The animal assays have some serious

The animal assays have some serious drawbacks with respect to sensitivity, detectability of the individual toxins and with respect to ethics. In recent years, analytical methods based on liquid chromatography (LC) coupled to mass spectrometry (MS) have been developed as an alternative for the detection of lipophilic marine toxins in crude methanolic shellfish extracts [11-14]. However, it is well known that in LC-MS/MS analysis matrix effects (ion suppression or ion enhancement) can lead to an under- or overestimation of the concentration. In order to overcome matrix effects, different approaches can be used, including internal standards, standard addition or the removal of matrix effects by various clean up techniques. Unfortunately, in the field of marine toxin analysis internal standards are not available yet. Ito et al. demonstrated that standard addition can be an effective tool to eliminate matrix effects [15]. Due to the scarcity of standards the standard addition approach is expensive and not generally feasible in routine analysis. Different techniques have been tested for the clean up of methanolic shellfish extracts. Liquid-liquid extraction (LLE) and solid-phase extraction (SPE) are the clean up techniques most often used in the analysis of lipophilic marine biotoxins. Various organic solvents have been used for the LLE of the crude extracts [16-19]. After LLE the organic phase is evaporated to dryness and reconstituted in methanol, acetonitrile or acetone. The evaporation step may have a negative effect on the solubility and stability of the toxins. From a (pre-)validation round conducted within the EU BIOTOX project it became clear that LLE did not give satisfactory results with respect to accuracy, reproducibility and repeatability [20]. Most SPE methods are directed to the clean up or isolation of an individual toxin or toxin group. SPE clean up has been combined with LC -fluorescence detection (FLD) for the determination of OA and DTXs in shellfish. Puech et al. described the use of immuno-affinity cartridges with satisfactory recoveries (>55%) [21] and Quilliam et al. used aminopropylsilica cartridges with excellent recoveries (>95%) [22]. For the determination of OA, DTX, YTX and PTX toxins with LC-MS, Goto et al. published arather laborious method using two parallel SPE procedures with recoveries in the range of 69-134% [23]. A C18 cartridge was used to isolate YTX and 45OH-YTX from the crude methanolic extract, while for the isolation of OA and DTX1 LLE was applied, followed by SPE on a silica cartridge. Stobo et al. used a polymeric type SPE cartridge to isolate AZAs from crude extracts [12] and Moroney et al. used a

Kết quả (Việt) 1:

Động vật thử nghiệm có một số nhược điểm nghiêm trọng đối với độ nhạy cảm, detectability của các độc tố cá nhân và đối với đạo Đức. Những năm gần đây, phương pháp phân tích dựa trên sắc ký lỏng (LC) cùng với mass spectrometry (MS) đã được phát triển như là một thay thế cho phát hiện lipophilic biển độc tố trong động vật có vỏ methanolic thô chất chiết xuất từ [11-14]. Tuy nhiên, nó là nổi tiếng ở LC-MS/MS phân tích hiệu ứng ma trận (ion đàn áp hoặc tăng cường ion) có thể dẫn đến một dưới- hoặc overestimation của nồng độ. Để vượt qua ảnh hưởng ma trận, phương pháp tiếp cận khác nhau có thể được sử dụng, bao gồm cả nội bộ tiêu chuẩn, tiêu chuẩn bổ sung hoặc loại bỏ hiệu ứng ma trận của nhiều nghệ sĩ dọn sạch kỹ thuật. Thật không may, trong lĩnh vực phân tích biển độc tố nội bộ tiêu chuẩn không có được nêu ra. Ito et al. đã chứng minh rằng tiêu chuẩn bổ sung có thể là một công cụ hiệu quả để loại bỏ hiệu ứng ma trận [15]. Do sự khan hiếm của tiêu chuẩn là phương pháp tiêu chuẩn bổ sung là tốn kém và không nói chung khả thi trong thói quen phân tích. Kỹ thuật khác nhau đã được thử nghiệm cho sạch sẽ lên của động vật có vỏ methanolic chiết xuất. Khai thác chất lỏng-chất lỏng (LLE) và khai thác pha rắn (SPE) là sạch sẽ lên kỹ thuật thường được dùng trong phân tích lipophilic biển biotoxins. Các dung môi hữu cơ đã được sử dụng cho LLE chất chiết xuất từ dầu thô [16-19]. Sau khi LLE giai đoạn hữu cơ bốc hơi để khô và được tái lập ở methanol, acetonitrile hoặc axeton. Bước bay hơi có thể có một tác động tiêu cực độ hòa tan và độ ổn định của các độc tố. Từ một xác nhận (trước) vòng tiến hành trong dự án EU BIOTOX nó trở nên rõ ràng rằng LLE đã không đưa ra các kết quả khả quan đối với độ chính xác, reproducibility và độ [20]. Hầu hết các phương pháp SPE đang hướng đến sạch sẽ lên hoặc sự cô lập của một cá nhân chất độc hoặc độc tố nhóm. SPE sạch sẽ mặc đã được kết hợp với LC-phát hiện sự phát huỳnh quang (FLD) cho việc xác định của viêm khớp và DTXs trong động vật có vỏ. Puech et al. Mô tả việc sử dụng các hộp mực miễn dịch-mối quan hệ với đạt yêu cầu phục hồi (> 55%) [21] và Quilliam et al. sử dụng hộp mực aminopropylsilica với tuyệt vời phục hồi (> 95%) [22]. xác định độc tố OA, DTX, YTX và PTX với LC-MS, Goto et al. công bố arather siêng năng phương pháp bằng cách sử dụng hai thủ tục SPE song song với phục hồi trong khoảng 69-134% [23]. Một hộp mực C18 được sử dụng để cô lập YTX và 45OH-YTX từ methanolic extract thô, trong khi đối với sự cô lập của viêm khớp và DTX1 LLE được áp dụng, theo sau là SPE ngày một mực silica. Stobo et al. sử dụng một loại polymer SPE mực để cô lập AZAs từ chất chiết xuất từ dầu thô [12] và Moroney et al. sử dụng một

