. 6.1 [12]. This coefficient is calculated for codominant markers, using the following formula:






where: x stands for the individuals; k for the loci; l for allelic positions (two for diploids and one for haploids), Px is the frequency of individual “x” for locus k and allelic position l, Py is the frequency of allele “y” in the group or individual compared to x; and P* is the total frequency of the allele in the population. The genetic relatedness coefficient must be r ≤ 0 for non-related individuals; r = 0.25 for half brothers and r ≥ 0.5 for brothers [16].



RESULTS AND DISCUSSION

Genetic variability of the fifth stock of L. vannamei compared to previous stocks

The present work analyzed the genetic variability of the fifth stock of L. vannamei introduced in Cuba for shrimp farming, using four microsatellite loci: M1, isolated from L. vannamei [8], and Pvan 0040, Pvan 1758 and Pvan 1815, isolated from the same species [10].

The table contains the main calculated parameters: number of alleles (Na), observed and expected heterozygosity (Ho and He) and deviations from Hardy-Weinberg equilibrium (FIS), together with the values estimated during previous studies. According to the results of the analysis of linkage disequilibrium with FSTAT (version 2.9.3), these loci are not genetically linked in L. vannamei [2, 9, 17].

Expected and observed heterozygosity

Average observed heterozygosity for the fifth stock of L. vannamei introduced in Cuba yielded a value of 0.271; the lowest figure compared to previous introduced stocks (Figure 1). In addition, this value is below all previous intervals reported by other researchers employing microsatellites to study peneaid shrimps.

A now classic review [9] on the use of microsatellite loci for natural populations from four different species described observed heterozygosities that ranged from 0.425 to 0.964, yielding a mean of 0.666 which fell below the expected average (0.927). The same author observed heterozygosities ranging from 0.45 to 1.00 for three species of farmed peneaids, yielding a mean of 0.594, just below the mean for expected heterozygosity (0.674).

However, studies on P. stylirostris cultured for 22 and 24 generations [5] have produced much smaller values: Ho = 0.32 to 0.48; He = 0.46 to 0.61. Still, the values from the fifth stock introduced in Cuba (Ho = 0.271; He = 0.367) are below these figures (Figure 1), even though heterozygosity for all previous introductions of L. vannamei is within the above intervals. However, we agree that heterozygosity is an imperfect measure for variability, as it can yield high values with just two alleles, and, therefore, their quality also matters [17-19].

Allele frequencies and deviations from Hardy-Weinberg equilibrium

One single locus, Pvan 0040, is responsible to a large extent for the decrease in heterozygosity of the fifth stock, as it appears to be monomorphic in this case (as it did for the fourth Litopenaeus vannamei introduction). The other remaining three loci are still polymorphic, with five alleles each for M1 and Pvan 1758 and four alleles for Pvan 1815.

Allele frequencies for the loci of the fifth stock are shown in figure 2. Molecular weights for the observed alleles coincide within the intervals published by other authors, including those who first isolated them from a genomic library [10] and others who have later used them to characterize populations of this species [2, 3, 8, 17-19].

In the present work th

Kết quả (Việt) 1:

