Bligh/Dyer extraction of total lipi

Bligh/Dyer extraction of total lipids:
(Bligh,E.G. and Dyer,W.J. 1959. A rapid method for total lipid extraction and purification.
Can.J.Biochem.Physiol. 37:911-917.)
1. Weigh tissue (seed, leaf, etc). Grind dry soybean seeds in mortar and pestle. If using leaf or Arabidopsis seeds, add directly to glass tube and smash with glass rod after step 2 to grind.
2. Add tissue to glass tube, add 3 mls 2:1 MeOH:chloroform. Smash with glass rod.
3. Mix on Nutator 20 minutes.
4. Add 1 ml chloroform and 1.8 mls water.
5. Shake
6. Spin
7. Discard upper layer (aqueous phase, will contain some polar lipid species like acyl-CoAs. Depending on what you are after, you may need to save this layer)
8. Transfer lower layer (organic phase contains TAGs, membrane lipids and other neutral lipids) to new tube
9. Dry under N2
10. Dissolve in 200 ul 1:1 chloroform: methanol or 6:1 chloroform:methanol.

*Internal standard----if using an internal standard, add to step 2.

Kết quả (Việt) 1:

Bligh/Dyer khai thác tất cả các chất béo:(Bligh,E.G và Dyer,W.J. năm 1959. Một phương pháp nhanh chóng cho tất cả lipid khai thác và tinh chế.Can.J.Biochem.Physiol. 37:911-917.)1. cân mô (hạt giống, lá, vv). Xay hạt khô đậu tương trong vữa và pestle. Nếu sử dụng lá hoặc hạt giống Arabidopsis, thêm trực tiếp vào ống kính và smash với thủy tinh que sau bước 2 để xay.2. thêm mô ống bằng thủy tinh, thêm 3 số mls 2:1 MeOH:chloroform. Phá vỡ với thủy tinh que.3. trộn trên Nutator 20 phút.4. thêm 1 ml cloroform và 1,8 mls nước.5. lắc6. quay7. huỷ lớp trên (pha dung dịch nước, sẽ bao gồm một số loài cực chất béo như acyl-COA. Tùy thuộc vào những gì bạn đang sau, bạn có thể cần phải tiết kiệm này lớp)8. chuyển lớp dưới (giai đoạn hữu cơ chứa thẻ, màng lipid và các chất béo trung tính) để ống mới9. Giặt theo N210. hòa tan trong 200 ul cloroform 1:1: hỗn hợp methanol hoặc 6:1 cloroform: hỗn hợp methanol.* Nội bộ chuẩn---nếu sử dụng một tiêu chuẩn nội bộ, thêm tới bước 2.

Kết quả (Việt) 2:

Bligh / Dyer khai thác tổng lipid:
(. Bligh, EG và Dyer, WJ 1959. Một phương pháp nhanh chóng cho tổng khai thác lipid và lọc
Can.J.Biochem.Physiol 37:.. 911-917)
1. Cân mô (hạt, lá, vv). Xay hạt đậu nành khô trong cối và chày. Nếu sử dụng lá hoặc hạt cây Arabidopsis, thêm trực tiếp vào ống kính và đập với que thủy tinh sau khi bước 2 để xay.
2. Thêm mô để ống kính, thêm 3 ml 2: 1 MeOH: chloroform. Smash với thanh thuỷ tinh.
3. Trộn vào Nutator 20 phút.
4. Thêm 1 ml chloroform và 1,8 ml nước.
5. Lắc
6. Spin
7. Huỷ lớp trên (pha nước, sẽ có một số loài lipid cực như acyl-COA. Tùy thuộc vào những gì bạn đang sau, bạn có thể cần phải lưu lớp này)
8. Chuyển lớp thấp hơn (giai đoạn hữu cơ chứa TAG, lipid màng tế bào và chất béo trung tính khác) để ống mới
9. Khô dưới N2
10. Hoà tan trong 200 ul 1: 1 chloroform: methanol hoặc 6: 1 chloroform:. Methanol * chuẩn nội ---- nếu sử dụng một tiêu chuẩn nội bộ, thêm vào bước 2.