The concentration of IPTG in the li

The concentration of IPTG in the liquid medium showed little depletion from 2 to 6h and decreased rapidly from 6 to 12 h (Fig. 4a). This might be due to the fact that increasing amount of IPTG entered the cells as cell propagation increased. When the cell density was low in the early growth phase, the IPTG accumulation in the cells increased quickly from 2 to 4 h (Fig. 4b). A higher concentration of IPTG in the liquid medium resulted in a higher accumulation inside the cells. The concentration of intracellular IPTG quickly decreased from 4 to 6 h due to the increase in cell density, and the depletion rate of the intracellular IPTG in response to the single dosage induction appeared to be steady from 6 to 12 h. The concentration of intracellular IPTG by multiple additions of 0.1 mM of IPTG every hour from 2 to 6h was close to the concentration of adding single 0.25 mM at 4 h, close to the concentration of adding single 0.5 mM at 5 h, and close to the concentration of adding single 1 mM from 6 to 12 h. The intracellular and extracellular IPTG concentration of every addition mode which is shown in Table 1 has been measured. The results indicated that the variation of extracellular IPTG concentration had no distinction in different addition mode that quickly decreased from 6 h (data not shown). In addition, the intracellular IPTG concentration was also similar from 2 to 6 h. However, the intracellular IPTG concentration distinct a lot with the optimum intracellular concentration when the total dosage of multiple adding IPTG was more than 0.6 mM or less than 0.4 mM. To better analyze the intracellular concentration of IPTG, the mode of multiple additions of 0.1 mM IPTG at different intervals from 2 to 6 h was selected and the total dosage was kept in the range of 0.2–0.6 mM (Fig. 4c). The results confirmed that the optimum total dosage of multiple adding IPTG was in the range of 0.4–0.6 mM, which was consistent with the results of Table 1. Over amount of the intracellular IPTG can be converted into isopropyl 6-O-acetyl-b-D-thiogalactopyranoside by acetyltransferase (LacA) [27–29]. This suggested that the cells need to maintain an optimum intracellular IPTG concentration after 6 h for efficient Pfu DNA polymerase production. The induction strategy using multiple inputs of IPTG can avoid over accumulation of IPTG and,
therefore, reduce the cost of Pfu DNA polymerase production.
Pfu DNA polymerase production in fermentor with multiple IPTG induction strategy

Kết quả (Việt) 2:

Nồng độ IPTG trong môi trường lỏng cho thấy ít cạn kiệt từ 2 đến 6 giờ và giảm nhanh chóng 6-12 h (Hình. 4a). Điều này có thể là do thực tế rằng số lượng ngày càng tăng của IPTG vào các tế bào là tuyên truyền, tế bào tăng lên. Khi mật độ tế bào là thấp trong giai đoạn đầu phát triển, sự tích tụ IPTG trong tế bào tăng lên nhanh chóng 2-4 h (Hình. 4b). Nồng độ cao của IPTG trong môi trường lỏng dẫn đến một sự tích lũy cao hơn bên trong tế bào. Nồng độ IPTG nội bào nhanh chóng giảm 4-6 h do sự gia tăng mật độ tế bào, và tỷ lệ suy giảm của IPTG nội bào để đáp ứng với các kích thích liều duy nhất xuất hiện để được ổn định 6-12 h. Nồng độ IPTG nội bào của nhiều bổ sung 0,1 mM IPTG của mỗi giờ từ 2 đến 6h là gần với nồng độ 0,25 mM thêm duy nhất lúc 4 h, gần với nồng độ thêm đơn 0,5 mM lúc 5 h, và gần nồng độ thêm duy nhất 1 mM 6-12 h. Nồng độ IPTG nội bào và ngoại bào của mỗi chế độ bổ sung được thể hiện trong Bảng 1 đã được đo. Kết quả cho thấy sự thay đổi của nồng độ IPTG bào không có sự phân biệt trong chế độ bổ sung khác nhau một cách nhanh chóng giảm từ 6 h (dữ liệu không hiển thị). Ngoài ra, nồng độ IPTG nội bào cũng giống 2-6 h. Tuy nhiên, nồng độ IPTG nội bào khác biệt rất nhiều với các nồng độ nội bào tối ưu khi tổng liều của nhiều thêm IPTG là hơn 0,6 mM hoặc ít hơn 0,4 mM. Để phân tích tốt hơn nồng độ nội bào của IPTG, chế độ của nhiều bổ sung 0,1 mM IPTG ở khoảng cách khác nhau 2-6 h đã được chọn và tổng liều đã được giữ trong khoảng 0,2-0,6 mM (Fig. 4c). Các kết quả khẳng định rằng tổng liều tối ưu của nhiều thêm IPTG là trong khoảng 0,4-0,6 mM, đó là phù hợp với kết quả của Bảng 1. Trong lượng của IPTG nội bào có thể được chuyển đổi thành isopropyl 6-O-acetyl-BD -thiogalactopyranoside bởi acetyltransferase (Laca) [27-29]. Điều này cho thấy các tế bào cần phải duy trì một nồng độ IPTG nội bào tối ưu sau 6 h cho hiệu quả sản xuất polymerase PFU DNA. Chiến lược sử dụng nhiều đầu vào cảm ứng của IPTG có thể tránh qua tích lũy của IPTG và,
do đó, làm giảm chi phí sản xuất polymerase DNA PFU.
sản xuất polymerase PFU DNA trong lên men với nhiều chiến lược cảm ứng IPTG