Chuẩn bị mẫu Mỗi cây thuốc (10- 213 g) được cắt thành những miếng nhỏ và chiết xuất liên tục với MeOH (200-300 ml, trào ngược, 2 h, x 3), MeOH-H2O
(1: 1, 200-300 ml, trào ngược, 2 h, x 2), và nước (200- 300 ml, trào ngược, 2 h). Các giải pháp MeOH được bốc hơi dưới áp suất thấp để cung cấp cho một chiết MeOH, trong khi MeOH-H2O (1: 1) và dung dịch nước đã được cô dưới áp suất và đông khô để cung cấp cho MeOH-H2O (1: 1) và chiết xuất H2O, tương ứng.
Assay Hoạt động của XO XO hoạt động ức chế đã được khảo nghiệm spectrophotometrically điều kiện hiếu khí, dựa trên các thủ tục báo cáo của Noro et al., 8) với fication modi- bằng cách sử dụng đĩa 96 giếng. Hỗn hợp khảo nghiệm gồm 50 ml dung dịch thử, 35 ml 70 mM đệm phosphate (pH = 7,5), và 30 ml dung dịch enzyme (0,01 đơn vị / ml trong 70 mM đệm phosphate, pH = 7.5) đã được chuẩn bị ngay trước khi sử dụng . Sau preincubation ở 25 ° C trong 15 phút, tion phản ứng đã được bắt đầu bằng việc thêm 60 ml chất nền solu- tion (150 m M xanthine trong cùng một bộ đệm). Hỗn hợp khảo nghiệm đã được ủ ở 25 ° C trong 30 phút. Các phản ứng đã được ngừng lại bằng cách thêm 25 ml dung dịch HCl 1 N, và hấp thụ ở 290 nm được đo với một Perkin-Elmer HTS-7000 Bio Assay Reader (Norwalk, CT, USA). Một trống đã được chuẩn bị trong cùng một cách, nhưng giải pháp enzym được thêm vào hỗn hợp khảo nghiệm sau khi thêm 1 N HCl. Một đơn vị của XO được định nghĩa là lượng enzyme cần thiết để sản xuất 1 m mol của uric acid / phút ở 25 ° C. XO hoạt động ức chế được thể hiện qua sự ức chế tỷ lệ phần trăm của XO trong hệ thống khảo nghiệm trên, được tính như (1-B / A) × 100, trong đó A và B là các hoạt động của các enzyme không có và với vật liệu kiểm tra. Giá trị IC50 được đã tính lated từ các giá trị trung bình của dữ liệu từ bốn quyết định. Các chất chiết xuất từ dầu thô đã hòa tan ban đầu trong DMSO fol lowed bằng cách pha loãng với bộ đệm; nồng độ cuối cùng của DMSO là ít hơn 0,25%. Allopurinol, một chất ức chế được biết đến của XO, đã được sử dụng như một điều khiển tích cực. Chiết xuất và phân lập các hợp chất tích cực của các hoa của hoa cúc sinense khô hoa (10,7 g) của C. sinense được chiết xuất với MeOH (300 ml, × 3) dưới trào ngược trong 2 h, để mang lại một chiết MeOH (1,4 g; IC50 giá trị, 5,06 mg / ml). Các MeOH trích xuất (650 mg) là matographed chro- trên gel silica với một MeOH-CHCl3 dung môi thống tem để cung cấp cho sáu phần: fr. 1 (107 mg; IC50,> 100 mg / ml), fr. 2 (152 mg; IC50,> 100 mg / ml), fr. 3 (49,6 mg; IC50, 1,3 mg / ml), fr. 4 (49,6 mg; IC50, 6,3 mg / ml), fr. 5 (49,6 mg; IC50, 11,9 mg / ml), fr. 6 (49,6 mg; IC50, 78,8 mg / ml). Phần 3 đã được tách ra bởi giai đoạn đảo ngược chuẩn bị TLC với CH 3 CN-MeOH-H2O (1: 1: 2) để cung cấp cho caffeic Acid2) (1, 3,6 mg) và luteolin9) (2, 4,9 mg). Phân số 4 đã được tách ra bởi giai đoạn đảo ngược chuẩn bị TLC với CH 3 CN-MeOH- H2O (1: 1: 2) để cung cấp cho eriodictyol10) (3, 1,7 mg), trong khi phần 5 đã bị đảo ngược pha chuẩn bị TLC với ace- tone- CH 3 CN-H2O (2: 2: 7) để cung cấp cho 1,5-di-O-caffeoylquinic acid11) (4, 6,4 mg). Cấu trúc của họ đã được xác định bằng cách phân tích bằng quang phổ tral và so sánh dữ liệu của họ với những người trong văn học. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Xanthine oxidase (XO) là một enzyme đã được investi- gated trong nhiều thập kỷ. Các chất ức chế XO tự nhiên đã được báo cáo từ nhiều loại cây được sử dụng trong các loại thuốc thảo dược truyền thống để điều trị bệnh gút và bệnh thấp khớp ở Trung Quốc, 12) Australia, 13) Bắc Mỹ, 3) Chile, 14) Paraguay, 15) và Panama.16) Việt - nam, một nước sở hữu một lịch sử lâu dài của hệ thống cine Medi truyền thống, cũng có một số cây thuốc được sử dụng cho bệnh gút và bệnh thấp khớp, nhưng không có điều tra có hệ thống đã được báo cáo cho đến bây giờ. Trong nghiên cứu này, 