4. HydroxylationHydroxylations are

4. Hydroxylation

Hydroxylations are possibly the most widespread type of steroid bioconversion. Hydroxylations can be used to build intermediates for further chemical synthesis, by offering ac-cess to otherwise inaccessible sites of the steroid molecule, or to provide the steroid molecule with the adequate struc-

ture for therapeutic applications [2,8]. Microorganisms able to hydroxylate steroids in positions C1 to C21 and in po-sition C26 have been reported [2–8,71]. 11a-, 11b-, 15a and 16a-hydroxylations are currently established processes in the steroid industry [7,72] mainly for the production of adrenalcortexhormonesandtheiranalogues.11a-,11b-and 16a-hydroxylations are usually performed using Rhizopus spp. or Aspergillus spp., Curvularia spp. or Cunning-hamella spp., and Streptomyces spp., respectively [2–8]. The oxygen group in position C11 is regarded as essential for anti-inflammatory action [8], whereas 16a-hydroxylated steroids have increased glucocorticoid activity [16]. Nev-ertheless, replacement of the 11b-hydroxyl group by a chlorine atom did not lead to a loss of affinity for the glucocorticoid receptor, thus enabling the manufacture of effective compounds for the treatment of skin disorders [16]. 11a-Hydroxylation is also used in the production of

P. Fernandes et al./Enzyme and Microbial Technology 32 (2003) 688–705 695



an intermediate in the synthesis of Desogestrel, a contra-ceptive drug [72]. A detailed study on the effects of the morphology and physiology of Rhizopus nigricans pellets in the 11a-hydroxylation of progesterone was performed [73]. A repeated batch procedure revealed that the best maintenance of bioconversion activity resulted from pellets harvested at the active growth cultivation phase, cultured with high stirring speed from a low inoculum size. High conversion yields (above 90% for a substrate concentration of 0.3gl−1) were thus observed in two successive batch biotransformations. Conversion yields above 95% were observed in the 11a-hydroxylation of estr-4-en-3,17-dione (ED) and canrenone (CR) using Aspergillus ochraceus, for initial substrate concentrations ranging from 10 to 25gl−1 [74,75]. Surprisingly, however, the bioconversion yields obtained with substrates with purity levels between 90 and 95% exceeded by 15–20% those obtained with 98–100% pure substrates. The effect of medium composition on the formation of by-products, during the 11a-hydroxylation of 13-ethyl-4-gonene-3,17-dione by using Aspergillus awamori, was investigated and a mathematical model for estimating product yields was developed [76]. The 15a-hydroxylation of 13b-ethyl-4-gonene-3,17-dione, lead-ing to an intermediate in the production of Gestoden, a con-traceptive drug, has also been extensively studied [77,78]. The bioconversion was preferably performed by nor-AD induced Penicillium raistrickii [77]. The 15b-hydroxylation of finasteride by Cunninghamella elegans ATCC 9244 with a product yield of about 80% was reported [39]. The hydroxylated-finasteride derivative is a useful intermediate in the production of 4-aza-steroids, which are efficient in-hibitors of testosterone 5-reductase. This enzyme is respon-sible for the reduction of testosterone to dihydrotestosterone, which is ultimately related to malignant conditions leading to prostate cancer. The 9a-hydroxylation of steroids also leads to intermediate compounds useful in the pharmaceuti-cal industry, namely as starting materials for the production of 9a-halogen corticoids [8] and to 11-keto structures [7]. RestingRhodococcussp.cellshavebeenusedascatalystsfor the bioconversion of AD to 9a-hydroxy-AD (9a-OH-AD) [79–81]. The increase in steroid transformation activities of non-induced Rhodococcus sp. cells was shown to depend on the contact time with the inducer substrate and to follow a consecutive pattern, 9a-hydroxylation activity developing earlier than 11-dehydrogenation activity [80,81]. A strategy based on the addition of protein synthesis blockers to the growth medium before a significant development of the un-desired 11-dehydrogenase activity was thus proposed, as a means to improve the effectiveness of the 9a-hydroxylation process [80,81]. A process for the 7a-hydroxylation of DHEA and pregnelone (PRG) using Fusarium monil-iforme mycelia has been recently presented [82]. The 7a-hydroxylated derivative of DHEA is claimed to be use-ful in certain cancers and Alzheimer disease therapies, to increase immune response and as an anti-obesity agent [82], besides presenting anti-glucocorticoid action [82,83]. Most

of these therapeutic uses are shared by the 7a-hydroxylated derivative of PRG [82]. The 7a-hydroxylation enzyme complex is mainly microsomal and its constitutive activ-ity is low [83], with bioconversion yields below 2% [84]. Induction with DHEA proved effective for both biotransfor-mations and allowed product yields of 80 and 65% for the 7a-hydroxylated derivatives of DHEA and PRG, respec-tively, both from a 0.4gl−1 substrate concentration [82]. The higher affinity of the 7a-hydroxylase of F. moniliforme to DHEA as compared to other 3-hydroxysteroids, namely PRG, epiandrosterone and estrone, was further evidenced by Cotillon and Morfin [84]. Lower bioconversion yields and specific initial reaction rates, as well as higher Michaelis constants, were observed when the latter steroid molecules were assayed as substrate, as compared to DHEA [84]. Production of 7a-hydroxyestradiol using a Cyp7b steroid hydroxylase is also claimed [85]. The use of 7a-hydroxy steroids in the development of products for the diagnosis and therapy of neuropsychiatric or immune disorders has been claimed [85]. 7a-Hydroxy steroids may also play a role in the immune response [86].
