2. Materials and methods2.1. Clonin

2. Materials and methods
2.1. Cloning of HA, NA, and M1 genes
Influenza A/Hong Kong/1073/99 virus was provided
kindly by Dr. K. Subbarao and Dr. N. Cox (Influenza Branch,
CDC, Atlanta, GA). Viral RNA was extracted using Trizol LS (Invitrogen, Carlsbad, CA) under BSL-3 containment conditions. Reverse transcription (RT) and PCR were
performed on extracted viral RNA using the One-Step RTPCR system (Invitrogen) with gene-specific oligonucleotide
primers. The following primer pairs were used for the synthesis of the HA, NA, and M1, respectively: 5

-AGGATCCATGGAAACAATATCACTAATAAC-3

and 5

-AGGTACCTTATATACAAATGTTGCATCTGC-3

;5
-AGAATTCATGAATCCAAATCAAAAGATAATA-3

and 5

-AGATATCTTATATAGACATGAAATTGATATTC-3

; and 5

-AGAATTCATGAGTCTTCTAACCGAGGTCG-3

and 5

-AGGTACCTCACTTGAATCTCTGCATTTGC-3

(ATG codons
shown in italics). Following RT-PCR, cDNA fragments containing influenza HA, NA, and M1 genes were cloned
into the pCR2.1-TOPO vector (Invitrogen). The nucleotide
sequences of the HA, NA, and M1 genes were determined by
DNA sequencing and found to be identical to the previously
published sequences (GenBank AJ404626, AJ404629, and
AJ278647, respectively

Kết quả (Việt) 1:

2. tài liệu và phương pháp
2.1. Nhân bản của HA, NA, và M1 gen
vi-rút cúm A/Hong Kông/1073/99 đã được cung cấp
vui lòng bởi tiến sĩ K. Subbarao và tiến sĩ N. Cox (cúm chi nhánh,
CDC, Atlanta, GA). Virus RNA được chiết xuất bằng cách sử dụng Trizol LS (Invitrogen, Carlsbad, CA) điều kiện ngăn chặn BSL-3. Đảo ngược phiên mã (RT) và Đảng Cộng sản Romania
thực hiện trên RNA virus chiết xuất bằng cách sử dụng hệ thống One-Bước RTPCR (Invitrogen) với gen cụ thể oligonucleotide
chất nền, mồi. Mồi cặp sau đây đã được sử dụng cho việc tổng hợp Hà, NA và M1, tương ứng: 5

- AGGATCCATGGAAACAATATCACTAATAAC - 3

và 5

- AGGTACCTTATATACAAATGTTGCATCTGC - 3

; 5
- AGAATTCATGAATCCAAATCAAAAGATAATA - 3

và 5

- AGATATCTTATATAGACATGAAATTGATATTC - 3

; và 5

-AGAATTCATGAGTCTTCTAACCGAGGTCG-3

và 5

- AGGTACCTCACTTGAATCTCTGCATTTGC - 3

(ATG codons
Hiển thị in nghiêng). Sau RT-Đảng Cộng sản Romania, cDNA mảnh chứa cúm Hà, NA, và M1 gen đã được nhân bản
vào véc tơ pCR2.1-TOPO (Invitrogen). Nucleotide
trình tự gen HA, NA, và M1 đã được xác định bởi
DNA xác định trình tự và tìm thấy là giống hệt nhau để các trước đó
xuất bản trình tự (GenBank AJ404626, AJ404629, và
AJ278647, tương ứng

Kết quả (Việt) 2:

2. Vật liệu và phương pháp
2.1. Nhân bản của HA, NA, và gen M1
cúm A / Hồng Kong/1073/99 virus này được cung cấp
bởi Tiến sĩ K. vui lòng Subbarao và Tiến sĩ N. Cox (cúm Chi nhánh,
CDC, Atlanta, GA). Virus RNA đã được trích xuất bằng Trizol LS (Invitrogen, Carlsbad, CA) theo BSL-3 điều kiện ngăn chặn. Phiên mã ngược (RT) và PCR được
thực hiện trên RNA virus chiết xuất bằng cách sử dụng một bước hệ thống RTPCR (Invitrogen) với oligonucleotide gen cụ thể
mồi. Các cặp mồi sau đây đã được sử dụng để tổng hợp của HA, NA, và M1, tương ứng: 5
?
-AGGATCCATGGAAACAATATCACTAATAAC-3
?
và 5
?
-AGGTACCTTATATACAAATGTTGCATCTGC-3
?
, 5?
-AGAATTCATGAATCCAAATCAAAAGATAATA-3
?
và 5
?
-AGATATCTTATATAGACATGAAATTGATATTC-3
?
; và 5
?
-AGAATTCATGAGTCTTCTAACCGAGGTCG-3
?
và 5
?
-AGGTACCTCACTTGAATCTCTGCATTTGC-3
?
(codon ATG
thể hiện trong in nghiêng). Sau RT-PCR, mảnh cDNA chứa cúm HA, NA, và gen M1 đã được nhân bản vô tính
vào vector pCR2.1-TOPO (Invitrogen). Nucleotide
chuỗi gen HA, NA, và M1 đã được xác định bởi
trình tự DNA và tìm thấy là giống với trước đây
trình tự xuất bản (GenBank AJ404626, AJ404629, và
AJ278647, tương ứng