96 nhà máy từ Việt Nam đã được lựa chọn dựa trên sử dụng ethnomedical của họ để điều trị bệnh thấp khớp, viêm khớp và bệnh gút của những mục NA- của khu vực này (Bảng 1) và đã liên tục được chiết xuất với MeOH, MeOH-H2O (1 : 1) và H2O để cung cấp cho 288 chiết xuất từ dầu thô. Tất cả các chất chiết suất đã được thử nghiệm cho XO trong- hibitory hoạt động của họ để xác định các tác nhân chống bệnh gút tiềm năng. Các xét nghiệm được thực hiện tại bốn nồng độ khác nhau của đường Ex- khác nhau, 10-100 mg / ml (Bảng 2). Trong số các chất chiết xuất khảo nghiệm, chiết xuất 188 (65,3%) đã chứng minh hoạt động XO ức chế ở mức 100 mg / ml, trong đó 46 (24,5%) cho thấy tỷ lệ ức chế lớn hơn 50%. Gether Alto-, chiết xuất 168 (58,3%) đã được tìm thấy để được hoạt động tại một nồng của 50 mg / ml, trong số đó có 21 (12,5%) cho thấy hibition trong- của hơn 50%. Tại 25 mg / ml, 146 chiết xuất (50,7%) đang hoạt động, và tám (5,5%) cho thấy một sự ức chế trên 50%. Của các chất chiết xuất khảo nghiệm, 126 (43,8%) hiển thị hoạt động tại 10 mg / ml, trong đó có hai (1,6%) của hơn 50% ức chế. Tổng cộng, 49 [31 MeOH, 15 MeOH-H2O (1: 1), và ba H2O] chiết xuất cho thấy các giá trị IC50 dưới 100 mg / ml. Nói chung, các chất chiết xuất MeOH đã được tìm thấy để chủ động hơn so với MeOH-H2O và H2O chiết xuất. Các chất chiết xuất từ dầu thô chiếm hữu XO hoạt động ức chế với giá trị IC50 ít hơn 20 mg / ml là MeOH chiết xuất của Artemisia vulgaris (IC50, 14,7 mg / ml ) và Caesalpinia pan sap- (IC50, 14,2 mg / ml) khỏi vùng Bảy Núi, Blumea balsamifera (IC50, 6,0 mg / ml) của tỉnh Lâm Đồng, và Chrysanthemum sinense (IC50, 5,1 mg / ml) từ Khánh Hòa tỉnh và các chiết xuất MeOH-H2O của Tetrac- thời scandens từ tỉnh Khánh Hòa (IC50, 15,6 mg / ml). Mặc dù các nhà máy này được sử dụng trong y học dân gian Việt để điều trị bệnh thấp khớp và các bệnh viêm, 17) đây là báo cáo đầu tiên về hoạt động XO ức chế của họ. Phần trên không của A. vulgaris được sử dụng rộng rãi để điều trị bệnh thấp khớp và sốt trong Việt Nam. Các nghiên cứu về các loài thực vật phytochemical này báo cáo rằng nó có chứa một số công flavonoid (ví dụ, apigenin, eriodictyol, kaempferol, luteolin) là thành phần chính, cùng với penes monoter-, sesquiterpene lactones, và compounds.18-20 khác) Flavonoid là chất chống oxy hóa cũng được biết đến và thu hút một lượng DOUS tremen- lợi ích giữa các nhà nghiên cứu có thể đại lý peutic thera- cho bệnh qua trung gian bởi các gốc tự do. Oids Flavon- cũng là chất ức chế hiệu quả của một số enzyme kể cả ing XO, cyclooxygenase, và lipooxigenase.21-23) Như vậy, tác dụng điều trị giả định của A. vulgaris và hoạt động XO ức chế của nó được gán cho thành phần flavonoid của nó. Một nhà máy Asteraceae, B. balsamifera, cũng được báo cáo là có chứa một số flavonoid ức chế XO.21-25) Đó là thú vị để lưu ý rằng gỗ của C. sappan sesses pos- hoạt động sinh học khác nhau như chống oxy hóa, chống viêm, hepatoprotective, gây độc tế bào, hoạt động và hạ đường huyết. Trong số các hoạt động, các hoạt động chống oxy hóa là những nghiên cứu rộng rãi nhất, và được cho là do sự hiện diện của các hợp chất phenolic như brazilin và flavanoids.26,27) Hai hợp chất phenolic được phân lập từ C. sappan, 1 ', 4'- dihydro-spiro [benzofuran-3 (2H), 3 '- [3H-2] benzopyran] - 1', 6 ', 6', 7'-tetrol và 3 - [[4,5-dihydroxy-2- (hydroxymethyl) - phenyl ] methyl] -2,3-dihydro-3,6-benzofurandiol, đã repor- ted để ức chế XO.28) Như vậy, các thành phần phenolic có thể đóng một vai trò thiết yếu trong sự ức chế XO bởi C. sappan. Mặc dù, cả ba chiết xuất của T. scandens cho thấy hoạt động ức chế XO, không có báo cáo khoa học về thành phần hoá học và hoạt tính sinh học. Tuy nhiên, sự hiện diện của chất flavonoid như các dẫn xuất của quercetin, kaempferol, apigenin, luteolin, và myricetin, đã
đang được dịch, vui lòng đợi..