7b-Hydroxylation of finasteride by Mortierella isabellina has also been reported, however, a low (20%) product yield was observed [39]. The hydroxylated derivative can lead to useful products in prostate cancer therapy.
The sites of biocatalyst action in steroid hydroxylation were shown to be dependent on the stereochemistry of the substrate [87]. Cephalosporium aphidicola preferably hydroxylated 13b-methyl steroids in positions C11a and C14a, whereas 13a-methyl steroids were hydroxylated in positions C1a and C7a [87]. The relation between the structural features of different steroid compounds and the site-specific 14a-hydroxylation of steroids was investi-gated. Progesterone was the most adequate substrate for the production of 14a-hydroxylated derivatives using Tham-nostylum piriforme [88]. Structural features also played a major role in the hydroxylation of 3a,5-cycloandrostanes using C. aphidicola [36].
Compelling evidence has been gathered identifying cytochrome P450 as responsible for steroid hydroxy-lation reaction in both bacteria and filamentous fungi (Table 2). However, each given whole-cell hydroxylation of steroid molecules is often hampered by the formation of by-products, a drawback which could possibly be over-come if a detailed knowledge of the mechanism of the metabolic pathway of the bioconversion could be obtained. In a work focusing on the 16a-hydroxylation of proges-terone with Streptomyces roseochromogenes, Berrie et al. observed the formation of a secondary dihydroxylated by-product, 2b,16a-dihydroxyprogesterone, produced in a 1:3.6 ratio to the main product, 16a-hydroxyprogesterone [94]. Using a reconstituted protein system, obtained from purified cell extracts S. roseochromogenes, composed of cytochrome P450, together with a ferredoxin-like redoxin and a flavin-containing redoxin reductase, two electron transfer proteins, these authors were able to change the ratio

Kết quả (Việt) 1:

4. hydroxylationHydroxylations có thể là loại phổ biến nhất của steroid CNSH. Hydroxylations có thể được sử dụng để xây dựng các trung gian cho thêm hóa chất tổng hợp, bằng cách cung cấp ac-cess để các trang web khác không thể tiếp cận của các phân tử steroid, hoặc để cung cấp các phân tử steroid với đầy đủ struc- Ture cho các ứng dụng điều trị [2,8]. Vi sinh vật có thể hydroxylate steroid trong vị trí C1 C21 và trong po-sition C26 đã báo cáo [2-8,71]. 11A-, 11b-, 15a và 16a-hydroxylations là các quy trình hiện nay được thành lập trong ngành công nghiệp steroid [7,72] chủ yếu là để sản xuất adrenalcortexhormonesandtheiranalogues.11a-, 11b- và 16a-hydroxylations thường được thực hiện bằng Rhizopus spp. hoặc Aspergillus spp., Curvularia spp. hoặc khôn ngoan-hamella spp. và Streptomyces spp., tương ứng [2-8]. Nhóm oxy trong vị trí C11 được coi là rất cần thiết cho hành động chống-inflammatory [8], trong khi epoxit 16a steroid đã tăng glucocorticoid hoạt động [16]. Nev-ertheless, thay thế của nhóm chức hiđrôxyl 11b bởi một nguyên tử clo đã không dẫn đến mất affinity cho các thụ thể glucocorticoid, do đó cho phép sản xuất các hợp chất có hiệu quả để điều trị rối loạn da [16]. 