Cuba. 2 Facultad de Biología, Universidad de La Habana, UH. Calle 25 #455 e / J y H, Vedado, Plaza, La Habana, Cuba. TÓM TẮT Công việc hiện nay ước tính di truyền biến đổi và relatedness chỉ số của các cổ phiếu thứ năm của Thái Bình Dương trắng tôm, Litopenaeus vannamei, nhập khẩu vào Cuba cho nông nghiệp mục đích từ chúng tôi tôm cải thiện hệ thống (SIS). Biến đổi di truyền được ước tính của gen 33 mẫu cho bốn microsatellite loci: M1, Pvan năm 1815, Pvan 0040 và Pvan 1758. Cổ phiếu này có trung bình dự kiến và quan sát heterozygosities 0,37 và 0,27 tương ứng; thấp nhất của tất cả các cổ phiếu đã được giới thiệu ở Cuba. Ở trên, cùng với số lượng thấp của các biến thể allelic phát hiện cho mỗi microsatellite, được gợi của thấp biến đổi di truyền. Ngoài ra, Hệ số cử relatedness tập trung xung quanh thành phố thống nhất, chỉ ra một mức độ cao của consanguinity. Thực hiện như một toàn thể, các dữ liệu cho thấy rằng cổ phiếu chăn nuôi này nên được vượt qua lần đầu tiên với các cá nhân từ một nguồn khác nhau hoặc với sự biến đổi di truyền cao. Từ khoá: biến đổi di truyền, Litopenaeus vannamei, microsatellites, tôm. RESUMEN SE estimó la variabilidad genética y el índice de parentesco entre lotes de camarón blanco del Pacífico, Litopenaeus vannamei, introducidos por quinta ocasión en Cuba, procedentes del Centro de mejora del camarón, de Estados Unidos (tôm cải thiện hệ thống: SIS), para su cultivo. La variabilidad genética se estimó mediante el genotipo de 33 muestras con cuatro loci microsatélites: M1, Pvan năm 1815, Pvan 0040 y Pvan 1758. El quinto lote de Litopenaeus vannamei tuvo los valores promedios de heterocigosidad esperada y observada, más bajos de todos los introducidos en Cuba: 0,37 y 0,27, respectivamente. Esto, unido a la poca cantidad de variantes alélicas para cada región microsatélite, indica una escasa variabilidad genética. Los valores del coeficiente de parentesco alrededor de la unidad expresan una alta consanguinidad. Todo ello sugiere el cruce de los individuos de esta introducción con otros de diferente origen o más biến genéticamente. Palabras clave: variabilidad genética, Litopenaeus vannamei, microsatélites, camarón. GIỚI THIỆU Tôm, như nhiều nguồn lực khác của câu cá, đã nhận được tác động của suy thoái đánh bắt quá mức và môi trường. Quần thể tự nhiên đã thu nhỏ, biến tôm nuôi thành một thay thế hữu ích cho glucosidaza nguồn protein quan trọng này. Trong năm 2003, hai cổ phiếu của Thái Bình Dương trắng tôm (Litopenaeus vannamei) từ chúng tôi tôm cải thiện hệ thống (SIS), thanh toán bằng đồng ở đây như scotcks 1 và 2, đã được giới thiệu lần đầu tiên ở Cuba [1], tiếp theo là việc thực hiện dần dần của các kỹ thuật để xử lý, sức khỏe, dinh dưỡng và đánh giá của biến đổi di truyền của loài này ở trại và trang trại đã tham gia với Litopenaeus schmitti , một bản tôm. Hai cổ phiếu bổ sung đã được giới thiệu trong năm kế tiếp (chỉ tên ở đây như cổ phiếu 3 và 4), tất cả các đặc trưng bằng cách sử dụng microsatellite dấu [2, 3]. Một cổ phiếu thứ năm của loài này, thu được từ cùng một nguồn, được giới thiệu vào tháng 10 năm 2008. Thành phần di truyền và allele đa hình của nó là chưa là exa-khai thác, Tuy nhiên. Mặc dù của