Case 1 PCV3 in situ hybridizationIn

Case 1 PCV3 in situ hybridizationIn order to further investigate the presence of PCV3 inheart and lung of the infected pig, we performed in situhybridization (ISH) using probes targeting PCV3. TheISH was performed using RNAscope (Advanced CellDiagnostics Inc.) described in 2012 [19]. Briefly, unstained formalin-fixed paraffin-embedded sections ofheart and lung were deparaffinized in xylene and rehydrated through a series of alcohol washes. The sectionswere then treated with hydrogen peroxide at roomtemperature for 10 min, boiled in citric buffer for15 min and incubated with protease at 40 °C for 30 min.The slides were hybridized with the target probes in hybridization buffer at 40 °C for 2 h. Then, a sequence ofprobe amplifiers was added (40 °C for 15 or 30 min).Hybridization signal was detected as red colorimetricstaining using Fast Red, and the slides were counterstainedwith hematoxylin. PCV3 mRNA was detected infrequentlyand multifocally in myocardiocytes, a leiomyocyte of thetunica media of an inflamed arteriole, and inflammatorycells (presumably macrophages) in the myocardium, all ofwhich showed diffuse sarcoplasmic/cytoplasmic reactivity(Fig. 1c–f ). PCV3 mRNA was not detected in sections oflung. The same method was used to test for the presenceof PAstV4 mRNA in the same heart and lung tissue. Nosignal of PAstV4 mRNA expression was detected (datanot shown).

Kết quả (Việt) 1:

Case 1 PCV3 in situ hybridization
In order to further investigate the presence of PCV3 in
heart and lung of the infected pig, we performed in situ
hybridization (ISH) using probes targeting PCV3. The
ISH was performed using RNAscope (Advanced Cell
Diagnostics Inc.) described in 2012 [19]. Briefly, unstained formalin-fixed paraffin-embedded sections of
heart and lung were deparaffinized in xylene and rehydrated through a series of alcohol washes. The sections
were then treated with hydrogen peroxide at room
temperature for 10 min, boiled in citric buffer for
15 min and incubated with protease at 40 °C for 30 min.
The slides were hybridized with the target probes in hybridization buffer at 40 °C for 2 h. Then, a sequence of
probe amplifiers was added (40 °C for 15 or 30 min).
Hybridization signal was detected as red colorimetric
staining using Fast Red, and the slides were counterstained
with hematoxylin. PCV3 mRNA was detected infrequently
and multifocally in myocardiocytes, a leiomyocyte of the
tunica media of an inflamed arteriole, and inflammatory
cells (presumably macrophages) in the myocardium, all of
which showed diffuse sarcoplasmic/cytoplasmic reactivity
(Fig. 1c–f ). PCV3 mRNA was not detected in sections of
lung. The same method was used to test for the presence
của PAstV4 mRNA trong tế bào tim và phổi cùng. Không
tín hiệu biểu hiện PAstV4 mRNA được phát hiện (dữ liệu
không hiển thị).

Kết quả (Việt) 2:

Trường hợp 1 PCV3 lai hóa tại situ
Để tiếp tục điều tra sự hiện diện của PCV3 trong
tim và phổi của con lợn bị nhiễm bệnh, chúng tôi thực hiện tại situ
(ISH) sử dụng đầu dò nhắm mục tiêu PCV3. Trong
ISH được thực hiện bằng cách sử dụng RNAscope (Advanced Cell
Diagnostics Inc.) Mô tả trong 2012 [19]. Ngắn gọn, không màu formalin-cố định Paraffin-nhúng phần của
tim và phổi được deparaffinized trong xylene và rehydrat thông qua một loạt các rửa rượu. Các phần
sau đó được điều trị bằng hydrogen peroxide tại Phòng
nhiệt độ trong 10 phút, đun sôi trong bộ đệm citric cho
15 phút và ấp với protease ở 40 ° c trong 30 phút.
Các trang trình bày được lai với các đầu dò mục tiêu trong việc lai hóa đệm ở 40 ° c cho 2 h. Sau đó, một chuỗi các
bộ khuếch đại thăm dò đã được bổ sung (40 ° c cho 15 hoặc 30 phút).
Tín hiệu lai ghép được phát hiện dưới dạng màu đỏ
nhuộm màu đỏ nhanh, và các máng trượt được chống
với hematoxylin. PCV3 mRNA được phát hiện không thường xuyên
và multifocally trong myocardiocytes, một leiomyocyte của
phương tiện truyền thông Tunica của một arteriole bị viêm, và viêm
(có lẽ là đại thực bào) trong cơ tim, tất cả các
trong đó cho thấy khuếch tán sarcoplasmic/cytoplasmic phản ứng
(Fig. 1C – f). PCV3 mRNA không được phát hiện trong các phần của
Phổi. Phương pháp tương tự được sử dụng để kiểm tra sự hiện diện
của PAstV4 mRNA trong cùng một trái tim và mô phổi. Không
tín hiệu của biểu thức PAstV4 mRNA đã được phát hiện (dữ liệu
không được hiển thị).

Kết quả (Việt) 3:

Bằng chứng:
Để nghiên cứu thêm về sự có mặt của PCV3 trong
tim và phổi của con heo bị nhiễm, chúng tôi đã diễn tại trường
Người giám sát (ISH) dùng vòi nhắm vào PCV3.Được.
ISH đã được thực hiện bằng RNAscop (Tế bào cấp cao).
Chẩn đoán tăng. được mô tả tại Tập A2 [19).Đơn giản, không ràng buộc
tim và phổi đã được chiết xuất trong xylen và được hydrate lại qua một loạt các nước rửa chén cồn.Các phần
Sau đó được điều trị bằng peroxide ở phòng
Nhiệt độ cho 10 phút, luộc trong bộ đệm citric cho
15 phút và ấp ủ với protein tại 40 176C for 30 phút.
C ác h ình trượt được trộn với các đầu dò đích trong bộ đệm đệm định vị vị tại 40 176; C for 2 h. Rồi, một chuỗi của
Đã được thêm khuếch đại micro (40 1769;C cho 15 hay 30 phút).
Tín hiệu đổi chác được phát hiện là màu đỏ
màu sắc nhanh màu đỏ, và các slide này được tương phản.
với tụ máu.PCV3 mRNA thường bị phát hiện
và đa ổ trong tim cơ, một leiomyghi của
khí sắc ấm động mạch và viêm nhiễm
tế bào (có thể là đại bàng) trong cơ tim, tất cả
đã hiển thị phản ứng Sarcoid/ chưa phổ biến.
(Fig. tọa độ 2;f).PCV3 mRNA không được phát hiện trong các phần của
Phổi.Dùng cùng một phương pháp để kiểm tra sự hiện diện.
của PASTV4 mRNA trong cùng tim và phổi.Không
phát hiện tín hiệu PAP V4 mRNA biểu thức (dữ liệu)
không hiển thị).