11A-Hydroxylation cũng được sử dụng trong sản xuất P. Fernandes et al./Enzyme và vi khuẩn công nghệ 32 (2003) 688-705 695 an intermediate in the synthesis of Desogestrel, a contra-ceptive drug [72]. A detailed study on the effects of the morphology and physiology of Rhizopus nigricans pellets in the 11a-hydroxylation of progesterone was performed [73]. A repeated batch procedure revealed that the best maintenance of bioconversion activity resulted from pellets harvested at the active growth cultivation phase, cultured with high stirring speed from a low inoculum size. High conversion yields (above 90% for a substrate concentration of 0.3gl−1) were thus observed in two successive batch biotransformations. Conversion yields above 95% were observed in the 11a-hydroxylation of estr-4-en-3,17-dione (ED) and canrenone (CR) using Aspergillus ochraceus, for initial substrate concentrations ranging from 10 to 25gl−1 [74,75]. Surprisingly, however, the bioconversion yields obtained with substrates with purity levels between 90 and 95% exceeded by 15–20% those obtained with 98–100% pure substrates. The effect of medium composition on the formation of by-products, during the 11a-hydroxylation of 13-ethyl-4-gonene-3,17-dione by using Aspergillus awamori, was investigated and a mathematical model for estimating product yields was developed [76]. The 15a-hydroxylation of 13b-ethyl-4-gonene-3,17-dione, lead-ing to an intermediate in the production of Gestoden, a con-traceptive drug, has also been extensively studied [77,78]. The bioconversion was preferably performed by nor-AD induced Penicillium raistrickii [77]. The 15b-hydroxylation of finasteride by Cunninghamella elegans ATCC 9244 with a product yield of about 80% was reported [39]. The hydroxylated-finasteride derivative is a useful intermediate in the production of 4-aza-steroids, which are efficient in-hibitors of testosterone 5-reductase. This enzyme is respon-sible for the reduction of testosterone to dihydrotestosterone, which is ultimately related to malignant conditions leading to prostate cancer. The 9a-hydroxylation of steroids also leads to intermediate compounds useful in the pharmaceuti-cal industry, namely as starting materials for the production of 9a-halogen corticoids [8] and to 11-keto structures [7]. RestingRhodococcussp.cellshavebeenusedascatalystsfor the bioconversion of AD to 9a-hydroxy-AD (9a-OH-AD) [79–81]. The increase in steroid transformation activities of non-induced Rhodococcus sp. cells was shown to depend on the contact time with the inducer substrate and to follow a consecutive pattern, 9a-hydroxylation activity developing earlier than 11-dehydrogenation activity [80,81]. A strategy based on the addition of protein synthesis blockers to the growth medium before a significant development of the un-desired 11-dehydrogenase activity was thus proposed, as a means to improve the effectiveness of the 9a-hydroxylation process [80,81]. A process for the 7a-hydroxylation of DHEA and pregnelone (PRG) using Fusarium monil-iforme mycelia has been recently presented [82]. The 7a-hydroxylated derivative of DHEA is claimed to be use-ful in certain cancers and Alzheimer disease therapies, to increase immune response and as an anti-obesity agent [82], besides presenting anti-glucocorticoid action [82,83]. Most trong các ứng dụng điều trị được chia sẻ bởi đạo hàm epoxit 7a của PRG [82]. Enzym 7a-hydroxylation phức tạp là chủ yếu là microsomal và của nó thì activ-Anh là thấp [83], với sản lượng CNSH dưới 2% [84]. Cảm ứng với DHEA tỏ ra hiệu quả cho cả hai biotransfor-mations và cho phép sản phẩm sản lượng của 80 và 65% cho các dẫn xuất epoxit 7a DHEA và PRG, respec-cách, cả hai từ một nồng độ bề mặt 0.4gl−1 [82]. Affinity cao của prolyl 7a F. moniliforme để DHEA so với khác 3-hydroxysteroids, cụ thể là PRG, epiandrosterone và estrone, tiếp tục được minh chứng bằng Cotillon và Morfin [84]. CNSH thấp hơn sản lượng và specific phản ứng ban đầu tỷ giá, cũng như cao Michaelis hằng số, được quan sát thấy khi các phân tử steroid sau này đã được assayed như bề mặt, so với DHEA [84]. Sản xuất của 7a-hydroxyestradiol bằng cách sử dụng một Cyp7b steroid prolyl là tuyên bố [85]. Việc sử dụng steroid 7a-hydroxy trong sự phát triển của các sản phẩm cho việc chẩn đoán và điều trị các rối loạn neuropsychiatric hoặc miễn dịch đã là tuyên bố [85]. 7A Hydroxy steroid cũng có thể đóng một vai trò trong các phản ứng miễn dịch [86].7B-Hydroxylation của finasteride bởi Mortierella isabellina cũng đã được báo cáo, Tuy nhiên, một năng suất thấp của sản phẩm (20%) được quan sát thấy [39]. Đạo hàm epoxit có thể dẫn đến các sản phẩm hữu ích trong điều trị ung thư tuyến tiền liệt.Các trang web của biocatalyst hành động trong steroid hydroxylation được hiển thị phụ thuộc vào hóa học lập thể của bề mặt [87]. Cephalosporium aphidicola tốt hơn epoxit 13b-methyl steroid trong vị trí C11a và C14a, trong khi 13a-methyl steroid được epoxit ở các vị trí C1a và C7a [87]. Mối quan hệ giữa các tính năng cấu trúc của hợp chất steroid khác nhau và trang web-specific 14a-hydroxylation của steroid được investi có cổng vào. Progesterone là bề mặt đầy đủ nhất để sản xuất epoxit 14a dẫn xuất bằng cách sử dụng Tham-nostylum piriforme [88]. Tính năng cấu trúc cũng đóng một vai trò quan trọng trong hydroxylation 3a, 5-cycloandrostanes sử dụng C. aphidicola [36].Hấp dẫn bằng chứng đã được tập hợp xác định cytochrome P450 là chịu trách nhiệm về steroid hydroxy-lation phản ứng ở vi khuẩn và filamentous nấm (bảng 2). Tuy nhiên, mỗi nhất định di động toàn bộ hydroxylation của phân tử steroid thường bị cản trở bởi sự hình thành của bộ phận nội tạng, một trở ngại mà có thể có thể được over-đi nếu một kiến thức chi tiết về cơ chế con đường trao đổi chất của CNSH có thể được lấy. Trong một công việc tập trung vào hydroxylation 16a proges-terone với Streptomyces roseochromogenes, Berrie et al. quan sát sự hình thành của một sản phẩm phụ dihydroxylated, 2b, 16a-dihydroxyprogesterone, sản xuất tại một tỷ lệ 1:3.6 cho sản phẩm chính, 16a-hydroxyprogesterone [94]. Bằng cách sử dụng một hệ thống hoàn protein, thu được từ purified tế bào chất chiết xuất S. roseochromogenes, bao gồm cytochrome P450, cùng với một redoxin giống như ferredoxin và redoxin flavin có chứa một reductase, hai điện tử chuyển protein, các tác giả đã có thể thay đổi tỷ lệ

Kết quả (Việt) 2:

4. hydroxyl Hydroxylations là thể loại phổ biến nhất của bioconversion steroid. Hydroxylations có thể được sử dụng để xây dựng trung gian để tổng hợp hóa học hơn nữa, bằng cách cung cấp ac-cận đến các trang web khác không thể tiếp cận của các phân tử steroid, hoặc để cung cấp các phân tử steroid với cấu thích hợp cho các ứng dụng điều trị ture [2,8]. Vi sinh vật có thể hydroxylate steroid ở các vị trí C1 đến C21 và C26 po các hãng cạnh tranh đã được báo cáo [2-8,71]. 