consanguinity là thấp, biến đổi di truyền của cổ phiếu 1 và 2 đã được nhỏ hơn trong quần thể tự nhiên [2]; cổ phiếu 3 và 4, tương tự như vậy, trưng bày một, giảm biến di truyền [3]. Sử dụng allozymes hoặc microsatellites và một số loài tôm khác nhau, nó đã được chứng minh rằng các tổn thất của biến đổi di truyền tương quan với giảm đáng kể trong sản xuất (đối với trường hợp trong Marsupenaeus japonicus [4], Litopenaeus stylirostris [5], P. sú [6] và L. kém [7, 8]). Việc sử dụng của các dấu hiệu microsatellite, Tuy nhiên, là phù hợp hơn cho việc theo dõi và đánh giá của các biến đổi di truyền trong quần thể nuôi, vì độ phân giải cao và nhạy cảm [2, 9]. Mục tiêu của công việc hiện tại, do đó, là để xác định di truyền chỉ số biến đổi và relatedness trong một mẫu từ các cổ phiếu thứ năm của L. vannamei giới thiệu ở Cuba, sử dụng bốn microsatellite loci và so sánh chúng với tất cả các cổ phiếu đã giới thiệu. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Lấy mẫu Pleopod mẫu đã được lấy từ các cặp thứ tư giữa exopodito và endopodito, của 40 cá nhân được lựa chọn ngẫu nhiên đều phân chia giữa Nam và nữ. Thủ tục lấy mẫu được thực hiện trên trước đây tolerant tôm từ trại của Trung tâm di truyền tôm ở Mariel, Cuba. Gen microsatellite loci DNA khai thác thủ tục, microsatellite loci được chọn để phân tích (M1, thu được bởi Wolfus et al. [8], Pvan 1758, Pvan năm 1815 và Pvan 0040, bị cô lập bởi Cruz et al.[10]), chương trình khuếch đại và điện tiết cho gen chạy tất cả đã được mô tả trong Borrell et al. [2]. DNA chiết xuất với 5% Chelex nhựa, và các mảnh vỡ khuếch đại đã được tách ra dưới một điện áp hoạt động của năm 2000 mV trong 6% bis-acrylamide/acrylamide gel được sau đó màu với 0.1% bạc nitrate-0.05% formaldehyde, cố định với 10% axit axetic và phát triển với 3% natri carbonate/0.05% formaldehyde và 20 μg/mL natri thiosunfat. Mẫu trước đó genotyped bởi các tác giả [2] được sử dụng như điều khiển cho mỗi quỹ tích microsatellite, với kích thước khác nhau, từ 206-240 cho M1, 140 để 146 cho Pvan 0040, 110 đến 136 cho Pvan năm 1815 và 174 để 188 cho Pvan 1758. PGEM ® cũng được bao gồm như là một điểm đánh dấu thường kích thước. Xử lý thống kê Xác định số alen một locus, tần số của mỗi allele và các giá trị cho quan sát (Ho) và dự kiến sẽ heterozygosity (ông, theo Nei [11]) cho mỗi locus, cũng như cho dù các quần thể đã ở trong cân bằng Hardy-Weinberg, được thực hiện với các ứng dụng phần mềm GeneAlEx (Phiên bản 6.1) [12]. Bất kỳ locus với ít nhất hai allele nơi tần số alen phổ biến nhất đã không vượt quá 95% được coi là bướu [13]. Độ lệch từ cân bằng được chứng bằng cách tính toán FIS [14], theo công thức FIS = 1 - (hồ / Anh), với các ứng dụng phần mềm FSTAT (Phiên bản 2.9.3) [15]. Mặc dù nó phụ thuộc vào kích thước dân số, nó là không bị ảnh hưởng bởi sự hiện diện của nhiều alen một locus, số lượng các cá nhân trên dân hoặc số điện thoại của người dân. Hệ số di truyền relatedness (r) [16] cho một cặp cá nhân cũng được xác định với GeneAlEx ver. 6.1 [12]. Hệ số này được tính cho codominant đánh dấu, bằng cách sử dụng công thức sau đây: nơi: x là viết tắt của các cá nhân; k cho loci; l cho các vị trí allelic (hai cho diploids) và một cho haploids, Px là tần số của vị trí cá nhân "x" cho locus k và allelic l, Py là tần số của alen "y" trong nhóm hoặc cá nhân so với x; và P * là tần số tổng của alen trong dân số. Hệ số di truyền relatedness phải là r ≤ 0 cho các cá nhân không liên quan; r = 0,25 cho anh em một nửa và r ≥ 0,5 cho anh em [16]. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Các biến đổi di truyền của các cổ phiếu thứ năm của L. kém so với trước đó cổ phiếu Công việc hiện nay phân tích biến đổi di truyền của các cổ phiếu thứ năm của L. vannamei giới thiệu ở Cuba cho tôm nuôi, sử dụng bốn microsatellite loci: M1, bị cô lập từ L. kém [8], và Pvan 0040, Pvan 1758 và Pvan năm 1815, bị cô lập từ cùng một loài [10]. Bảng chứa các tham số tính chính: số alen (Na), quan sát và dự kiến sẽ heterozygosity (hồ và ông) và độ lệch từ Hardy-Weinberg cân bằng (FIS), cùng với các giá trị ước tính trong nghiên cứu trước đây. Theo kết quả phân tích liên kết disequilibrium với FSTAT (Phiên bản 2.9.3), các loci được không di truyền được liên kết trong L. kém [2, 9, 17]. Dự kiến và quan sát heterozygosity Là quan sát heterozygosity cho các cổ phiếu thứ năm của L. vannamei giới thiệu ở Cuba mang lại giá trị của 0.271; Các con số thấp nhất so với cổ phiếu giới thiệu trước đó (hình 1). Ngoài ra, giá trị này là dưới đây tất cả khoảng thời gian trước báo cáo của các nhà nghiên cứu sử dụng microsatellites để nghiên cứu peneaid tôm. Một xem xét kinh điển [9] về việc sử dụng microsatellite loci cho các quần thể tự nhiên từ bốn loài khác nhau được mô tả quan sát heterozygosities mà trải dài từ 0.425 để 0.964, năng suất một trung bình của 0,666 mà đã giảm dưới mức trung bình dự kiến (0.927). Cùng một tác giả quan sát heterozygosities khác nhau, từ 0,45 1,00 cho ba loài nuôi peneaids, năng suất một trung bình của 0.594, chỉ dưới đây có nghĩa là cho dự kiến heterozygosity (0.674). However, studies on P. stylirostris cultured for 22 and 24 generations [5] have produced much smaller values: Ho = 0.32 to 0.48; He = 0.46 to 0.61. Still, the values from the fifth stock introduced in Cuba (Ho = 0.271; He = 0.367) are below these figures (Figure 1), even though heterozygosity for all previous introductions of L. vannamei is within the above intervals. However, we agree that heterozygosity is an imperfect measure for variability, as it can yield high values with just two alleles, and, therefore, their quality also matters [17-19]. Allele frequencies and deviations from Hardy-Weinberg equilibrium One single locus, Pvan 0040, is responsible to a large extent for the decrease in heterozygosity of the fifth stock, as it appears to be monomorphic in this case (as it did for the fourth Litopenaeus vannamei introduction). The other remaining three loci are still polymorphic, with five alleles each for M1 and Pvan 1758 and four alleles for Pvan 1815. Allele frequencies for the loci of the fifth stock are shown in figure 2. Molecular weights for the observed alleles coincide within the intervals published by other authors, including those who first isolated them from a genomic library [10] and others who have later used them to characterize populations of this species [2, 3, 8, 17-19]. In the present work th

