To understand the interaction betwe

To understand the interaction between bacterial DNA and CAgNCs,
the DNA binding and DNA damage assays were performed. Results confirmed that CAgNCs can strongly attach to genomic DNA of A. salmonicida
in cells as well as in isolated form. It may be due to adhesion of bacterial
DNA with composite through electrostatic interactions and subsequent
creation of CAgNCs-DNA complex. This results is partially supported by
previously study of iodine-stabilized Cu nanoparticle chitosan composite
and iodinated chitosan-silver nanoparticle composite which binds the
plasmid DNA of E. coli bacteria (Banerjee et al., 2010). In addition, chitosan composite binding with DNA have been reported the inhibition of
mRNA synthesis of the bacteria (Dutta et al., 2009). To understand the
role of CAgNCs on DNA fragmentation, we examined effect of CAgNCs
on DNA degradation and it showed CAgNCs at MIC level can cause extensive cleavage of double-strand DNA that may lead to complete breakdown of genomic DNA. Thus, the complete DNA degradation appeared
only at bactericidal concentration. The DNA degradation by different
CAgNCs concentrations is correlated with cell death of A. salmonicida. Application of CAgNCs in bacterial control or any other therapeutic application in aquaculture, toxicity assessment is essential. Therefore, toxicity
levels of CAgNCs were investigated using zebrafish (Water exposure
Fig. 7. DNA damage and binding activity of CAgNCs. (A) DNA damage analysis by agarose gel electrophoresis of genomic DNA samples extracted from A. salmonicida after CAgNCs treatment. 1: 0; 2:12.5 μg/mL, 3:25 μg/mL; 4: 50 μg/mL; 5: 75 μg/mL of CAgNCs. (B) DNA binding analysis by agarose gel electrophoresis of isolated genomic DNA (6 μg) of A. salmonicida treated
with different amount CAgNCs. 1:1 Kb marker; 2: control genomic DNA; 3: 0.5 μg; 4: 1 μg; 5: 1.5 μg of CAgNCs.
Fig. 8. Effect of CAgNCs on ROS production in rock bream cells. Concentration dependent
intracellular ROS generation was determined by the flow cytometry using H2DCFDA.
428 S.H.S. Dananjaya et al. / Aquaculture 450 (2016) 422–430
and oral administration) and rock bream testis cells (cell viability and
measuring the ROS production). Results prove that CAgNCs is not toxic
to zebrafish at 12.5 mg/kg of body weight/day as a feed ingredient and
rock bream testis cells up to 50 μg/μL.
In conclusion, we synthesized the AgNPs embedded chitosan based
CAgNCs which can effectively inhibit the fish pathogenic A. salmonicida.
The cumulative effects of CAgNCs on physiological changes in cell membrane can be led to increase the cell membrane permeability and loss of
cellular content in bacteria cells. Moreover, gradual release of AgNPs
from chitosan matrix may promote the ROS production which can accelerate the DNA fragmentation, inhibition of protein expression and also
halt the DNA repair and cellular homeostasis thereby causing for bacterial cell death. Therefore, application of significantly low toxic concentration of AgNPs in chitosan matrix in the form of composite (CAgNCs) is
a much superior antibacterial agent in comparison to the use of antibiotics. Moreover, presence of chitosan may have direct effect on immune
activation in fish, hence it could be considered as potential immune stimulant and vaccine adjuvant in aquaculture.

Kết quả (Việt) 1:

Để hiểu sự tương tác giữa vi khuẩn DNA và CAgNCs,ràng buộc DNA và thử nghiệm DNA thiệt hại đã được thực hiện. Kết quả xác nhận rằng CAgNCs mạnh mẽ có thể đính kèm gen DNA A. salmonicidatrong các tế bào cũng như trong hình thức bị cô lập. Nó có thể là do độ bám dính của vi khuẩnDNA với tổng hợp thông qua tương tác tĩnh điện và sau đósáng tạo của CAgNCs-ADN phức tạp. Kết quả này hỗ trợ một phần bởinghiên cứu trước đó của i-ốt ổn định Cu đó chitosan compositevà hỗn hợp đó chitosan-silver iodinated liên kết với cácplasmid DNA của E. coli vi khuẩn (Banerjee và ctv., 2010). Ngoài ra, chitosan hỗn hợp ràng buộc với DNA đã báo cáo sự ức chế củamRNA các tổng hợp của các vi khuẩn (Dutta et al., 2009). Để hiểu cácvai trò của CAgNCs phân mảnh DNA, chúng tôi kiểm tra hiệu quả của CAgNCstrên ADN suy thoái và nó cho thấy CAgNCs MIC cấp có thể gây ra rộng rãi cleavage sợi đôi ADN có thể dẫn đến hoàn thành các phân tích về gen DNA. Do đó, sự suy thoái DNA hoàn toàn xuất hiệnchỉ có ở nồng độ diệt khuẩn. Suy thoái DNA bằng cách khác nhauNồng độ CAgNCs là tương quan với các tế bào chết của A. salmonicida. Các ứng dụng của CAgNCs trong kiểm soát vi khuẩn hoặc bất kỳ khác ứng dụng điều trị trong nuôi trồng thủy sản, độc tính đánh giá là điều cần thiết. Do đó, ngộ độccác cấp độ của CAgNCs đã được nghiên cứu sử dụng zebrafish (nước tiếp xúcHình 7. DNA thiệt hại và ràng buộc các hoạt động của CAgNCs. (A) DNA thiệt hại phân tích bằng agarose gel electrophoresis của gen mẫu DNA được chiết xuất từ A. salmonicida sau khi điều trị CAgNCs. 1: 0; 2:12.5 μg/mL, 3:25 μg/mL; 4:50 μg/mL; 5: 75 μg/mL CAgNCs. (B) DNA ràng buộc phân tích bởi agarose gel electrophoresis cô lập gen DNA (6 μg) của A. salmonicida điều trịvới số tiền khác nhau CAgNCs. Đánh dấu 1:1 kb; 2: kiểm soát DNA gen; 3: 0,5 μg; 4: 1 μg; 5: 1.5 μg của CAgNCs.Hình 8. Tác động của CAgNCs ROS sản xuất trong các tế bào cá vền rock. Tập trung phụ thuộcnội bào ROS thế hệ đã được xác định bởi cytometry dòng chảy bằng cách sử dụng H2DCFDA.428 S.H.S. Dananjaya et al. / nuôi trồng thủy sản 450 (năm 2016) 422-430và uống) và đá cá vền tinh hoàn tế bào (tế bào khả năng tồn tại vàđo sản xuất ROS). Kết quả chứng minh rằng CAgNCs là không độc hạiđể zebrafish 12,5 mg/kg trọng lượng cơ thể/ngày như là một thành phần thức ăn chăn nuôi vàđá cá vền tinh hoàn tế bào lên đến 50 μg/μL.Trong kết luận, chúng tôi tổng hợp AgNPs nhúng chitosan dựaCAgNCs mà có thể có hiệu quả ức chế cá gây bệnh A. salmonicida.Các hiệu ứng tích lũy của CAgNCs về các thay đổi sinh lý trong màng tế bào có thể được dẫn đến làm tăng tính thấm của màng tế bào và mấtdi động nội dung trong tế bào vi khuẩn. Hơn nữa, dần dần phát hành AgNPstừ chitosan ma trận có thể thúc đẩy sản xuất ROS mà có thể đẩy nhanh phân mảnh DNA, ức chế biểu hiện protein và cũngngăn chặn sửa chữa DNA và tế bào homeostasis do đó gây ra cái chết tế bào vi khuẩn. Do đó, là ứng dụng đáng kể thấp nồng độ độc hại của AgNPs trong ma trận chitosan ở dạng hỗn hợp (CAgNCs)một nhiều cấp trên kháng khuẩn đại lý so với sử dụng kháng sinh. Hơn nữa, sự hiện diện của chitosan có thể có tác động trực tiếp miễn dịchkích hoạt trong cá, do đó nó có thể được coi như là chất kích thích miễn dịch tiềm năng và vắc xin bổ trong nuôi trồng thủy sản.

