Materials and methods2.1. Inhibitor

Materials and methods
2.1. Inhibitors
Inhibitors with different specificities were tested
in vitro and in vivo (Table 1). Equistatin was
483 B. Oppert et al. / Comparative Biochemistry and Physiology Part C 134 (2003) 481–490
Table 1
Relative inhibition in vitro of casein hydrolysis by Tribolium castaneum larval gut proteinases by selected inhibitors
Inhibitor Target Proteinase(s) 1 IC (mM) 2
50
Leupeptin Serine and cysteine proteases, such as trypsin, papain, plasmin, and cathepsin B
1
0.05 (0.03–0.10)
E-64 Papain and other cysteine proteinases like cathepsin B and L
1
0.11 (0.02–0.85)
Equistatin Papain, cathepsin D
3
0.24 (0.06–0.95)
TLCK Irreversible inhibitor of trypsin. Can inhibit other serine and cysteine proteases such as
1
0.35 (0.20–0.63)
bromelain, ficin, and papain
JCPI Cysteine proteases such as papain
4
0.43 (0.19–0.97)
PCPI Papain and other cysteine proteinases, like cathepsins B, H, and L
5
0.76 (0.17–3.30)
Antipain Papain and trypsin
1
0.83 (0.28–2.50)
Chymostatin a, b, g, d-chymotrypsin
1
3.40 (0.65–18.0)
TPCK Irreversible inhibitor of chymotrypsin. Can inhibit other serine and cysteine proteases
1
24.0 (14.0–41.0)
such as bromelain, ficin, and papain
STI Trypsin, factor Xa, plasmin, and plasma kallikrein
1
58.0 (39.0–86.0)
Pepstatin Aspartic (acid) proteases such as pepsin, renin, cathepsin D, chymosin, and many
1
ND
6
microbial acid proteases
EDTA Metalloproteases
1
NI
6
Bestatin Aminopeptidases
1
NI
Aprotinin Serine proteases, such as plasmin, kallikrein, trypsin, and chymotrypsin
1
NI
As per Boehringer Mannheim Proteinase Inhibitors Technical Guide (http:yybiochem.roche.com).
1
Concentration resulting in 50% inhibition of the uninhibited activity. 95% confidence interval in parentheses.
2
Lenarcic and Turk, 1999.
3
Yoza et al., 2001.
4
Brzin et al., 1988.
5
NI, no inhibition at tested doses; ND, could not be determined from data.
6
purified from the sea anemone, Actinia equina, as
described by Ritonja et al. (1997) and Lenarcic et
al. (1997). A potato cysteine proteinase inhibitor
(PCPI) was prepared according to Brzin et al.
(1988) and Krizaj et al. (1993). Job’s tears cys-
teine proteinase inhibitor (JCPI) was expressed in
Escherichia coli as a His-tagged recombinant pro-
tein and purified by chromatography using nickel–
nitrilotriacetic acid agarose gel (Yoza et al., 2001).
Antipain, aprotinin, bestatin, chymostatin, E-64,
ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA), soybean
Kunitz trypsin inhibitor (STI), tosyl- L -lysine chlo-
romethyl ketone (TLCK), and N-tosyl- L -phenyl-
alanine chloromethyl ketone (TPCK) were
obtained from Sigma Chemical Co., (St. Louis,
MO). Leupeptin and pepstatin were obtained from
Roche Molecular Biochemicals (Indianapolis, IN).

Kết quả (Việt) 2:

Vật liệu và phương pháp
2.1. Các chất ức chế
ức chế với đặc điểm riêng khác nhau đã được thử nghiệm
in vitro và in vivo (Bảng 1). Equistatin là
483 B. Oppert et al. / Hóa sinh và Sinh lý học so sánh Phần C 134 (2003) 481-490
Bảng 1
ức chế tương đối trong ống nghiệm của casein thủy phân bởi Tribolium castaneum proteinases ruột ấu trùng bằng thuốc ức chế chọn
Inhibitor Target proteinase (s) 1 IC (mM) 2
50
Leupeptin Serine và protease cystein như trypsin, papain, plasmin, và cathepsin B
1
0,05 (0,03-0,10)
E-64 Papain và proteinases cysteine ​​khác như cathepsin B và L
1
0,11 (0,02-0,85)
Equistatin Papain, cathepsin D
3
0,24 (0,06-0,95 )
TLCK không thể đảo ngược của chất ức chế trypsin. Có thể ức chế serine và cysteine ​​protease khác như
1
0,35 (0,20-0,63)
bromelain, ficin, và papain
JCPI Cysteine ​​protease như papain
4
0,43 (0,19-0,97)
PCPI Papain và proteinases cysteine ​​khác, như cathepsins B, H, L và
5
0,76 (0,17-3,30)
Antipain Papain và trypsin
1
0,83 (0,28-2,50)
Chymostatin a, b, g, d-chymotrypsin
1
3.40 (0,65-18,0)
TPCK chất ức chế không thể đảo ngược của chymotrypsin. Có thể ức chế serine và cysteine ​​protease khác
1
24.0 (14,0-41,0)
như bromelain, ficin, và papain
STI Trypsin, yếu tố Xa, plasmin, và kallikrein plasma
1
58.0 (39,0-86,0)
Pepstatin Aspartic (acid) protease như pepsin, renin, cathepsin D, chymosin, và nhiều
1
ND
6
vi sinh protease axit
EDTA Metalloproteases
1
NI
6
Bestatin Aminopeptidases
1
NI
Aprotinin Serine protease, như plasmin, kallikrein, trypsin, chymotrypsin và
1
NI
Theo Boehringer Mannheim proteinase Hướng dẫn kỹ thuật Inhibitors (http :. yybiochem.roche.com)
1
tập trung dẫn đến 50% ức chế hoạt động không bị ngăn cấm. 95% khoảng tin cậy trong ngoặc đơn.
2
Lenarcic và Turk, 1999.
3
Yoza et al, 2001..
4
Brzin et al, 1988..
5
NI, không ức chế ở liều thử nghiệm; ND, không thể được xác định từ dữ liệu.
6
tinh chế từ các hải quỳ, Actinia equina, như
được mô tả bởi Ritonja et al. (1997) và Lenarcic et
al. (1997). Một chất ức chế cysteine ​​proteinase khoai tây
(PCPI) đã được chuẩn bị theo Brzin et al.
(1988) và Krizaj et al. (1993). Gióp nước mắt cys-
teine ​​proteinase inhibitor (JCPI) được thể hiện trong
Escherichia coli là một trình tái tổ hợp của ông được gắn thẻ
TEIN và tinh chế bằng sắc ký sử dụng nickel-
axit nitrilotriacetic agarose gel (Yoza et al., 2001).
Antipain, aprotinin, bestatin, chymostatin, E-64,
axit tetraacetic ethylenediamine (EDTA), đậu tương
Kunitz trypsin inhibitor (STI), tosyl- L -lysine chlo-
romethyl ketone (TLCK), và N-tosyl- L -phenyl-
alanine chloromethyl ketone (TPCK) là
thu được từ Sigma Chemical Co., (St. Louis,
MO). Leupeptin và pepstatin được lấy từ
Roche phân tử chất hóa sinh (Indianapolis, IN).