Kết quả (Việt) 2:

Cuba.
2 Facultad de Biología, Universidad de La Habana, UH. Calle 25 # 455 đ / J y H, Vedado, Plaza, La Habana, Cuba. TÓM TẮT Công việc hiện tại ước tính sự thay đổi và chỉ số gì liên quan di truyền của các cổ phiếu thứ năm của Thái Bình Dương tôm thẻ chân trắng, Litopenaeus vannamei, nhập khẩu vào Cuba cho mục đích canh tác từ Cải thiện hệ thống nuôi tôm Mỹ (SIS). Biến đổi di truyền đã được ước tính bằng cách phân tích kiểu gen 33 mẫu cho bốn locus microsatellite: M1, Pvan 1815, Pvan 0040 và Pvan năm 1758. Cổ phiếu này đã có trung bình dự kiến và quan sát heterozygosities là 0,37 và 0,27 tương ứng; thấp nhất của tất cả các cổ phiếu trước đây được giới thiệu vào Cuba. Trên đây, cùng với số tiền thấp của biến thể alen phát hiện cho mỗi microsatellite, đã gợi ý về sự thay đổi di truyền thấp. Ngoài ra, hệ số gì liên quan cặp tụ quanh sự thống nhất, cho thấy một mức độ cao của huyết tộc. Taken như một toàn thể, các dữ liệu cho thấy rằng con giống này cần được vượt qua đầu tiên với các cá nhân từ một nguồn khác nhau hoặc với biến đổi di truyền cao hơn. Từ khóa:. biến đổi di truyền, Litopenaeus vannamei, microsatellites, tôm RESUMEN Se estimó la variabilidad genética y el índice de parentesco entre lotes de Camarón blanco del Pacífico, Litopenaeus vannamei, introducidos por quinta ocasión en Cuba, procedentes del Centro de mejora del Camarón, de Estados Unidos (Tôm Cải thiện hệ thống: SIS), para su cultivo. La variabilidad genética se estimó Mediante el genotipo de 33 muestras con Cuatro microsatélites loci: M1, Pvan 1815, Pvan 0040 y Pvan 1758. El Quinto LOTE de Litopenaeus vannamei tuvo los Valores promedios de heterocigosidad esperada y observada, más bajos de todos los introducidos en Cuba: 0,37 y 0,27, respectivamente. Esto, UNIDO một la poca cantidad de variantes alélicas para CADA Región microsatélite, una indica escasa variabilidad genética. Los Valores del coeficiente de parentesco alrededor de la Unidad expresan una alta consanguinidad. Todo ello sugiere el cruce de los individuos de esta introducción con otros de diferente Origen o más biến genéticamente. Palabras clave:. variabilidad genética, Litopenaeus vannamei, microsatélites, Camarón GIỚI THIỆU Tôm, như nhiều tài nguyên cá khác, đã nhận được tác động của đánh bắt quá mức và suy thoái môi trường. Quần thể tự nhiên đã bị thu hẹp, biến nuôi tôm thành một lựa chọn hữu ích cho các obtention nguồn protein quan trọng này. Trong năm 2003, hai cổ phiếu của tôm thẻ chân trắng Thái Bình Dương (Litopenaeus vannamei) từ Cải thiện hệ thống nuôi tôm Mỹ (SIS), có gốc ở đây là scotcks 1 và 2 đã được giới thiệu lần đầu tiên trong [1] Cuba, tiếp theo là từng bước thực hiện các kỹ thuật cho việc xử lý, sức khỏe, dinh dưỡng và đánh giá sự biến đổi gen của loài này trong các trại giống và các trang trại trước đây có liên quan với Litopenaeus schmitti, một tôm tại chổ. Hai cổ phiếu bổ sung đã được giới thiệu trong những năm kế tiếp (có gốc ở đây là cổ phiếu 3 và 4), tất cả các đặc trưng sử dụng marker microsatellite [2, 3]. Một chứng khoán thứ năm của loài này, thu được từ cùng một nguồn, đã được giới thiệu vào tháng năm 2008. gen của nó thành phần và allele đa hình vẫn chưa được khai thác exa-, tuy nhiên. Mặc dù quan hệ bà con