Kết quả (Việt) 2:

Để hiểu sự tương tác giữa DNA của vi khuẩn và CAgNCs,
DNA ràng buộc và các xét nghiệm DNA thiệt hại đã được thực hiện. Kết quả khẳng định rằng CAgNCs mạnh mẽ có thể gắn vào DNA của A. salmonicida
trong tế bào cũng như ở dạng cô lập. Nó có thể là do sự bám dính của vi khuẩn
DNA với hỗn hợp thông qua các tương tác tĩnh điện và sau đó
tạo ra các phức tạp CAgNCs-DNA. Kết quả này một phần được hỗ trợ bởi
trước đây nghiên cứu I-ổn định Củ hạt nano chitosan hợp
và iodinated chitosan-bạc hạt nano composit gắn bó giữa
DNA plasmid của vi khuẩn E. coli (Banerjee et al., 2010). Ngoài ra, chitosan hợp gắn với DNA đã được báo cáo sự ức chế
tổng hợp mRNA của vi khuẩn (Dutta et al., 2009). Để hiểu được
vai trò của CAgNCs về phân mảnh DNA, chúng tôi khảo sát ảnh hưởng của CAgNCs
vào suy thoái DNA và nó cho thấy CAgNCs cấp MIC có thể gây ra sự phân tách rộng lớn của DNA đôi sợi mà có thể dẫn đến sự sụp đổ hoàn toàn của DNA. Như vậy, sự suy thoái ADN hoàn chỉnh xuất hiện
chỉ ở nồng độ diệt khuẩn. Sự thoái hóa DNA bằng nhau
nồng CAgNCs tương quan với tế bào chết của A. salmonicida. Áp dụng CAgNCs kiểm soát vi khuẩn hoặc bất kỳ ứng dụng trị liệu khác trong nuôi trồng thủy sản, đánh giá độc tính là điều cần thiết. Vì vậy, độc tính
cấp của CAgNCs đã được nghiên cứu sử dụng cá ngựa vằn (tiếp xúc với nước
Hình 7. thiệt hại DNA và hoạt động của CAgNCs ràng buộc (A) phân tích thiệt hại DNA bằng điện di gel agarose mẫu DNA chiết xuất từ A. salmonicida sau khi điều trị CAgNCs 1...: 0; 2: 12,5 mg / ml, 03:25 mg / ml; 4:. 50 microgam / ml, 5: 75 mg / mL CAgNCs (B) phân tích ràng buộc DNA bằng điện di gel agarose của DNA bị cô lập (6 mg) A. salmonicida đối xử
với CAgNCs lượng khác nhau 1: 1 Kb dấu; 2:. kiểm soát DNA; 3: 0,5 mg; 4: 1 mg, 5:. 1,5 mg CAgNCs
Hình 8. Ảnh hưởng của CAgNCs về sản xuất ROS trong. bream đá bào. Nồng độ phụ thuộc
thế hệ tế bào ROS được xác định bởi dòng cytometry sử dụng H2DCFDA.
428 SHS Dananjaya et al. / Nuôi trồng thủy sản 450 (2016) 422-430
uống và hành chính) và các tế bào tinh hoàn bream đá (tế bào tồn tại và
đo lường sản xuất ROS ). Kết quả chứng minh rằng CAgNCs là không độc hại
cho cá ngựa vằn ở mức 12,5 mg / kg trọng lượng cơ thể / ngày như một thành phần thức ăn và
các tế bào tinh hoàn bream đá lên đến 50 mg / ml.
Trong kết luận, chúng tôi tổng hợp dựa AgNPs nhúng chitosan
CAgNCs mà hiệu quả có thể ức chế cá gây bệnh A. salmonicida.
các hiệu ứng tích lũy của CAgNCs vào những thay đổi sinh lý trong màng tế bào có thể dẫn đến tăng tính thấm của màng tế bào và mất mát của
nội dung di động trong các tế bào vi khuẩn. Hơn nữa, dần dần phát hành AgNPs
từ ma trận chitosan có thể thúc đẩy sản xuất ROS có thể đẩy nhanh quá trình phân mảnh DNA, ức chế sự biểu hiện protein và cũng
ngăn chặn việc sửa chữa DNA và homeostasis di động gây chết tế bào vi khuẩn. Do đó, ứng dụng của nồng độ độc hại thấp đáng kể của AgNPs trong ma trận chitosan ở dạng hỗn hợp (CAgNCs) là
một tác nhân kháng khuẩn nhiều vượt trội so với việc sử dụng thuốc kháng sinh. Hơn nữa, sự hiện diện của chitosan có thể có ảnh hưởng trực tiếp miễn dịch
hoạt hóa trong cá, do đó nó có thể được coi như là chất kích thích miễn dịch tiềm năng và tá dược của thuốc chủng ngừa trong nuôi trồng thủy sản.