11a-, 11b-, 15a và 16a-hydroxylations đang thành lập các quy trình trong các ngành công nghiệp steroid [7,72] chủ yếu để sản xuất adrenalcortexhormonesandtheiranalogues.11a-, 11b-16a-hydroxylations và thường được thực hiện bằng Rhizopus spp. hoặc Aspergillus spp., Curvularia spp. hoặc Cunning-hamella spp., và Streptomyces spp., tương ứng [2-8]. Các nhóm oxy ở vị trí C11 được coi là cần thiết để chống trong fl ammatory hành động [8], trong khi steroid 16a-hydroxy hóa đã gia tăng hoạt động glucocorticoid [16]. Nev-ertheless, thay thế của nhóm 11b-hydroxyl bằng một nguyên tử clo đã không dẫn đến một sự mất mát của af fi cộng với thụ thể glucocorticoid, do đó cho phép sản xuất các hợp chất có hiệu quả cho việc điều trị các rối loạn về da [16]. 11a-hydroxy hóa cũng được sử dụng trong sản xuất của P. Fernandes et al. / Enzyme và vi sinh vật Công nghệ 32 (2003) 688-705 695 chất trung gian trong quá trình tổng hợp Desogestrel, một contra-ceptive thuốc [72]. Một nghiên cứu chi tiết về ảnh hưởng của các hình thái và sinh lý học của bột viên Rhizopus nigricans trong 11a-hydroxy progesterone được thực hiện [73]. Một thủ tục lặp đi lặp lại hàng loạt tiết lộ rằng việc duy trì hoạt động tốt nhất của bioconversion dẫn từ bột viên thu hoạch ở giai đoạn trồng trọt tăng trưởng tích cực, được nuôi cấy với tốc độ khuấy cao từ một kích thước truyền chất thấp. Do đó sản lượng chuyển đổi cao (trên 90% đối với một nồng độ cơ chất của 0.3gl-1) được quan sát trong hai biotransformations batch tiếp. Sản lượng chuyển đổi trên 95% đã được quan sát thấy trong các 11a-hydroxy của ESTR-4-en-3,17-dione (ED) và canrenone (CR) sử dụng Aspergillus ochraceus, nồng độ chất nền ban đầu khác nhau, từ 10 đến 25gl-1 [74, 75]. Đáng ngạc nhiên, tuy nhiên, sản lượng thu được bioconversion với các chất nền có độ tinh khiết từ 90 đến 95% vượt quá 15-20% những người thu được với 98-100% chất tinh khiết. Ảnh hưởng của thành phần trung vào sự hình thành của các sản phẩm, trong quá trình 11a-hydroxy của 13-etyl-4-gonene-3,17-dione bằng Aspergillus awamori, đã được điều tra và một mô hình toán học để ước lượng sản lượng sản phẩm được phát triển [ 76]. Các 15a-hydroxy của 13b-etyl-4-gonene-3,17-dione, dẫn-ing cho một trung gian trong sản xuất Gestoden, một loại thuốc con-traceptive, cũng đã được nghiên cứu rộng rãi [77,78]. Các bioconversion được tốt do cũng không-AD do Penicillium raistrickii [77]. Các 15b-hydroxyl hóa fi nasteride bởi Cunninghamella elegans ATCC 9244 với sản lượng sản phẩm khoảng 80% được báo cáo [39]. Các hydroxylated- fi nasteride phái sinh là một trung gian hữu dụng trong việc sản xuất 4-aza-steroid, đó là ef fi cient trong hibitors của testosterone 5-reductase. Enzyme này là có trách nhiệm trong việc giảm testosterone để dihydrotestosterone, mà là cuối cùng liên quan đến điều kiện ác tính dẫn đến ung thư tuyến tiền liệt. Các 9a-hydroxyl hóa steroid cũng dẫn đến các hợp chất trung gian hữu dụng trong các ngành công nghiệp pharmaceuti-cal, cụ thể là làm vật liệu khởi đầu cho việc sản xuất các corticoid 9a-halogen [8] và các cấu trúc 11-keto [7]. RestingRhodococcussp.cellshavebeenusedascatalystsfor các bioconversion của AD để 9a-hydroxy-AD (9a-OH-AD) [79-81]. Sự gia tăng trong hoạt động chuyển đổi của phi steroid gây ra Rhodococcus sp. các tế bào đã được hiển thị phụ thuộc vào thời gian tiếp xúc với bề mặt cảm ứng và làm theo một mô hình hoạt động liên tục, 9a-hydroxyl hóa phát triển sớm hơn so với hoạt động 11-khử [80,81]. Do đó một chiến lược dựa trên việc bổ sung các thuốc chẹn tổng hợp protein để các môi trường phát triển trước một bước phát triển trọng yếu của các hoạt động 11-dehydrogenase-un mong muốn đã được đề xuất như một phương tiện để nâng cao hiệu quả của quá trình 9a-hydroxyl hóa [80,81]. Một