của họ là thấp, các biến dị di truyền của các cổ phiếu 1 và 2 đã là nhỏ hơn so với ở các quần thể [2] tự nhiên; cổ phiếu 3 và 4, tương tự như vậy, trưng bày một biến dị di truyền giảm [3]. Sử dụng allozymes hoặc microsatellites và một số loài tôm khác nhau, nó đã được chứng minh rằng sự mất mát của biến đổi di truyền tương quan với sự giảm đáng kể về năng suất (như ví dụ trong Marsupenaeus japonicus [4], Litopenaeus [5] stylirostris, P. [6] sú và tôm thẻ chân trắng L. [7, 8]). Sử dụng các marker microsatellite, tuy nhiên, là phù hợp hơn cho việc theo dõi và đánh giá đa dạng di truyền trong quần thể nuôi, do độ phân giải cao hơn và nhạy cảm [2, 9]. Các mục tiêu của công việc hiện tại, do đó, là để xác định biến đổi và chỉ số gì liên quan di truyền trong một mẫu từ các cổ phiếu thứ năm của L. vannamei giới thiệu tại Cuba, sử dụng bốn locus microsatellite và so sánh chúng với tất cả các cổ phiếu được giới thiệu trước đây. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Lấy mẫu Pleopod mẫu được lấy từ cặp thứ tư, giữa người exopodito và endopodito, 40 cá nhân được chọn ngẫu nhiên chia đều giữa nam và nữ. Thủ tục lấy mẫu được thực hiện trên tôm di thực trước đó từ các trại sản xuất giống tôm của Trung tâm di truyền trong Mariel, Cuba. kiểu gen của locus microsatellite thủ tục tách chiết DNA, microsatellite loci chọn để phân tích (M1, thu được bằng cách Wolfus et al. [8], Pvan 1758 , Pvan 1815 và Pvan 0040, bị cô lập bởi Cruz et al. [10]), các chương trình khuếch đại và điều kiện điện di cho kiểu gen chạy có tất cả được mô tả trong Borrell et al. [2]. DNA được chiết xuất với 5% nhựa Chelex, và các mảnh vỡ khuếch đại đã được tách ra dưới một điện áp hoạt động năm 2000 mV ở 6% gel bis-acrylamide / acrylamide mà sau này đã được nhuộm màu với 0,1% bạc nitrat 0,05% formaldehyde, cố định với 10% acid acetic và phát triển với 3% sodium carbonate / 0,05% formaldehyde và 20 mg / mL natri thiosunfat. Mẫu trước đó kiểu gen của các [2] tác giả đã được sử dụng như điều khiển cho mỗi locus microsatellite, với các kích cỡ khác nhau, 206-240 cho M1, 140-146 cho Pvan 0040, 110-136 cho Pvan 1815 và 174-188 cho Pvan 1758. PGEM ® cũng được bao gồm như là một kích thước điểm đánh dấu thông thường. xử lý thống kê Xác định số alen mỗi locus, tần số của mỗi alen và các giá trị cho quan sát (Ho) và dự kiến (He, theo Nei [11]) dị hợp cho mỗi vị trí, cũng như liệu các quần thể đang ở trạng thái cân bằng Hardy-Weinberg, được thực hiện với các ứng dụng GeneAlEx (phiên bản 6.1) phần mềm [12]. Bất kỳ locus với ít nhất hai alen nơi tần số của allele phổ biến nhất không vượt quá 95% được coi là đa hình [13]. Các độ lệch từ trạng thái cân bằng đã được chứng thực bằng cách tính toán FIS [14], theo công thức FIS = 1 - (Hồ / Anh ), với các ứng dụng phần mềm fstat (phiên bản 2.9.3) [15]. Mặc dù nó phụ thuộc vào quy mô dân số, nó không bị ảnh hưởng bởi sự hiện diện của nhiều alen mỗi locus, số lượng cá thể mỗi dân hoặc số lượng của quần thể. Các hệ số gì liên quan di truyền (r) [16] cho một cặp duy nhất của cá nhân cũng đã được tính toán với GeneAlEx ver. 6.1 [12]. Hệ số này được tính toán cho các dấu hiệu đồng trội, sử dụng công thức sau: Trong đó: x là viết tắt của các cá nhân; k đối với các locus; l cho các vị trí alen (hai cho diploids và một cho haploids), Px là tần số của cá nhân "x" cho locus k và alen vị trí l, Py là tần số của allele "y" trong nhóm hay cá nhân so với x; và P * là tổng tần số của các alen trong quần thể. Hệ số di truyền gì liên quan phải có r ≤ 0 cho cá nhân không liên quan; r = 0,25 đối với anh em một nửa và r ≥ 0.5 cho anh em [16]. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN biến đổi di truyền của các cổ phiếu thứ năm của L. vannamei so với cổ phiếu trước đó Công việc hiện tại đã phân tích đa dạng di truyền của các cổ phiếu thứ năm của L. vannamei giới thiệu trong Cuba cho nuôi tôm, sử dụng bốn locus microsatellite: M1, phân lập từ L. vannamei [8], và Pvan 0040, Pvan 1758 và Pvan 1815, cô lập từ cùng một loài [10]. Bảng này chứa các thông số tính toán chính: số alen (Na), quan sát và dự kiến dị hợp tử (Ho và He) và độ lệch từ Hardy-Weinberg cân bằng (FIS), cùng với các giá trị ước tính trong các nghiên cứu trước đó. Theo kết quả của việc phân tích các mối liên hệ mất cân bằng với fstat (phiên bản 2.9.3), các locus không được liên kết gen trong L. vannamei [2, 9, 17]. Dự kiến và quan sát dị hợp tử quan sát Trung bình dị cho các chứng khoán thứ năm của L . vannamei giới thiệu tại Cuba mang lại một giá trị 0,271; con số thấp nhất so với cổ phiếu được giới thiệu trước đây (Hình 1). Ngoài ra, giá trị này là dưới đây tất cả những khoảng thời gian trước đó báo cáo của các nhà nghiên cứu khác sử dụng để nghiên cứu microsatellites tôm peneaid. Một đánh giá doanh nghiệp cổ điển [9] về việc sử dụng microsatellite loci cho quần thể tự nhiên từ bốn loài khác nhau được mô tả heterozygosities quan sát mà dao động 0,425-0,964 , năng suất trung bình của 0,666 mà giảm xuống dưới mức trung bình dự kiến (0,927). Cùng một tác giả quan sát khác nhau, heterozygosities 0,45-1,00 cho ba loài peneaids nuôi, năng suất trung bình của 0,594, chỉ dưới trung bình cho heterozygosity dự kiến (0,674). Tuy nhiên, các nghiên cứu về P. stylirostris nuôi cho 22 và 24 thế hệ [5] đã sản xuất giá trị nhỏ hơn nhiều: Ho = 0,32-0,48; Ông = 0,46-0,61. Tuy nhiên, các giá trị từ các cổ phiếu thứ năm được giới thiệu tại Cuba (Ho = 0,271; Ông = 0,367) là những con số dưới đây (Hình 1), mặc dù dị hợp cho tất cả các giới thiệu trước của L. vannamei là trong khoảng thời gian trên. Tuy nhiên, chúng tôi đồng ý rằng dị hợp là một biện pháp hoàn hảo cho sự dao động, vì nó có thể mang lại giá trị cao với chỉ hai alen, và, do đó, chất lượng của họ cũng có vấn đề [17-19]. tần số Allele và độ lệch từ Hardy-Weinberg cân bằng Một locus đơn , Pvan 0040, chịu trách nhiệm đến một mức độ lớn cho việc giảm dị hợp tử của chứng khoán thứ năm, khi nó xuất hiện được monomorphic trong trường hợp này (như nó đã làm cho việc giới thiệu Litopenaeus vannamei thứ tư). Các khác ba loci còn lại vẫn còn đa hình, với năm alen từng cho M1 và Pvan 1758 và bốn alen cho Pvan 1815. tần số Allele đối với các locus của các cổ phiếu thứ năm được thể hiện trong hình 2. trọng lượng phân tử cho các alen quan sát trùng trong khoảng thời gian xuất bản các tác giả khác, kể cả những người đầu tiên được phân lập chúng từ một thư viện gen [10] và những người khác sau đó đã sử dụng chúng để đặc trưng cho quần thể của loài này [2, 3, 8, 17-19]. Trong công việc hiện tại th