2 MATERIALS AND METHODS The experim

2 MATERIALS AND METHODS
The experiment was conducted at Biotechnology and
Molecular Breeding Unit of the Asian Vegetable Research
and Development Centre (AVRDC), the World Vegetable
Centre at Taiwan. The tomato accession FLA456 was
crossed with the breeding line CLN2498E. The F1 plants
were back crossed to CLN2498E to obtain the BC1F1
population. Then the parents, F1 and BC1F1 plants were
grown on September, 2009 in a greenhouse for exposing to
viruliferous whiteflies carrying the TYLCV-Thailand virus for
one month before transplanting to another greenhouse. A sequence tagged site (STS) marker linked to Ty-2 gene,
T0302 was used to screen the parents, F1 and BC1F1
populations to identify plants with or without Ty-2 gene
which is a factor responsible for resistance to TYLCV
(Hanson, 2006). Two young leaves of each plant at
seedling stage were collected and kept in a separate well of
the 96-well plate. The samples were collected randomly
from five plants on each of the four tested generations (two
parents, F1 and BC1F1). The plates were placed in Freeze-
Dryer, which was pre-cooled until -50˚C, for 24 hours. Then
the plates were placed in a Minibeadbeater and after
grinding for few seconds the samples looked like very fine
powder. Three buffer stock solutions, which were used in
DNA extraction included solution 1, solution 2 and solution
3 were already prepared in the AVRDC biotechnology
laboratory. DNA isolation was done according to the
procedure given by Tanksley (1995). The polymerase chain
reaction (PCR) procedure was carried out following the

Kết quả (Việt) 1:

2 các vật liệu và phương pháp
thử nghiệm được tiến hành tại công nghệ sinh học và
phân tử giống đơn vị nghiên cứu thực vật Châu á
và phát triển trung tâm (AVRDC), rau thế giới
Trung tâm vào Đài Loan. Việc gia nhập cà chua FLA456 là
vượt qua với dòng giống CLN2498E. Các nhà máy F1
trở lại đã được vượt qua để CLN2498E để có được BC1F1
dân. Sau đó các bậc cha mẹ, Nhà máy F1 và BC1F1
trồng trên Tháng Chín, 2009 trong một nhà kính cho lộ để
viruliferous whiteflies mang theo vi-rút TYLCV-Thái Lan cho
một tháng trước khi cấy để một nhà kính. Một chuỗi được gắn thẻ trang web (STS) đánh dấu liên kết với Ty-2 gen,
T0302 được sử dụng để màn hình các bậc cha mẹ, F1 và BC1F1
quần thể để xác định các nhà máy có hoặc không có Ty-2 gen
đó là một yếu tố chịu trách nhiệm về sức đề kháng cho TYLCV
(Hanson, 2006). Hai lá non của mỗi nhà máy tại
giai đoạn cây giống đã được thu thập và lưu giữ trong một cũng riêng biệt của
tấm 96-Vâng. Các mẫu được thu thập một cách ngẫu nhiên
từ năm nhà máy trên mỗi bốn thử nghiệm thế hệ (hai
phụ huynh, F1 và BC1F1). Các tấm được đặt trong họ đóng băng -
máy sấy, đó là làm mát bằng trước cho đến khi - 50˚C, cho 24 giờ. Sau đó
các tấm được đặt trong một Minibeadbeater và sau khi
mài cho vài giây mẫu trông như rất tốt
bột. Ba đệm giải pháp cổ phiếu, mà đã được sử dụng trong
DNA khai thác bao gồm giải pháp 1, giải pháp 2 và giải pháp
3 đã được chuẩn bị sẵn sàng trong công nghệ sinh học AVRDC
phòng thí nghiệm. Cô lập DNA đã được thực hiện theo các
thủ tục được đưa ra bởi Tanksley (1995). Chuỗi polymerase
phản ứng (PCR) thủ tục được thực hiện sau các