quy trình cho 7a-hydroxyl của DHEA và pregnelone (PRG) sử dụng Fusarium monil-iforme sợi nấm gần đây đã được trình bày [82]. Đạo hàm 7a-hydroxy của DHEA là tuyên bố được sử dụng-ful trong số bệnh ung thư và các liệu pháp bệnh Alzheimer, tăng đáp ứng miễn dịch và là một tác nhân chống béo phì [82], bên cạnh việc trình bày hành động chống glucocorticoid [82,83]. Hầu hết các công dụng trị liệu được chia sẻ bởi đạo hàm 7a-hydroxy của PRG [82]. Các enzyme phức tạp 7a-hydroxyl hóa chủ yếu là microsome và cấu activ-ity của nó là thấp [83], với sản lượng bioconversion dưới 2% [84]. Cảm ứng với DHEA đã chứng minh hiệu quả cho cả hai biotransfor-mations và sản lượng sản phẩm cho phép là 80 và 65% cho các dẫn xuất 7a-hydroxy của DHEA và PRG, respec-cực, cả hai từ một chất nền nồng 0.4gl-1 [82]. Các fi cộng af cao của 7a-hydroxylase của F. moniliforme để DHEA so với khác 3-hydroxysteroids, cụ thể là PRG, epiandrosterone và estrone, được thêm bằng chứng Cotillon và Mor fi n [84]. Sản lượng thấp hơn và bioconversion fi Speci c tốc độ phản ứng ban đầu, cũng như hằng số Michaelis cao, đã được quan sát khi các phân tử steroid sau đã được kiểm định như là chất nền, so với DHEA [84]. Sản xuất 7a-hydroxyestradiol sử dụng một hydroxylase steroid Cyp7b cũng là tuyên bố [85]. Việc sử dụng steroid 7a-hydroxy trong việc phát triển sản phẩm để chẩn đoán và điều trị các rối loạn tâm thần kinh hoặc miễn dịch đã được khẳng định [85]. 7a-Hydroxy steroid cũng có thể đóng một vai trò trong sự đáp ứng miễn dịch [86]. 7b-hydroxyl hóa fi nasteride bởi Mortierella isabellina cũng đã được báo cáo, tuy nhiên, một (20%) sản lượng sản phẩm thấp đã được quan sát [39]. Các dẫn xuất hydroxy hóa có thể dẫn đến các sản phẩm hữu ích trong việc điều trị ung thư tuyến tiền liệt. Các trang web của các hành động biocatalyst trong hydroxyl steroid đã được chứng minh là phụ thuộc vào lập thể của đế [87]. Cephalosporium aphidicola tốt hydroxy steroid 13b-methyl ở vị trí C11a và C14a, trong khi steroid 13a-hydroxy methyl được ở các vị trí C1A và C7a [87]. Mối quan hệ giữa các đặc điểm cấu trúc của các hợp chất steroid khác nhau và các trang web đặc hiệu fi c 14a-hydroxy của steroid là investi-gated. Progesterone là chất nền thích hợp nhất cho việc sản xuất các chất dẫn xuất 14a-hydroxy sử dụng Tham-nostylum piriforme [88]. Đặc điểm cấu trúc cũng đóng một vai trò quan trọng trong sự hydroxyl hóa 3a, 5-cycloandrostanes sử dụng C. aphidicola [36]. Những bằng chứng đã được thu thập xác định cytochrome P450 như chịu trách nhiệm về steroid phản ứng hydroxy-lation trong cả vi khuẩn và nấm fi lamentous (Bảng 2) . Tuy nhiên, mỗi hydroxyl hóa toàn bộ tế bào nhất định của các phân tử steroid thường bị cản trở bởi sự hình thành của các sản phẩm, một nhược điểm đó có thể có thể bị quá đến nếu một kiến thức chi tiết về các cơ chế của sự chuyển hóa của bioconversion có thể thu được. Trong một công trình tập trung vào các 16a-hydroxy của proges-terone với Streptomyces roseochromogenes, Berrie et al. quan sát sự hình thành của một phụ dihydroxylated sản phẩm phụ, 2b, 16a-dihydroxyprogesterone, được sản xuất trong một tỉ lệ 1: 3,6 với các sản phẩm chính, 16a-hydroxyprogesterone [94]. Sử dụng một hệ thống protein tái tạo, thu được từ tế bào puri fi ed trích S. roseochromogenes, gồm cytochrome P450, cùng với một redoxin ferredoxin-như và một fl Avin chứa redoxin reductase, hai protein vận chuyển điện tử, các tác giả đã có thể thay đổi tỷ lệ