Kết quả (Việt) 2:

Các xét nghiệm động vật có một số hạn chế nghiêm trọng đối với sự nhạy cảm, dò tìm của các độc tố cá nhân có và tôn trọng đạo đức với. Trong những năm gần đây, các phương pháp phân tích dựa trên sắc ký lỏng (LC) cùng với khối phổ (MS) đã được phát triển như là một thay thế cho việc phát hiện các độc tố biển ưa mỡ trong động vật có vỏ thô chiết xuất methanol [11-14]. Tuy nhiên, nó cũng được biết rằng trong LC-MS / MS hiệu ứng ma trận phân tích (ức chế ion hoặc tăng cường ion) có thể dẫn đến một hiểu hoặc đánh giá quá cao của sự tập trung. Để khắc phục hiệu ứng ma trận, phương pháp tiếp cận khác nhau có thể được sử dụng, bao gồm các tiêu chuẩn nội bộ, bổ sung tiêu chuẩn hoặc loại bỏ các hiệu ứng ma trận bằng nhiều kỹ thuật làm sạch. Thật không may, trong lĩnh vực phân tích độc tố biển tiêu chuẩn nội bộ là chưa xuất hiện. Ito et al. chứng minh rằng việc bổ sung tiêu chuẩn có thể là một công cụ hiệu quả để loại bỏ các hiệu ứng ma trận [15]. Do sự khan hiếm của các tiêu chuẩn phương pháp bổ sung tiêu chuẩn là tốn kém và thường không khả thi trong phân tích thường xuyên. Kỹ thuật khác nhau đã được thử nghiệm để dọn dẹp các chất chiết xuất từ ​​động vật có vỏ methanol. Chiết lỏng-lỏng (LLE) và chiết pha rắn (SPE) là những kỹ thuật làm sạch thường xuyên nhất được sử dụng trong phân tích của biotoxins biển ưa mỡ. Dung môi hữu cơ khác nhau đã được sử dụng cho các LLE của các chất chiết xuất dầu thô [16-19]. Sau LLE pha hữu cơ bay hơi đến khô và tái tạo trên methanol, acetonitril hoặc acetone. Bước bốc hơi có thể có một tác động tiêu cực đến khả năng hòa tan và độ ổn định của các độc tố. Từ một (tiền) xác nhận vòng thực hiện trong dự án EU BIOTOX nó trở nên rõ ràng rằng LLE đã không cho kết quả khả quan đối với tính chính xác, độ tái lặp và [20] với. Hầu hết các phương pháp SPE đang hướng đến sự sạch sẽ lên hoặc cô lập của một độc tố toxin hoặc nhóm cá nhân. SPE sạch đã được kết hợp với phát hiện LC -fluorescence (FLD) để xác định viêm khớp và DTXs ở động vật có vỏ. Puech et al. mô tả việc sử dụng các hộp mực miễn dịch có ái lực với sự hồi phục đạt yêu cầu (> 55%) [21] và Quilliam et al. hộp mực đã qua sử dụng aminopropylsilica với sự phục hồi xuất sắc (> 95%) [22]. Đối với việc xác định viêm khớp, DTX, YTX và PTX độc tố với LC-MS, Goto et al. công bố phương pháp arather mất thời gian bằng cách sử dụng hai thủ tục SPE song song với sự phục hồi trong khoảng 69-134% [23]. Một hộp C18 đã được sử dụng để cô lập YTX và 45OH-YTX từ methanol từ dầu thô, trong khi đối với sự cô lập của viêm khớp và DTX1 LLE đã được áp dụng, theo sau là SPE trên một hộp silica. Stobo et al. sử dụng một hộp mực loại SPE polyme để cô lập azas chiết xuất từ ​​dầu thô [12] và Moroney et al. sử dụng một